拉普资讯http://www.cqvip.com 中草膏Chinese Traditional and Herbal Drugs第37卷第8期2006年8月 ·1121· ·专论· 中药指纹图谱与灵芝质量标准研究方法 周选围，林娟2，孙小芬2，唐克轩1 (1.上海交通大学农业与生物学院植物生物技术研发中心，复且-交大-诺丁汉植物生物技术研发中心，上海200030： 2.复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室，上海200433) 摘要：中药指纹图谱是中药现代化关键问题之一。根据国内外中草药指纹图谱研究进展，概述了指纹图谱建立中 各项技术及应用，讨论了建立灵芝指纹图谱的一般策略和方法，指出建立指纹图谐过程中应该注意的问题，阑明了 各项技术在灵芝指纹图谱的研究中的应用现状，并对前景进行了分析。分析了建立灵芝指纹图谱的基本思路，为其 建立质量控制标准奠定了基础。 关键词：中药，指纹图谱：灵芝：质量标准 中图分类号：R282,5 文献标识码：A 文章编号：0253-2670(2006)08-1121-05 Fingerprint of Chinese materia medica and research methods of quality standard for Ganoderma spp. ZHOU Xuan-weil,LIN Juan2,SUN Xiao-fen2,TANG Ke-xuan! (1.Plant Biotechnology Research Center,School of Agriculture and Biology,Fundan-SJTU-Nottingham Plant Biotechnology R &D Center,Shanghai Jiao Tong Univesity,Shanghai 200030,China;2.State Key Laboratory of Genetic Engineering,School of Life Sciences,Fudan University,Shanghai 200433,China) Key words:Chinese materia medica;fingerprint;Ganoderma spp.quality standard 灵芝是我国传统的药用真菌，古代为青芝、赤 新药开发的模式和方法，目前已成为国际公认的控 芝、白芝、黄芝、黑芝和紫芝的总称们，现代的灵芝实 制中药或天然药物质量的最有效的手段。 际上是灵芝家族的总称。我国的灵芝科真菌资源十 1中药指纹图谱技术 分丰富，现有4属98种，但目前只有18种被人们开 中药指纹图谱是指中药材经适当处理后，采用 发利用幻；《中国药典》2000年版中首次承认灵芝的 一定的分析手段和仪器测得的、能够标识该中药材 药用价值，作为我国法定中药材的是多孔菌科真菌 及其制剂中的各种组分群体特性的共有峰的图谱， 赤芝Ganoderma lucidum(Leyss.exFr.)Karst.. 是借用DNA指纹图谱发展而来的概念。中药指纹 或紫芝G.sinense Zhao,Xu et Zhang的干燥子实 图谱从不同的角度会有不同的称谓，如化学指纹图 体。卫生部2001年发布的“可用于保健食品的真菌 谱和生物指纹图谱；光谱指纹图谱和色谱指纹图谱 菌种名单”中，有3种灵芝科真菌：灵芝、紫芝和松杉 等。从现代生物技术的观点分析，它应包括中药 灵芝G,tsugae Murrill。.在实际被开发利用的灵芝 DNA指纹图谱、蛋白质指纹图谱和化学指纹图谱。 