食品微生物学实验指导实验一环境中微生物的检测一、目的要求了解环境中微生物的存生，初步建立从事微生物工作者必须具有的“无菌”概念，并认识微生物细胞的群体结构一菌落二、基本原理微生物个体微小，种类繁多且无处不有，但肉眼不可见。若用营养琼脂平板法进行检测，即可看到细胞繁殖后的群体结构，即菌落。不同的微生物形成的菌落性状不同，它是认识和鉴别各种微生和的依据之一。一般细菌在肉汁营养琼脂上的菌落形态，可从形状、大小、色泽、光泽、隆起度、透明度、表面光滑或粗糙、边缘整齐或不规则等特征加以区别。三、实验材料牛肉膏蛋白陈琼脂平板培养基5副（供4人用）。四、实验步骤1.编号每人取牛肉膏蛋陈琼脂平板培养基1副，用特种铅笔在血盖上注明班组号及操作处理号（同桌4人分别记以1、2、3、4)，另一副平板培养基皿盖上注以“CK”字样（对照），但不许打开血盖。2.处理操作打开皿盖按下列方法各自进行操作：（1）在桌面上，使平板培养基于空气中暴露5～10min，盖上Ⅲ盖。（2）用手指在平板培养基表面轻压3~5点，盖上皿盖。（3）口对平板培养基咳嗽几下，盖上皿盖。（4）取头发1根，在平板培养基表面任一方向划线3～5条，盖上血盖。3.培养操作完毕，将5副培养皿重叠，倒置于28℃温度下培养23d。4.检查取出培养皿，仔细观察各皿中的菌落形态，并统计出每皿菌落数。五、实验报告将实验结果填入表11中
食品微生物学实验指导 实验一 环境中微生物的检测 环境中微生物的检测 环境中微生物的检测 环境中微生物的检测 一、目的要求 了解环境中微生物的存生，初步建立从事微生物工作者必须具有的“无菌”概 念，并认识微生物细胞的群体结构—菌落 二、基本原理 微生物个体微小，种类繁多且无处不有，但肉眼不可见。若用营养琼脂平板法 进行检测，即可看到细胞繁 殖后的群体结构，即菌落。不同的微生物形成的菌落性 状不同，它是认识和鉴别各种微生和的依据之一。 一般细菌在肉汁营养琼脂上的菌落形态，可从形状、大小、色泽、光泽、隆起 度、透明度、表面光滑或粗糙、边缘整齐或不规则等特征加以区别。 三、实验材料 牛肉膏蛋白胨琼脂平板培养基 5 副（供 4 人用）。 四、实验步骤 1.编号 每人取牛肉膏蛋胨琼脂平板培养基 1 副，用特种铅笔在皿盖上注明班、 组号及操作处理号（同桌 4 人分别记以 1、2、3、4），另一副平板培养基皿盖上注以 “CK”字样（对照），但不许打开皿盖。 2.处理操作 打开皿盖按下列方法各自进行操作： （1）在桌面上，使平板培养基于空气中暴露 5～10min，盖上皿盖。 （2）用手指在平板培养基表面轻压 3～5 点，盖上皿盖。 （3）口对平板培养基咳嗽几下，盖上皿盖。 （4）取头发 1 根，在平板培养基表面任一方向划线 3～5 条，盖上皿盖。 3.培养 操作完毕，将 5 副培养皿重叠，倒置于 28℃温度下培养 2～3d。 4.检查 取出培养皿，仔细观察各皿中的菌落形态，并统计出每皿菌落数。 五、实验报告 将实验结果填入表 1—1 中
表1—1环境中微生物检测结果菌落各数优势类群菌落特征（选典型代表描述）号(个/皿)形状大小（mm）色泽光泽高度透明度边缘状况表面状况1234CK*注：菌落特征描述1.形状：园状、丝状、不远见则状、假根状。2.大小：以直径（mm）表示。3.光泽：玻璃状、蜡质状、油脂状。4.高度：扁平、隆起、凸形、乳头形。5.透明度：透明、半透明、不透明。6.边缘状况：光滑、湿润、干燥、皱褶。六、思考题1.各处理皿的菌落性状有何异同？2.环境中微生物检测结果说明什么问题？对你有何启示？
表 1—1 环境中微生物检测结果 *注：菌落特征描述 1.形状：园状、丝状、不远见则状、假根状。 2.大小：以直径（mm）表示。 3.光泽：玻璃状、蜡质状、油脂状。 4.高度：扁平、隆起、凸形、乳头形。 5.透明度：透明、半透明、不透明。 6.边缘状况：光滑、湿润、干燥、皱褶。 六、思考题 1.各处理皿的菌落性状有何异同？ 2.环境中微生物检测结果说明什么问题？对你有何启示？ 皿号 菌落各数 （个/皿） 优势类群菌落特征（选典型代表描述） 形状 大小（mm） 色泽 光泽 高度 透明度 边缘状况 表面状况 1 2 3 4 CK
