单克隆抗体 胡毓杰 516021910641 生物医学工程学院
单克隆抗体 胡毓杰 516021910641 生物医学工程学院
抗体 。抗体，是一种由浆细胞 (效应B细胞)分泌， 被免疫系统用来鉴别与 中和外来物质如细菌、 Ba公百 病毒等的大型Y形蛋白 质，仅被发现存在于脊 忽基端 越变区、 轻链 椎动物的血液等体液中， 及其B细胞的细胞膜表 面[1]。抗体能识别特 灯变区 定外来物的一个独特特 征，该外来目标被称为 牧链区 外体指合区 抗原。 0晴基 磷内二陈经 破基蜘
抗体，是一种由浆细胞 （效应B细胞）分泌， 被免疫系统用来鉴别与 中和外来物质如细菌、 病毒等的大型Y形蛋白 质，仅被发现存在于脊 椎动物的血液等体液中， 及其B细胞的细胞膜表 面 [1] 。抗体能识别特 定外来物的一个独特特 征，该外来目标被称为 抗原
单克隆抗体简介 单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一 特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术 来制备，杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的 基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限 繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。 0 1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术 的基础上，创建立杂交瘤技术 。获得1984年诺贝尔医学奖
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一 特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术 来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的 基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限 繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。 1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术 的基础上，创建立杂交瘤技术 获得1984年诺贝尔医学奖
制备过程 。1.免疫动物：免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠 产生致敏B淋巴细胞的过程。一般选用6-8周龄雌性 BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激 相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏 B淋巴细胞。 。2.细胞融合：采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取 出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。将准备 好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并 加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴 细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞
1. 免疫动物：免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠 产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性 BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激 相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏 B淋巴细胞。 2.细胞融合：采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取 出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备 好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并 加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴 细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞
制备过程 。3选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细 胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未 融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转 移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合的淋 巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其 本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的杂交 瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌昤磷酸核糖 转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能 在HAT培养基中存活和增殖
3.选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细 胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未 融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转 移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋 巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其 本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交 瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖 转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能 在HAT培养基中存活和增殖
制备过程 4.杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化：在HAT培养基中生 长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗 体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有 限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快 速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体 的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其 所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、 亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。 0 5.单克隆抗体的大量制备：单克隆抗体的大量制备主要 采用动物体内诱生法和体外培养法
4.杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化：在HAT培养基中生 长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗 体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有 限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快 速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体 的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其 所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、 亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。 5.单克隆抗体的大量制备：单克隆抗体的大量制备主要 采用动物体内诱生法和体外培养法
应用 。1.检验医学诊断试剂：①病原微生物抗原、 抗体的检测；②肿瘤抗原的检测；③免疫细胞 及其亚群的的检测；④激素测定；⑤细胞因子 的测定。 。2.蛋白质的提纯 。3.肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术
1．检验医学诊断试剂：①病原微生物抗原、 抗体的检测；②肿瘤抗原的检测；③免疫细胞 及其亚群的的检测；④激素测定；⑤细胞因子 的测定。 2．蛋白质的提纯 3． 肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术
优势 杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不 发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异 性、高均一性的抗体。 可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均 一的抗体。 由于可能得到“无限量”的均一性抗体， 所以适用 于以标记抗体为特点的免疫学分析方法， 如IRMA 和ELISA等。 由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可 用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗
杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不 发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异 性、高均一性的抗体。 可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均 一的抗体。 由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用 于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA 和ELISA等。 由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可 用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗
局限性 单克隆抗体固有的亲和性和同限的生物活性限 制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行 沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单 克隆抗体完成。 。单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。 。制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗 体的价格也较高
单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限 制了它的应用范围。由于单克隆抗体不能进行 沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单 克隆抗体完成。 单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。 制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗 体的价格也较高