种类中，有些（如赤芝G.lucidum等）已被人工栽 l.IDNA指纹图谱(DNA fingerprinting):主要依 培，作为制药或保健食品生产原材料出口国外或用 靠分子标记来构建不同品种的指纹图谱，利用聚合 于国内市场；有些种类（如薄盖灵芝G,capense 酶链反应(PCR)技术从不同生物样品人工合成 (Lloyd Teng等)已被用于液体深层培养，获得菌丝 DNA片段，而这种DNA片段的大小、数目因不同 体及其代谢产物生产保健食品、药品。中药指纹图谱 的生物而异，在过去的十多年里，在DNA水平上被 是中药现代化关键问题之一，它不仅是一种中药质 公认对中药进行鉴别的比较标准和可靠的方法主要 量控制模式和技术，更是一种进行中药理论研究和 有随机扩增多态性DNA(RAPD)技术、限制性核酸 收稿日期：2006-01-16 蕃金项目：上海市科学技术委员会标准专项资助(05D205007) 作着简介：周选图(1962一)，男，陕西省成阳市人，教授，硕导，主要从事真菌资源开发利用研究。公开发表论文70余篇，主编出版专著2 部，参编散材专著6部，Te1:(021)65642772Fax:(021)65643552E-maii:xuanwei2hou@163.com xuanweizhou@sjtu.edu.cn
中草|s ChineseTraditionalandHerbalDrugs 第 37卷第 8期 2006年 8月 ·1121· · 专 论 · 中药 指 纹 图谱 与 灵 芝质 量 标 准研 究方 法 周选 围 ，林 娟 ，孙 小芬 ，唐克 轩 (1．上 海 交 通 大 学 农 业 与 生 物 学 院 植 物 生 物 技 术 研 发 中 心 ，复 旦 一交 大一诺 丁 汉 植 物 生 物 技 术 研 发 中心 ，上 海 200030； 2．复旦大学 生命科学学 院 遗 传工 程国家重点实验室 ，上海 200433) 摘 要：中药指纹图谱是 中药现代化关键 问题之一 。根据 国内外 中草药指纹图谱研究进展 ，概述 了指 纹图谱建立中 各 项 技 术 及 应 用 ，讨 论 了建 立 灵 芝 指 纹 图 谱 的 一 般 策 略 和 方 法 ，指 出 建 立 指 纹 图谱 过 程 中应 该 注 意 的 问 题 ，阐 明 了 各项技术 在灵 芝指 纹图谱 的研究 中的应 用现状 ，并对前 景进行 了分析。分析了建立灵芝指纹图谱的基本思路 ，为其 建 立 质 量 控 制 标 准 奠 定 了基 础 。 关键 词 ：中药 ；指 纹 图谱 ；灵 芝 ；质 量标 准 中 图 分 类 号 ：R282．5 文 献 标 识 码 ：A 文 章 编 号 ：0253—2670(2006)08—1121—05 Fingerprintof Chinese m ateria m edica and research m ethods ofquality standard forGanoderma spp． ZH0U Xuan—wei，LIN Juan ，SUN Xiao—fen ，TANG Ke—xuan (1．PlantBiotechnologyResearchCenter，SchoolofAgricultureandBiology，Fundan-SJTU-Nottingham Plant BiotechnologyR ＆ D Center，ShanghaiJiaoTongUnivesity，Shanghai200030，China；2．StateKey LaboratoryofGeneticEngineering，SchoolofLifeSciences，Fudan University，Shanghai200433，China) Keywords：Chinesem ateriam ediea；fingerprint；Ganoderma spp．；quality standard 灵 芝是 我 国 传 统 的 药 用 真 菌 ，古 代 为 青 芝 、赤 芝 、白芝 、黄芝 、黑芝 和紫 芝 的总 称[1]，现代 的灵 芝 实 际上 是灵芝 家族 的 总称 。