实验二细菌运动性的观察一、目的要求学习水浸片和悬滴标本片的制作方法，观察细菌的运动。二、基本原理具鞭毛的细菌在液体中借助鞭毛的旋转，使菌体能定向的泳动。幼龄菌活泼，老龄菌运动性差或失去鞭毛不能运动，观察功菌的运动常采用水浸片或悬滴标本片。在显微镜下观察时，应减弱光照强度，并注意区分是细菌的真运动，还是因液体流动引起细菌随水流而动，或呈现无规则、原位颤动的布朗运动，三、实验材料1.菌种培养24～36h的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）菌悬液或枯草水（枯草加水煮沸，加水许蛋白陈，适温培养），或陈尿液。2.器材凹室载玻片，载玻片，盖玻片，滴管，蒸镭水，吸水纸，擦镜纸，显微镜，双层瓶。四、实验步骤（一）水浸片法1.制片用滴管取菌悬液（粘草水或陈尿液）一小滴，置于干净的载玻片中央以倾斜法加上盖玻片（勿使产生气泡）。2.镜检将载玻片置显微镜下，用低倍镜、高倍镜观察细菌运动的情况。（二）悬滴法1.制片取凹室载玻片一张，于凹室周围涂一圈水膜：取干净的盖玻片一张，于中央滴一小滴菌悬液，小心而迅速的翻转盖玻片，使菌液保留园形水珠状。将盖玻片轻放于凹室的上面，使液滴空悬于室内，稍压，使盖玻片边缘与水膜密接，以减少菌液蒸发（图1一15）。2.镜检标本片置于显微镜下，用低倍镜、高倍镜观察。五、实验报告绘出你观察的细菌运动位移轨迹示意图。六、思考题1.显微镜下观察细菌运动时，为何应减弱光线？
实验二 细菌运动性的观察 细菌运动性的观察 细菌运动性的观察 细菌运动性的观察 一、目的要求 学习水浸片和悬滴标本片的制作方法，观察细菌的运动。 二、基本原理 具鞭毛的细菌在液体中借助鞭毛的旋转，使菌体能定向的泳动。幼龄菌活泼， 老龄菌运动性差或失去鞭毛不能运动，观察功菌的运动常采用水浸片或悬滴标本片。 在显微镜下观察时，应减弱光照强度，并注意区分是细菌的真运动，还是因液体流动 引起细菌随水流而动，或呈现无规则、原位颤动的布朗运动。 三、实验材料 1.菌种 培养 24～36h 的枯草芽孢杆菌（Bacillus Bacillus Bacillus Bacillus subtilis subtilis subtilis subtilis）菌悬液或枯草水（枯 草加水煮沸，加水许蛋白胨，适温培养），或陈尿液。 2.器材 凹室载玻片，载玻片，盖玻片，滴管，蒸镏水，吸水纸，擦镜纸，显 微镜，双层瓶。 四、实验步骤 （一）水浸片法 1.制片 用滴管取菌悬液（枯草水或陈尿液）一小滴，置于干净的载玻片中央， 以倾斜法加上盖玻片（勿使产生气泡）。 2.镜检 将载玻片置显微镜下，用低倍镜、高倍镜观察细菌运动的情况。 （二）悬滴法 1.制片 取凹室载玻片一张，于凹室周围涂一圈水膜；取干净的盖玻片一张， 于中央滴一小滴菌悬液，小心而迅速的翻转盖玻片，使菌液保留园形水珠状。将盖玻 片轻放于凹室的上面，使液滴空悬于室内，稍压，使盖玻片边缘与水膜密接，以减少 菌液蒸发（图 1—15）。 2.镜检 标本片置于显微镜下，用低倍镜、高倍镜观察。 五、实验报告 绘出你观察的细菌运动位移轨迹示意图。 六、思考题 1.显微镜下观察细菌运动时，为何应减弱光线？
2.细菌的运动布郎运动有何区别？实验三，显微镜的使用和细菌形态的观察一、目的要求学习并掌握显微镜油镜的使用技术及维护的基本知识。使用油镜观察细菌的几种基本形态。用悬滴法在高倍镜或油镜下观察细菌的运动。显微镜油镜使用的原理。普通光学显微镜的构造1.光学部分：接目镜、接物镜、照明装置（聚光镜、虹彩光圈、反光镜等），它使检视物放大，造成物象.2.机械部分：镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件.它起着支持调节固定等作用。普通光学显微镜的放大倍数和分辨率1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数2.显微镜的分辨率是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为：D=入/2n·sin(a/2)式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。