第章分子发光分析 (Molecular Luminescence Analysis) 41分子荧光及磷光分析 基本原理 分子能级、荧光及磷光的产生 2去活化过程 3定性分析 4影响荧光及荧强度的因素 5.定量分析 、荧光仪器 、磷光分析 磷光的特点 2.低温荧光 3.室温荧光 4.磷光仪器
第4章 分子发光分析 （Molecular Luminescence Analysis） 4.1 分子荧光及磷光分析 一、基本原理 1. 分子能级、荧光及磷光的产生 2. 去活化过程 3. 定性分析 4. 影响荧光及荧强度的因素 5. 定量分析 二、荧光仪器 三、磷光分析 1. 磷光的特点： 2. 低温荧光 3. 室温荧光 4. 磷光仪器
荧光: 16世纪:在矿物和植物提取液中发现荧光 1575年: Monardes-植物愈创木切片黄色水溶液—天兰色荧光; 1852年: Stokes阐明荧光发射机制(分光计观测奎宁和叶绿素的荧光 发现波长稍长于入射光的波长—认识到荧光为“重新发光”而不是漫 射光 1905年:Wood发现气体分子的共振荧光; 1926年: Gaviol a直接测定了荧光寿命; 1923年:荧光X射线光谱; 1964年:原子荧光光谱分析的建立; 1965年:荧光分析在生物分析中广泛应用; 磷光: 15世纪被发现(重晶石在强烈阳光下的发光) 1944年: Lew is提出磷光用于分析的可能性; 1957年: Heirs将磷光分析用于定量分析及多组份混合物分析; 1963年:广泛用于血液及尿液中痕量药物及农药残留量分析;
荧光： 16世纪：在矿物和植物提取液中发现荧光； 1575年：Monardes——植物愈创木切片黄色水溶液——天兰色荧光； 1852年：Stokes阐明荧光发射机制（分光计观测奎宁和叶绿素的荧光， 发现波长稍长于入射光的波长——认识到荧光为“重新发光”而不是漫 射光； 1905年：Wood发现气体分子的共振荧光； 1926年:Gaviola直接测定了荧光寿命； 1923年：荧光X射线光谱； 1964年：原子荧光光谱分析的建立； 1965年：荧光分析在生物分析中广泛应用； 磷光： 15世纪被发现（重晶石在强烈阳光下的发光） 1944年：Lewis提出磷光用于分析的可能性； 1957年：Keirs将磷光分析用于定量分析及多组份混合物分析； 1963年：广泛用于血液及尿液中痕量药物及农药残留量分析；
特点: 1)灵敏度高(1-100ppb):有的可达0.01ppb。WHY??荧光 灵敏度除待测物浓度有关外,还与入射光强度及光度计灵 敏度有关; 2)选择性好 3)方法简单快速,用样量少 4)应用不太广泛
特点： 1) 灵敏度高（1-100ppb)：有的可达0.01ppb。WHY?? 荧光 灵敏度除待测物浓度有关外，还与入射光强度及光度计灵 敏度有关； 2) 选择性好 3) 方法简单快速，用样量少 4) 应用不太广泛
4.1分子荧光分析及磷光分析 、基本原理 分子发光:处于基态的分子吸收能量(电、热、化学和光 能等)被激发至激发态,然后从不稳定的激发态返回 至基态并发射出光子,此种现象称为发光。发光分析 包括荧光、磷光、化学发光、生物发光等 物质吸收光能后所产生的光辐射称之为荧光和磷光。 1.分子能级、荧光及磷光的产生 分子能级=电子能级(E+振动能级(EJ+转动能级(E 其中电子能级包含振转能级,如图
4.1 分子荧光分析及磷光分析 一、基本原理 分子发光：处于基态的分子吸收能量（电、热、化学和光 能等）被激发至激发态，然后从不稳定的激发态返回 至基态并发射出光子，此种现象称为发光。发光分析 包括荧光、磷光、化学发光、生物发光等。 物质吸收光能后所产生的光辐射称之为荧光和磷光。 1. 分子能级、荧光及磷光的产生 分子能级=电子能级(Ee )+振动能级(Ev )+转动能级(Er )。 其中电子能级包含振-转能级，如图
单重态三重态能级低于单重态三重态 (Hund规则) 激发单重态;分子吸收能2 振动弛豫 内转换 量,电子自旋仍然配对, 为单重态,称为激发单 重态,以S,S2…,表示 0 系间 跨越 激发三重态:分子吸收能 量,电子自旋不再配对, 为三重态,称为激发三 重态,以T,T2表示。 基态:电子自旋配对, 多重度=2s+1=1,为单 v=0 重态,以S表示。 荧光外转换 磷光振动弛豫 激发 (熄灭
基态：电子自旋配对， 多重度=2s+1=1，为单 重态，以S0表示。 激发单重态：分子吸收能 量，电子自旋仍然配对， 为单重态，称为激发单 重态，以S1，S2…表示 激发三重态：分子吸收能 量，电子自旋不再配对， 为三重态，称为激发三 重态，以T1，T2….表示。 三重态能级低于单重态 （Hund规则）