我 国的灵 芝科 真菌 资源 十 分 丰富 ，现 有 4属 98种 ，但 目前 只有 18种被人 们 开 发 利用 [2；《中国药 典 )2000年版 中首 次 承认 灵 芝 的 药用 价 值 ，作 为 我 国法 定 中药材 的是 多孔 菌 科 真菌 赤 芝 Ganodermalucidum (Leyss．exFr．)Karst． 或 紫 芝 G．sinenseZhao，XuetZhang的 干 燥 子 实 体 。卫生部 2001年 发布 的“可 用于保 健 食品 的真菌 菌种 名单 ”中 ，有 3种 灵芝 科真 菌 ：灵 芝 、紫芝 和松杉 灵 芝 G．tsugaeMurrill。在实 际被 开 发利 用 的灵芝 种类 中 ，有 些 (如 赤 芝 G．1ucidum 等 )已被 人 工 栽 培 ，作为 制药 或 保健 食 品 生 产原 材 料 出 口国外 或用 于 国 内 市 场 ；有 些 种 类 (如 薄 盖 灵 芝 G．capense (LloydTeng等)已被用 于 液体 深层 培养 ，获 得 菌丝 体 及其 代谢 产物 生产保 健食 品 、药 品 。中药 指纹 图谱 是 中药 现代 化关 键 问题 之一 ，它 不 仅是 一 种 中 药质 量 控 制模 式 和技 术 ，更 是 一种 进 行 中 药理 论研 究 和 新 药开 发 的模 式 和方 法 ，目前 已成 为 国际公 认 的控 制 中药或 天然 药物 质量 的最 有效 的手 段 。 1 中药 指纹 图谱技 术 中药指 纹 图谱 是 指 中药材 经 适 当处理 后 ，采 用 一 定 的分析 手 段 和仪 器 测 得 的 、能够 标 识该 中药 材 及其 制 剂 中 的各 种组 分 群 体特 性 的 共有 峰 的图谱 ， 是借 用 DNA 指 纹 图谱 发展 而来 的概 念 。中药 指 纹 图谱 从 不 同 的角度 会 有 不 同 的称 谓 ，如 化学 指 纹 图 谱 和生 物指 纹 图谱 ；光 谱 指 纹 图谱 和 色谱 指 纹 图谱 等 。从 现 代 生 物 技 术 的观 点 分 析 ，它 应 包 括 中 药 DNA 指纹 图谱 、蛋 白质指 纹 图谱 和 化学 指纹 图谱 。 1．1 DNA 指纹 图谱 (DNA fingerprinting)：主要依 靠分 子标 记 来 构建 不 同 品种 的指 纹 图谱 ，利 用 聚合 酶 链 反 应 (PCR)技 术 从 不 同 生 物 样 品 人 工 合 成 DNA 片 段 ，而这 种 DNA 片 段 的大 小 、数 目因不 同 的生 物而 异 ，在过 去 的十 多年 里 ，在 DNA 水 平 上被 公 认对 中药进行 鉴别 的 比较 标 准和 可靠 的方法 主要 有 随机扩 增 多态 性 DNA(RAPD)技 术 、限制 性 核 酸 收 稿 日期 ：2006—01—16 基金项 目：上海市科学技术委员会标 准专项资助 (05DZ05007) 作者简介：周选 围(1962一)，男 ，陕西省咸阳市人 ，教授 ，硕导 ，主要从事真菌资源开发利用研究 。公开 发表论文 7O余篇 ，主编出版 专著 2 部，参编教材专著 6部。 Tel：(021)65642772 Fax：(021)65643552 E—mail：xuanweizhou@163．com xuanweizhou@sjtu．edu．ca 维普资讯 http://www.cqvip.com