入：可见光的波长（平均0.55μm)n：物镜和被检标本间介质的折射率。α：镜口角（即入射角）。普通光学显微镜油镜使用的原理：油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。二、实验材料显微镜（显微镜灯）、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。细菌三种形态的染色标本。三、实验程序显微镜的使用1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。2.调节光亮度
2.细菌的运动布郎运动有何区别？ 实验三 显微镜的使用和细菌形态的观察 显微镜的使用和细菌形态的观察 显微镜的使用和细菌形态的观察 显微镜的使用和细菌形态的观察 一、目的要求 学习并掌握显微镜油镜的使用技术及维护的基本知识。使用油镜观察细菌的几 种基本形态。用悬滴法在高倍镜或油镜下观察细菌的运动。显微镜油镜使用的原理。 普通光学显微镜的构造 1.光学部分：接目镜、接物镜、照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等). 它使检视物放大,造成物象. 2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节 器、细调节器等部件.它起着支持 调节 固定等作用。 普通光学显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 2.显微镜的分辨率 是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用 公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中 D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。λ：可见光的波长（平均 0.55μm)n: 物镜和被检标本间介质的折射率。α：镜口角（即入射角）。 普通光学显微镜油镜使用的原理:油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻 片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射， 降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不 发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 二、实验材料 显微镜（显微镜灯）、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。细菌三种形态的染 色标本。 三、实验程序 显微镜的使用 1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 2.调节光亮度
3.低倍镜观察：粗调、细调4.依次再进行中倍、高倍观察5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。显微镜保养和使用中的注意事项：1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件，以免损坏。2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。4.观察时，两眼静开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼晴疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。思考题1、油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？2、使用油镜时，为什么必须用镜头油？镜检标本时，为什么先用低倍镜观察而不是直接用高倍镜或油镜观察？
