第三单元 免疫凝集类实验 人卫定曲版法
第三单元 免疫凝集类实验
验证实验一直接凝集实验 人卫定曲版法
验证实验一 直接凝集实验
◇颗粒性抗原与相应抗体直接反应,在适当电解 质参与下出现的肉眼可见的凝集现象。 常用的试验方法有玻片疑集法和试管凝集法。 ◆本实验以试管法凝集试验—肥大试验 ( Widal test)验证凝集反应及其特点。 人氏卫士出版 PEOLESM DEAL PUOLRGN成
❖颗粒性抗原与相应抗体直接反应，在适当电解 质参与下出现的肉眼可见的凝集现象。 ❖常用的试验方法有玻片凝集法和试管凝集法。 ❖本 实 验 以 试 管 法 凝 集 试 验 —— 肥 大 试 验 （Widal test）验证凝集反应及其特点
Widal test原理 将已知的颗粒性抗原(伤寒沙门菌)定量 加入到系列倍比稀释的待测血清中,根据各血清 稀释度凝集情况,测定血清中有无相应抗体及其 相对含量。 人卫定曲版法
Widal test原理 将已知的颗粒性抗原（伤寒沙门菌）定量 加入到系列倍比稀释的待测血清中，根据各血清 稀释度凝集情况，测定血清中有无相应抗体及其 相对含量
实验器材和材料 ◆器械 试管、吸管、恒温水浴箱等 令试剂 抗体待测伤寒沙门菌免疫血清、抗原伤寒沙门菌诊 断菌液(7×108/m)、生理盐水 人卫定曲版法
实验器材和材料 ❖ 器械 试管、吸管、恒温水浴箱等 ❖ 试剂 抗体 待测伤寒沙门菌免疫血清、抗原 伤寒沙门菌诊 断菌液（7×108/ml)、生理盐水
实验方法( Widal test 取试管7支,依次编号并做好标记。 2.每支试管中加生理盐水05m 3.倍比稀释血清: 取1:20稀释的待测血清0.5m加入到第1 吸取0.5m加入到第 如此连续稀释荃第6管,混匀 吸取0.5m弃去;第7管不加血清作为阴性对照。 4.加诊断菌液: 加伤寒沙门菌H或O诊断菌液0.5ml,此时各管 血清最终稀释度依次为1:80 160 320 640 1280、1:2560 摆智 卮置37℃水浴2~4h,取出观察结果或放室温过夜 观察结果。 人卫定曲版法
实验方法（Widal test） 1. 取试管7支，依次编号并做好标记。 2. 每支试管中加生理盐水0.5ml。 3. 倍比稀释血清： 取1∶20稀释的待测血清0.5ml加入到第1管，混匀后 吸取0.5ml加入到第2管，如此连续稀释至第6管，混匀后 吸取0.5ml弃去；第7管不加血清作为阴性对照。 4. 加诊断菌液： 每管加伤寒沙门菌H或O诊断菌液0.5ml，此时各管 血清最终稀释度依次为1∶80、1∶160、1∶320、 1∶640、1∶1280、1∶2560 5. 摇匀后置37℃水浴2～4h，取出观察结果或放室温过夜， 次日观察结果
试管凝集法操作程序 试管号 2 3 生理盐水(m)05 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 待测血清(m)0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 伤寒O菌液(m)05 0.5 0.5 0 0.5 0.50.5 血清稀释度1:80 1:160 1:320 6401:12801:2560 人氏卫士出版 PEOLESM DEAL PUOLRGN成
试管凝集法操作程序 试管号 1 2 3 4 5 6 7 生理盐水（ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 待测血清（ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 伤寒O菌液(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 血清稀释度 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560
0.50.50.50.50.5弃掉0.5 单位:1 菌液 234567 血清 混混混混混‖混混 NS 试管凝集试验原理 结果 人卫定曲版法
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5 结 果 1 2 3 4 5 6 7 菌液 试 管 凝 集 试 验 原 理
结果判断 令实验结果 将试管置于有良好光源和黑色背景下,观察管底凝集物的范围和上清 液的浊度,记录凝集程度,判断凝集效价用++++、+++、++、+、 等符号记录凝集效价。 对照管:应无凝集现象 令试验管:“+++”*∵:上清液澄清,细菌全部凝集,凝集块全部沉于管底 +++”:上清液稍混浊,细菌大部分凝集并沉于管底 4++”:上清液较混浊,约50%的细菌凝集并沉于管底 +”:上清液混浊,仅少量细菌凝集 ”:不凝集,液体浊度与对照管相同 ◆血清抗体效价:试验管出现“++”以上的凝集现象即可判断为阳 性;以岀现“++”凝集的最高血清稀释度为该待测血清的抗体效价。 人卫定曲版法
结果判断 ❖ 实验结果 将试管置于有良好光源和黑色背景下，观察管底凝集物的范围和上清 液的浊度，记录凝集程度，判断凝集效价用++++、+++、++、+、 -等符号记录凝集效价。 ❖ 对照管：应无凝集现象 ❖ 试验管：“++++”：上清液澄清，细菌全部凝集，凝集块全部沉于管底 “+++”：上清液稍混浊，细菌大部分凝集并沉于管底 “++”：上清液较混浊，约50%的细菌凝集并沉于管底 “+”：上清液混浊，仅少量细菌凝集 “-”：不凝集，液体浊度与对照管相同 ❖ 血清抗体效价：试验管出现“++”以上的凝集现象即可判断为阳 性；以出现“++”凝集的最高血清稀释度为该待测血清的抗体效价
注意事项 令凝集反应只有在抗原抗体比例适当时,才能出现肉眼可见的反应 般情况下,随着血清浓度的逐渐稀释,凝集反应越来越弱,但在抗 体浓度过高时,反而无凝集现象出现,此为前带现象,出现该情况时, 须加大抗体稀释倍数重新试验。 ◆直接凝集试验也可以用玻片法 以鉴定伤寒沙门菌为例:取洁净载玻片2张,在玻片的左上角分别标明 1”、“2”;加入已知抗体(伤寒沙门菌诊断血清)和待测菌液 (伤寒沙门菌或其他细菌)。 生理盐水 1:40伤寒杆菌诊断学清 生理盐水 1:40伤寒杆菌诊断学清 伤寒杆菌 伤寒杆菌 大肠杆菌 大肠杆菌 玻片凝集试验鉴定伤寒沙门菌 人卫定曲版法
注意事项 ❖ 凝集反应只有在抗原抗体比例适当时，才能出现肉眼可见的反应 一般情况下，随着血清浓度的逐渐稀释，凝集反应越来越弱，但在抗 体浓度过高时，反而无凝集现象出现，此为前带现象，出现该情况时， 须加大抗体稀释倍数重新试验。 ❖ 直接凝集试验也可以用玻片法 以鉴定伤寒沙门菌为例：取洁净载玻片2张，在玻片的左上角分别标明 “1” 、 “2”； 加入已知抗体（伤寒沙门菌诊断血清）和待测菌液 （伤寒沙门菌或其他细菌）。 1 生理盐水 + 伤寒杆菌 1:40 伤寒杆菌诊断学清 + 伤寒杆菌 2 生理盐水 + 大肠杆菌 1:40 伤寒杆菌诊断学清 + 大肠杆菌 玻片凝集试验鉴定伤寒沙门菌