拉普资讯http://www.cqvip.com ·1122· 中草黄Chinese Traditional and Herbal Drugs第37卷第8期2006年8月 片段多态性(RFLP)技术、简单序列重复(SSR)技 Adminisgtration)所推荐，化学指纹图谱技术已广泛 术、扩增片段长度多态性(AFLP)技术；另外还包括 应用于各种中药的质量控制之中，在已经确认该品 一些新兴的技术，如序列特征扩增区(sequence 种安全有效的前提下，凭借实用的指纹图谱既可确 characterized amplified regions,SCAR)技术、内部 认产品的真伪，同时又能判断质量的稳定与否1]。 简单序列重复(ISSR)技术、单核苷酸多态性(SNP) 2灵芝质量标准研究方法 技术、相关序列扩增多态性(SRAP)技术和端粒重 对于灵芝生药质量的检测，传统的鉴定方法主 复扩增(TRAP)技术等]。目前已有一些应用DNA 要是依靠形态学鉴定，进行形、色、气、味、质地等外 分子遗传标记技术鉴别植物中药的研究报道，涉及 观性状检测，该方法简便、直接，缺点是主观性强，其 的药材20余种，也涉及其他一些技术，研究的药用 推确性完全取决于检验者的经验判断，且难以鉴定 植物包括人参、淫羊藿、苍术、甘草、东当归、柴胡、大 加工炮制后的碎片或粉末药材。目前则是从生物分 麻、蒲公英等，对其进行基源鉴定、植物亲缘关系及 类学（基原鉴定）、组织学（显微鉴定）、化学（理化鉴 品质评价的研究。这些技术被大量的研究结果证明， 定)角度建立了相对比较客观的检测标准；同时，随 可以更有效地鉴别中药的品种，尤其适合于同属不 着科学技术的发展，细胞学、酶学（同工酶分析）、生 同种类或同种不同变种、变型品系的鉴别~)。 物化学（蛋白质分析及效价评价）山、血清学（免疫 l.2蛋白质指纹图谱(protein fingerprinting):包 测定)]等生物技术亦逐渐应用灵芝鉴定中来。分 括蛋白质电泳（同工酶）技术：等电聚焦电泳法 子生物学研究发现，中药（不含矿物类）所依赖的生 (IEF)、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、酸 物资源一“物种”的多样性是由于其基因多态性的 性-PAGE(A-PAGE)、不连续醋酸尿素聚丙烯酰胺 结果，而基因多态性可在分子水平上检测，它比形 电泳(NAU-PAGE)等方法：基质辅助激光解析电离 态、组织和化学水平的检测更能代表中药变异的遗 飞行时间质谐(MALDI-TOF-MS),肽质量指纹谱 传标记(genetic marker),DNA分子标记技术，也称 技术(peptide mass fingerprinting,PMF)等t。中药 DNA分子诊断技术，是指直接分析遗传物质的多态 蛋白质指纹图谱的研究刚刚起步，国内外仅见利用 性来诊断生物内在基因排布规律及其外在性状表现 电泳技术对为数不多的中药进行了初步的研究，如 规律的技术。 国内报道的对苦杏仁、山桃仁、桃仁、樱桃仁、郁李仁 2.1质量标准的建立是一个系统工程：我国地域辽 5种李属中药的蛋白质电泳研究：利用蛋白质与过 阔，地理和气候条件复杂，灵芝种类繁多，长期以来， 氧化物酶(POD)同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳指 同一灵芝药材多基源情况较为普遍，使灵芝的品种 纹图谱分析鉴别北沙参农家品种；对百合科3种中 十分复杂，呈现出“同一品种不同名称，同一名称不 药的电泳指纹图谱分析；对白首乌蛋白质及同功酶 同品种”的混乱局面，所以建立可靠统一的标准化管 电泳的实验研究等。另对一些有应用前景的蛋白质， 理体系是建立灵芝（包括其他药用真菌）质量标准的 如麻疯树毒蛋白8)、蓖麻毒蛋白)、天麻抗真菌蛋白 前提和基础。另外，从目前市场开发的灵芝产品的情 等的生物技术研究，也对其他中药蛋白质指纹图谱 况来看，有灵芝整个子实体、也有切片（饮片）、灵芝 的研究提供了可以借鉴的思路和方法。 粉（颗粒）、灵芝提取物：从发育时期来看，有菌丝体、 l.3化学指纹图谱(chemical fingerprinting):按所 子实体、孢子粉（破壁与未破壁）及其提取物等。因此 采用的实验方法主要分为两类：色谱指纹图谱和光 就某一种灵芝来说，指纹图谱的建立并利用其进行 (波)谱指纹图谱。