3.低倍镜观察：粗调、细调 4.依次再进行中倍、高倍观察 5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香 柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦 镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部 复原。 显微镜保养和使用中的注意事项： 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时， 特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能 够在左眼观察时，右眼注视绘图。 5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。 思考题 １、油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？ ２、使用油镜时，为什么必须用镜头油？镜检标本时，为什么先用低倍镜观察， 而不是直接用高倍镜或油镜观察？
实验四细菌的简单染色法一、目的要求学习细菌的简单染色法，观察细菌的形态特征。二、基本原理细菌个体小而透明，活细胞与水及玻璃的折光率相差无几，在普通光学显微镜下难以看清。若经染料染色后，增强了细胞折光性，借助颜色的反衬作用，就能看清它们有形状、大小和排列方式。细菌细胞含核酸较多，故一般染色多用碱性染料，如碱性复红（Basicfuchsin）、美蓝（ethyleneblue）、结晶紫（Crystalviolet）、孔雀绿（Malachitegreen）、番红（SsfranineO）等，染料需预先配成染液供使用。简单染色法是用一种染料进行染色。此法仅能显示其形态，而不能辩别其构造。三、实验材料1.菌种培养18～24h的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌（Bac.megathrium）、或培养48h的四联微球菌（Micrococcustetragenus）、金色微球菌（Micrococcusaureus),2.器材石炭酸复红液或美蓝染色液，或结晶紫染色液，或番红染色液，蒸馏水（滴瓶装），载玻片，接种环，酒精灯，火柴，洗瓶，染色盆，染色架，废物缸，吸水纸，擦镜纸，显微镜，双层瓶。四、实验步骤制作细菌标本的步骤：涂片→干燥→加热固定→冷却→染色→水洗→干燥→镜检。1.涂片取干净载玻片一张放于染色架上。于载玻片两处分别滴加蒸馏水一小滴，以无菌操作法用接种环取斜面菌种菌体少许，放于载玻片一处的水滴中混匀，并涂成均匀的薄层；另一滴水同法放入第二种菌体涂勾（图1一7)。2.干燥使涂片在空气中自然风干或在酒精灯焰高处（距火焰8～10cm）微热烘干。3.加热固定将干燥后的涂片用手拿住一端（涂面向上），以钟摆摆动速度通过酒精灯焰2～3次，使加热固定。目的是杀死细菌以接连强细胞着色力，并使细胞粘
实验四 细菌的简单染色法 细菌的简单染色法 细菌的简单染色法 细菌的简单染色法 一、目的要求 学习细菌的简单染色法，观察细菌的形态特征。 二、基本原理 细菌个体小而透明，活细胞与水及玻璃的折光率相差无几，在普通光学显微镜 下难以看清。若经染料染色后，增强了细胞折光性，借助颜色的反衬作用，就能看清 它们有形状、大小和排列方式。 细菌细胞含核酸较多，故一般染色多用碱性染料，如碱性复红（Basic fuchsin fuchsin fuchsin fuchsin）、 美蓝（ethylene ethylene ethylene ethylene blue）、结晶紫（Crystal Crystal Crystal Crystal violet）、 孔雀绿（Malachite Malachite Malachite Malachite green）、 番红 （Ssfranine Ssfranine Ssfranine Ssfranine O）等，染料需预先配成染液供使用。 