2.去活化过程 Deactivation丿 处于激发态分子不稳定,通过辐射或非辐射跃迁等去活 化过程返回至基态。这些过程包括: 1)振动弛豫( vibrational relaxation,IR) 在液相或压力足够高的气相中,处于激发态的分子因碰 撞将能量以热的形式传递给周围的分子,从而从高振动能层 失活至低振动能层的过程,称为振动弛豫。 2)内转换( nternal Conversion,IC 对于具有相同多重度的分子,若较高电子能级的低振动 能层与较低电子能级的高振动能层相重叠时,则电子可在重 叠的能层之间通过振动耦合产生无辐射跃迁,如S2S;T-T
2. 去活化过程（Deactivation） 处于激发态分子不稳定，通过辐射或非辐射跃迁等去活 化过程返回至基态。这些过程包括： 1）振动弛豫（Vibrational Relaxation, VR） 在液相或压力足够高的气相中，处于激发态的分子因碰 撞将能量以热的形式传递给周围的分子，从而从高振动能层 失活至低振动能层的过程，称为振动弛豫。 2）内转换（Internal Conversion，IC） 对于具有相同多重度的分子，若较高电子能级的低振动 能层与较低电子能级的高振动能层相重叠时，则电子可在重 叠的能层之间通过振动耦合产生无辐射跃迁，如S2 -S1；T2 -T1
3)外转换( External Conversion,EC 受激分子与溶剂或其它分子相互作用发生能量转换而使 荧光或磷光强度减弱甚至消失的过程,也称“熄灭”或“猝 灭 4)系间跨跃( intersystem Conversion,ISC) 系间跨跃是发生在两个不同多重态之间的无辐射跃迁, 如从S到T,该跃迁是禁阻的。然而,当不同多重态的两个 电子能层有较大重叠时,处于这两个能层上的受激电子的自 旋方向发生变化,即可通过自旋轨道耦合而产生无辐射跃 迁,该过程称为系间跨跃
3）外转换（External Conversion，EC） 受激分子与溶剂或其它分子相互作用发生能量转换而使 荧光或磷光强度减弱甚至消失的过程，也称“熄灭”或“猝 灭” 。 4）系间跨跃（Intersystem Conversion，ISC） 系间跨跃是发生在两个不同多重态之间的无辐射跃迁， 如从S1到T1，该跃迁是禁阻的。然而，当不同多重态的两个 电子能层有较大重叠时，处于这两个能层上的受激电子的自 旋方向发生变化，即可通过自旋-轨道耦合而产生无辐射跃 迁，该过程称为系间跨跃
5)荧光发射 分子电子从单重激发态(KaSh规则)的最低振动能级在很 短时间(09106)跃迁到基态各振动能层时所产生的光子辐射 称为荧光。由于各种去活化过程的存在,荧光辐射能通常要比激 发能量低,或者说,荧光波长大于激发波长( Stokes效应)。 6)磷光发射 从单重态到三重态分子间发生系间跨跃跃迁后,再经振动弛 豫回到三重态最低振动能层,最后,在104-10s内跃迁到基态的 各振动能层所产生的辐射。 、系间跃,7(高振动层)振动狼,71(纸振动船层)光发射
5）荧光发射 分子电子从单重激发态（Kasha规则）的最低振动能级在很 短时间（10-9 -10-6 s）跃迁到基态各振动能层时所产生的光子辐射 称为荧光。由于各种去活化过程的存在，荧光辐射能通常要比激 发能量低，或者说，荧光波长大于激发波长（Stokes效应）。 6）磷光发射 从单重态到三重态分子间发生系间跨跃跃迁后，再经振动弛 豫回到三重态最低振动能层，最后，在10-4 -10s内跃迁到基态的 各振动能层所产生的辐射。 0 S 光发射 （低振动能层） 1 T 振动弛豫 （高振动能层） 1 T 系间跨跃 1 S ⎯⎯⎯⎯ ⎯→ ⎯⎯⎯⎯⎯→ ⎯⎯⎯⎯⎯→ 磷
3.定性分析 任何荧(磷)光都具有两种特征光谱:激发光谱与发射 光谱。它们是荧(磷)光定性分析的基础。 1)激发光谱 改变激发波长,测量在最强荧(磷)光发射波长处的强 度变化,以激发波长对荧光强度作图可得到激发光谱。 激发光谱形状与吸收光谱形状完全相似,经校正后二者 完全相同!这是因为分子吸收光能的过程就是分子的激发过 程 激发光谱可用于鉴别荧光物质;在定量时,用于选择最 适宜的激发波长
3. 定性分析 任何荧（磷）光都具有两种特征光谱：激发光谱与发射 光谱。它们是荧（磷）光定性分析的基础。 1）激发光谱 改变激发波长，测量在最强荧（磷）光发射波长处的强 度变化，以激发波长对荧光强度作图可得到激发光谱。 激发光谱形状与吸收光谱形状完全相似，经校正后二者 完全相同！这是因为分子吸收光能的过程就是分子的激发过 程。 激发光谱可用于鉴别荧光物质；在定量时，用于选择最 适宜的激发波长
2)发射光谱 激发光谱 IⅡ荧光光谱 发射光谱即荧光光谱。 定波长和强度的激发波长辐照 荧光物质,产生不同波长的强 磷光光谱 度的荧光,以荧光强度对其波 Ⅲ 长作图可得荧光发射光谱。 由于不同物质具不同的特 征发射峰,因而使用荧光发射 光谱可用于鉴别荧光物质。 如右图所示。 Anm
2）发射光谱 发射光谱即荧光光谱。一 定波长和强度的激发波长辐照 荧光物质，产生不同波长的强 度的荧光，以荧光强度对其波 长作图可得荧光发射光谱。 由于不同物质具不同的特 征发射峰，因而使用荧光发射 光谱可用于鉴别荧光物质。 如右图所示。 激发光谱 荧光光谱 磷光光谱