色谱指纹图谱主要包括：薄层色谱 质量控制，必须解决的问题很多，如有效成分的量、 (TLC)、高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)和 色谱指纹图谱、DNA指纹图谱、规范化栽培(good 高效毛细管电泳(HPCE);光（波）谱指纹图谱主要 agricultural practice,GAP)、贮藏(good supply/ 包括：紫外光谱(UV)、红外光谐(IR)、核磁共振 storage practice,GSP)和加工(good manufacturing (NMR)、质谱(MS);此外还有采用连用分析技术 practice,GMP);另外还有菌龄、产地、季节、加工方 (如HPLC-MS、GC-MS等)及X射线衍射法获得化 法、重金属量等。所以质量标准的建立是一个多学科 学指纹图谱。光谱和波谱指纹图谐由于灵敏度和选 相互融合、多技术综合运用、多部门（生产、科研、管 择性的限制，所以不能表达中药这样混合体系中各 理)分工协作的一个复杂的过程。 种不同化学成分浓度分布的整体状况，与此相对应， 目前对灵芝的研究，一方面有些相对重要领域 色谱指纹图谱为首选方法，并为SDA(State Drug (如资源、蛋白等领域)因各种原因无人涉足，而另一
·1122· 中草 菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs 第 37卷第8期 2006年 8月 片 段 多 态 性 (RFLP)技 术 、简 单 序 列 重 复 (SSR)技 术 、扩增 片段 长度 多 态性 (AFLP)技 术 ；另外 还 包括 一 些 新 兴 的 技 术 ，如 序 列 特 征 扩 增 区 (sequence characterizedamplifiedregions，SCAR)技 术 、内 部 简 单 序列 重 复 (ISSR)技术 、单 核 苷 酸多 态性 (SNP) 技术 、相 关 序 列 扩 增 多 态 性 (SRAP)技 术 和 端 粒 重 复扩增 (TRAP)技 术等 [3]。目前 已有 一些应 用 DNA 分 子遗 传 标记 技 术 鉴别 植 物 中 药 的研 究报 道 ，涉 及 的药 材 20余 种 ，也 涉 及其 他 一 些技 术 ，研 究 的药 用 植物包 括人 参 、淫 羊藿 、苍 术 、甘 草 、东 当归 、柴胡 、大 麻 、蒲 公 英 等 ，对 其 进 行基 源 鉴 定 、植 物 亲 缘 关 系及 品质评 价 的研究 。这 些技术 被 大量 的研究结 果证 明 ， 可 以更有 效 地鉴 别 中药 的 品种 ，尤 其适 合 于 同属 不 同种类 或 同种不 同变 种 、变 型 品系 的鉴别 [4州]。 1．2 蛋 白质 指 纹 图谱 (proteinfingerprinting)：包 括 蛋 白质 电 泳 (同 工 酶 )技 术 ：等 电 聚 焦 电 泳 法 (IEF)、SDS聚丙 烯酰 胺凝 胶 电泳 (SDS—PAGE)、酸 性一PAGE(A—PAGE)、不 连 续 醋 酸尿 素 聚 丙 烯 酰胺 电泳 (NAU—PAGE)等方法 ；基 质辅 助激光 解析 电离 飞行 时 间 质 谱 (MALDI—T0F—MS)，肽 质 量 指 纹 谱 技 术 (peptidemassfingerprinting，PMF)等口]。中药 蛋 白质 指 纹 图谱 的研 究 刚 刚起 步 ，国 内外 仅 见 利用 电泳技 术 对为 数 不 多 的 中药进 行 了初步 的研 究 ，如 国内报道 的对 苦杏 仁 、山桃 仁 、桃仁 、樱桃 仁 、郁 李仁 5种 李 属 中药 的蛋 白质 电泳 研 究 ；利 用 蛋 白质 与过 氧 化 物 酶 (PoD)同工 酶 的 聚 丙 烯 酰胺 凝 胶 电泳 指 纹 图谱 分 析鉴 别北 沙 参农 家 品种 ；对 百合 科 3种 中 药 的 电泳 指纹 图谱 分 析 ；对 白首 乌 蛋 白质 及 同 功 酶 电泳 的实 验研究 等 。