简单染色法是用一种染料进行染色。此法仅能显示其形态，而不能辩别其构造。 三、实验材料 1.菌种 培养 18～24h 的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌（Bac.megathrium Bac.megathrium Bac.megathrium Bac.megathrium）、 或培养 48h 的四联微球菌（Micrococcus Micrococcus Micrococcus Micrococcus tetragenus tetragenus tetragenus tetragenus）、金色微球菌（Micrococcus Micrococcus Micrococcus Micrococcus aureus）。 2.器材 石炭酸复红液或美蓝染色液，或结晶紫染色液，或番红染色液，蒸馏 水（滴瓶装），载玻片，接种环，酒精灯，火柴，洗瓶，染色盆，染色架，废物缸， 吸水纸，擦镜纸，显微镜，双层瓶。 四、实验步骤 制作细菌标本的步骤：涂片→干燥→加热固定→冷却→染色→水洗→干燥→镜 检。 1.涂片 取干净载玻片一张放于染色架上。于载玻片两处分别滴加蒸馏水一小 滴，以无菌操作法用接种环取斜面菌种菌体少许，放于载玻片一处的水滴中混匀，并 涂成均匀的薄层；另一滴水同法放入第二种菌体涂匀（图 1—7）。 2．干燥 使涂片在空气中自然风干或在酒精灯焰高处（距火焰 8～10cm）微热 烘干。 3.加热固定 将干燥后的涂片用手拿住一端（涂面向上），以钟摆摆动速度通过 酒精灯焰 2～3 次，使加热固定。目的是杀死细菌以接连强细胞着色力，并使细胞粘
着于载玻片上。4.染色将载玻片放回染色架上，待冷却。任取染色剂一种，滴1～2滴于二处的涂面上进行染色。一般碱性复红染色30s～1min，（或用美蓝染色23min，或结晶紫染色1min，或番红染色2~3min）。5.水洗染色完毕，手持染色架略呈倾斜状，用洗瓶从载玻片一端缓慢冲洗染液，让废液流入染色盆中。再用吸水纸吸去载玻片上的残留水滴，自然干燥。6.镜检先用低倍镜寻找标本的最好部位，再换高倍镜、油镜观察，绘图。图115细菌染色标本涂片制作过程1.接种环灭菌2.拔棉塞3.管口灭菌4.取菌5.管口灭菌6.加棉塞7.涂片8.接种环灭菌五、实验报告绘出你镜检的细菌细胞形态图2～3个，注明细菌名称及放大倍数。六、思考题1.简单染色法的原理与步骤是什么？2.涂片的要点是什么？加热固定的目的何在？
着于载玻片上。 4.染色 将载玻片放回染色架上，待冷却。任取染色剂一种，滴 1～2 滴于二处 的涂面上进行染色。一般碱性复红染色 30s～1min，（或用美蓝染色 2～3min，或结 晶紫染色 1min，或番红染色 2～3min）。 5.水洗 染色完毕，手持染色架略呈倾斜状，用洗瓶从载玻片一端缓慢冲洗染 液，让废液流入染色盆中。再用吸水纸吸去载玻片上的残留水滴，自然干燥。 6.镜检 先用低倍镜寻找标本的最好部位，再换高倍镜、油镜观察，绘图。 图 1—15 细菌染色标本涂片制作过程 1.接种环灭菌 2.拔棉塞 3.管口灭菌 4.取菌 5.管口灭菌 6.加棉塞 7.涂片 8.接种环灭菌 五、实验报告 绘出你镜检的细菌细胞形态图 2～3 个，注明细菌名称及放大倍数。 六、思考题 1.简单染色法的原理与步骤是什么？ 2.涂片的要点是什么？加热固定的目的何在？
实验五细菌的革兰氏染色法一、自的要求了解革兰氏染色的原理，掌握革兰氏染色的方法以鉴别细菌。二、基本原理革兰氏染色法是细菌学中一种重要的鉴别染色法。其方法是，细菌涂片先经结晶紫初染，加媒染剂碘液处理，再以脱色剂酒精脱色，最后用复染剂番红复染。若细菌不被脱色而保留紫红色者，称为革兰氏阳性菌或正反应（用G+表示）；若被脱色而染上复染剂的粉红色者，称为革兰氏阴性菌或负反应（用G表示）。革兰氏染色常受菌龄、培养基的PH的染色技术等的影响，一般采用幼龄菌为宜。革兰氏染色机理虽然至今还不完全清楚，但显然与两类细菌的细胞壁成份和结构有密切关系。革兰氏阴性菌的细胞壁中含较多的类脂质，而肽聚糖含量较少。当用酒精脱色时，类脂质被溶解，从而增加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫与碘的复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后则呈现复染剂的颜色。而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少，经酒精脱色后，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，因而细胞仍保留初染时的颜色。三、实验材料1.菌种培养24h的大肠杆菌（E.coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus).2.器材结晶紫染色液，路哥（Lugol）氏碘液，95%酒精，番红或石炭酸复红染色液，载玻片，接种环，酒精灯及其它染色、镜检用物。四、实验步骤革兰氏染色的程序为：水洗水洗水洗涂片→干燥→加热固定→冷却→结晶紫初染→碘液媒染→酒精脱色→番红复染水洗→干燥→镜检。1.涂片、固定取干净载玻片一张放在染色架上，分别在载玻片的两处各滴一小滴蒸馏水，按无菌操作法用接种环分别取大肠杆菌与葡萄球菌少许，各涂于一处的水滴内（作好标记），涂匀、干燥、加热固定
实验五 细菌的革兰氏染色法 细菌的革兰氏染色法 细菌的革兰氏染色法 细菌的革兰氏染色法 一、目的要求 了解革兰氏染色的原理，掌握革兰氏染色的方法以鉴别细菌。 二、基本原理 革兰氏染色法是细菌学中一种重要的鉴别染色法。其方法是，细菌涂片先经结 晶紫初染，加媒染剂碘液处理，再以脱色剂酒精脱色，最后用复染剂番红复染。若细 菌不被脱色而保留紫红色者，称为革兰氏阳性菌或正反应（用 G+表示）；若被脱色而 染上复染剂的粉红色者，称为革兰氏阴性菌或负反应（用 G-表示）。革兰氏染色常受 菌龄、培养基的 PH 的染色技术等的影响，一般采用幼龄菌为宜。 革兰氏染色机理虽然至今还不完全清楚，但显然与两类细菌的细胞壁成份和结 构有密切关系。革兰氏阴性菌的细胞壁中含较多的类脂质，而肽聚糖含量较少。当用 酒精脱色时，类脂质被溶解，从而增加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫与碘的 复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后则呈现复染剂的颜色。而革兰氏阳性菌 细胞壁中肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少，经酒精脱色后，肽聚糖层的孔径 变小，通透性降低，因而细胞仍保留初染时的颜色。 三、实验材料 1.菌种 培养 24h 的大肠杆菌（E.coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus aureus）。 2.器材 结晶紫染色液，路哥（Lugol）氏碘液，95%酒精，番红或石炭酸复红 染色液，载玻片，接种环，酒精灯及其它染色、镜检用物。 四、实验步骤 革兰氏染色的程序为： 水洗 水洗 水洗 涂片→干燥→加热固定→冷却→结晶紫初染→碘液媒染→酒精脱色→番红复染 水洗→干燥→镜检。 1.涂片、固定 取干净载玻片一张放在染色架上，分别在载玻片的两处各滴一 小滴蒸馏水，按无菌操作法用接种环分别取大肠杆菌与葡萄球菌少许，各涂于一处的 水滴内（作好标记），涂匀、干燥、加热固定
2.染色待涂片冷却后染色。先滴加结晶紫染色1min，用水冲去染液，控净水，再滴加碘液媒染1min，倾去碘液，水洗，以95%酒精脱色20～30s（严格掌握时间），水洗，最后滴加番红复染2～3min（或用石炭酸复红复染30s），水洗，干燥3.镜检先用低倍镜寻找标本清晰部位，再换油镜观察细胞形态及染色结果。五、实验报告绘出油镜下的细胞形态图，注明细胞颜色，说明染色反应。六、思考题1.革兰氏染色法哪一步最关键？为什么？2.革兰氏染色法为何要求用幼龄细胞进行染色？