另对一 些有 应用 前景 的蛋 白质 ， 如麻 疯树 毒 蛋 白[8]、蓖麻毒 蛋 白[g]、天麻抗 真 菌 蛋 白 等 的生 物 技术 研究 ，也对 其 他 中药 蛋 白质 指 纹 图谱 的研 究提 供 了可 以借 鉴 的思路 和方 法 。 1．3 化 学指纹 图谱 (chemicalfingerprinting)：按 所 采用 的实验 方 法 主要 分 为两 类 ：色 谱指 纹 图 谱和 光 (波 )谱指 纹 图谱 。色 谱指纹 图谱 主要 包括 ：薄层 色谱 (TLC)、高 效 液 相 色 谱 (HPLC)、气 相 色 谱 (GC)和 高 效 毛 细 管 电泳 (HPCE)；光 (波 )谱 指 纹 图谱 主 要 包 括 ：紫 外 光 谱 (UV)、红 外 光 谱 (IR)、核 磁 共 振 (NMR)、质 谱 (MS)；此 外 还 有 采 用 连 用 分 析 技 术 (如 HPLC—MS、GC—MS等 )及 X射 线衍 射法 获得 化 学指纹 图谱 。光 谱和 波谱 指纹 图谱 由于灵 敏度 和选 择 性 的 限制 ，所 以不 能 表达 中药 这样 混 合 体 系 中各 种不 同化学 成分 浓度分 布 的整体状 况 ，与此 相对 应 ， 色 谱 指 纹 图 谱 为 首 选 方 法 ，并 为 SDA(StateDrug Adminisgtration)所 推荐 。化 学指 纹 图谱 技术 已广泛 应用 于 各 种 中药 的 质量 控 制 之 中 ，在 已经 确认 该 品 种安 全 有效 的前 提 下 ，凭 借 实 用 的指 纹 图谱 既可 确 认产 品 的真伪 ，同时又 能判 断质量 的稳 定 与否 [1。。。 2 灵芝 质量标 准 研究 方 法 对 于 灵芝 生 药 质量 的检 测 ，传 统 的鉴 定 方法 主 要 是 依 靠形 态 学 鉴定 ，进 行 形 、色 、气 、味 、质 地 等外 观 性状 检测 ，该 方法简 便 、直接 ，缺 点是 主观性 强 ，其 准确 性 完全 取决 于 检 验 者 的经 验 判 断 ，且 难 以鉴定 加 工炮 制后 的碎 片或 粉末 药材 。 目前则是 从 生物分 类 学 (基 原 鉴定 )、组织 学 (显 微 鉴定 )、化 学 (理化 鉴 定 )角度 建 立 了相 对 比较 客 观 的 检测 标 准 ；同 时 ，随 着 科 学 技术 的发展 ，细胞 学 、酶 学 (同工 酶分 析 )、生 物 化 学 (蛋 白质 分 析及 效 价 评 价 )[1¨、血 清 学 (免 疫 测定 )[1。等生 物技 术 亦逐 渐 应用 灵 芝鉴 定 中来 。分 子 生物 学研 究 发现 ，中药 (不 含 矿物 类 )所 依 赖 的生 物资 源—— “物 种”的多样 性是 由于 其基 因多 态性 的 结果 ，而 基 因 多 态 性 可 在 分 子 水 平 上 检 测 ，它 比形 态 、组 织 和 化学 水 平 的检 测更 能代 表 中药 变 异 的遗 传标 记 (geneticmarker)。DNA 分 子标记 技术 ，也称 DNA 分子诊 断技 术 ，是 指 直接分 析遗 传物 质 的多态 性来诊 断 生物 内在基 因排 布规 律及 其外 在性状 表现 规律 的技 术 。 2．1 质量 标准 的建立 是一 个 系统 工 程 ：我 国地域 辽 阔 ，地 理 和气候 条件 复杂 ，灵芝 种类 繁多 ，长期 以来 ， 同一 灵 芝药 材 多基 源 情况 较 为 普遍 ，使 灵 芝 的 品种 十分 复 杂 ，呈现 出 “同一 品种 不 同名称 ，同一 名称 不 同 品种 ”的混乱 局面 ，所 以建立 可靠统 一 的标准化 管 理 体 系是建 立灵芝 (包 括其 他药用 真 菌)质量 标准 的 前 提 和基础 。