2.染色 待涂片冷却后染色。先滴加结晶紫染色 1min，用水冲去染液，控净水 ， 再滴加碘液媒染 1min，倾去碘液，水洗，以 95%酒精脱色 20～30s（严格掌握时间）， 水洗，最后滴加番红复染 2～3min（或用石炭酸复红复染 30s），水洗，干燥。 3.镜检 先用低倍镜寻找标本清晰部位，再换油镜观察细胞形态及染色结果。 五、实验报告 绘出油镜下的细胞形态图，注明细胞颜色，说明染色反应。 六、思考题 1.革兰氏染色法哪一步最关键？为什么？ 2.革兰氏染色法为何要求用幼龄细胞进行染色？
实验六细菌的荚膜染色法一、自的要求学习荚膜染色技术，观察细菌的荚膜形态。二、基本原理荚膜（Capsule）是某些细菌分泌于细胞壁外的一层粘性物质，具一定形状，其主要成分为多糖，它与染料亲合力很弱，不易着色；但荚膜通透性较好，某些染料可透过荚膜使菌体着色。因此，染色后要菌体周围有一浅色或无色的透明圈，即荚膜。荚膜染色常采用负染色法，也称衬托染色法。此法使菌体和背景显色，来衬托出无色的荚膜。荚膜易溶于水，故染色中尽量少用水。荚膜受热失水易引起皱缩变形，故不必加热固定。也可用酒精划甲醇进行固定。三、实验材料1.菌种在阿须贝(Ashby)无氮培养基上培养3～4d的褐球固氮菌（Az.chroococ-cum）、培养2d胶质芽孢杆菌（B.mucilaginosus）。2.器材石炭酸复红液、黑色素液（或碳素墨水），95%酒清，载玻片，接种环及其它染色、镜检用物。四、实验步骤方法一1.涂片取干净载玻片一张，于中央滴加蒸馏水少许，用接种环以无菌操作法取菌体少许放入蒸馏水中混匀并涂成薄层，晾干。2.固定滴加95%酒精一滴固定1min，倾去，晾干。3.染色加石炭酸复红液染色1min，水洗，晾干。4.涂背景于涂片一端滴少许（半滴）黑色素液，另取一张边缘光滑的载玻片，将其一端放于黑色素液滴中，以30℃角顺势向涂片另一端滑动（图1一16），使涂片成一均匀薄层，自然干燥。5.镜检在高倍镜或油镜下观察。细胞呈红色，背景淡灰色，中间显示无色的透明圈，即荚膜。方法二
实验六 细菌的荚膜染色法 细菌的荚膜染色法 细菌的荚膜染色法 细菌的荚膜染色法 一、目的要求 学习荚膜染色技术，观察细菌的荚膜形态。 二、基本原理 荚膜（Capsule Capsule Capsule Capsule）是某些细菌分泌于细胞壁外的一层粘性物质，具一定形状，其 主要成分为多糖，它与染料亲合力很弱，不易着色；但荚膜通透性较好，某些染料可 透过荚膜使菌体着色。因此，染色后要菌体周围有一浅色或无色的透明圈，即荚膜。 荚膜染色常采用负染色法，也称衬托染色法。此法使菌体和背景显色，来衬托 出无色的荚膜。 荚膜易溶于水，故染色中尽量少用水。荚膜受热失水易引起皱缩变形，故不必 加热固定。也可用酒精划甲醇进行固定。 三、实验材料 1. 菌 种 在 阿 须 贝 (Ashby) (Ashby) (Ashby) (Ashby) 无 氮 培 养 基 上 培 养 3 ～ 4d 的 褐 球 固 氮 菌 （Az.chroococ-cum Az.chroococ-cum Az.chroococ-cum Az.chroococ-cum）、 培养 2d 胶质芽孢杆菌（B.mucilaginosus B.mucilaginosus B.mucilaginosus B.mucilaginosus）。 2.器材 石炭酸复红液、黑色素液（或碳素墨水），95%酒清，载玻片，接种环 及其它染色、镜检用物。 四、实验步骤 方法一 1.涂片 取干净载玻片一张，于中央滴加蒸馏水少许，用接种环以无菌操作法 取菌体少许放入蒸馏水中混匀并涂成薄层，晾干。 2.固定 滴加 95%酒精一滴固定 1min，倾去，晾干。 3.染色 加石炭酸复红液染色 1min，水洗，晾干。 4.涂背景 于涂片一端滴少许（半滴）黑色素液，另取一张边缘光滑的载玻片， 将其一端放于黑色素液滴中，以 30℃角顺势向涂片另一端滑动（图 1—16），使涂片 成一均匀薄层，自然干燥。 5.镜检 在高倍镜或油镜下观察。细胞呈红色，背景淡灰色，中间显示无色的 透明圈，即荚膜。 方法二