另外 ，从 目前 市场开 发 的灵芝 产 品的情 况 来 看 ，有灵 芝 整 个子 实 体 、也 有切 片 (饮 片 )、灵 芝 粉 (颗 粒 )、灵 芝提 取物 ；从 发育 时期来看 ，有 菌丝体 、 子实体 、孢 子粉 (破壁 与未破 壁 )及 其提 取物 等 。因此 就 某 一种 灵 芝来 说 ，指 纹 图谱 的建立 并 利用 其 进行 质 量 控制 ，必 须 解 决 的 问题 很 多 ，如 有 效 成分 的量 、 色 谱 指 纹 图谱 、DNA 指 纹 图谱 、规 范 化 栽 培 (good agriculturalpractice，GAP)、贮 藏 (good supply／ storagepractice，GSP)和加 工 (goodmanufacturing practice，GMP)；另 外 还 有菌 龄 、产 地 、季 节 、加 工 方 法 、重金 属量 等 。所 以质 量标 准 的建立是 一个 多学科 相互融合 、多技术综合运用、多部门(生产 、科研、管 理 )分工 协作 的一个 复 杂 的过 程 。 目前 对灵 芝 的研究 ，一 方 面 有些 相 对 重要 领 域 (如资 源 、蛋 白等领 域 )因各种原 因无 人涉 足 ，而另一 维普资讯 http://www.cqvip.com
拉普资讯http://www.cqvip.com 中草秀Chinese Traditional and Herbal Drugs第37卷第8期2006年8月 ·1123· 方面，重复投资、重复研究项目（多以孢子粉破壁，多 “功能食品资源”的美誉，所以在世界范围内迅速兴 糖和三萜为主要指标开发产品)的情况仍然存在。科 起灵芝的开发热潮。利用灵芝进行保健食品和药品 研院所之间尚未形成协调分工、联合攻关和资源共 开发主要有3个方面：①以子实体为原料，提取有效 享的局面，科研院所和传统中医药制造产业还没有 成分，制成各种功能性食品或药品②以深层培养液 建立有效的协同机制，科研经费投人不足和以灵芝 为原料，生产保健饮品，或提取药用成分生产药品； 新品种为主的新药品种匮乏成为中国灵芝产业发展 ③以孢子粉为原料，开发系列功能性食品或药 的症结。 品]。尽管从开发的层次来讲利用了灵芝生长发育 2.2灵芝指纹图谱的建立方法：灵芝指纹图谱构建 的各个时期一菌丝体、子实体和孢子等，但涉及的灵 大致可分为原材料的准备、实验数据的获得、数据分 芝种类仅2~3种，仅占目前研究可开发灵芝的 析与评价、指纹图谱的方法检验、图谱的执行等5个 1/4~1/5,占我国灵芝资源的2%~3%。 基本步骤。原料药、生产工艺的规范化是研究色谱指 就灵芝而言化学指纹图谱目前国内外研究较 纹图谱的前提，样本的代表性、色谱条件的优化是其 多，涉及到各类研究手段，但目前公认的还是使用色 专属、可靠、稳定的基本保障。 谱方法，且在这方面也有较为深人的研究14.1)，这 2.2.1建立灵芝质量标准的一般策略：灵芝及其制 里也就不再赘述。而就DNA指纹图谱的研究目前 剂的原料主要来源于菌丝体、子实体和孢子粉这3 在国内处于起步阶段，而如何建立有效的指纹图谱 种不同发育时期的灵芝材料。这些原料和菌种、培养 各家说法不一，但总的基本思路如图1所示。 条件或菌丝体与发酵产物等混合物（菌质）有很大关 成分鉴定 系。有效部位与子实体栽培条件或菌丝体发酵条件 活性分析 农残留粒测 有密切关系。因此，在借用植物药材研究经验的基础 上，还必须考虑到灵芝的特殊性。 DNA抽提 (1)原材料的准备：固定品种、药和部位（菌丝 体、子实体或孢子粉)、产地、采收期和加工方法的 样品的选择 H的基因的选择 10批以上药材，以及足够数量的及处方组成和用量 目的共因片断 固定、生产工艺稳定的中间体或成品。只有保证样品 的扩增 D队A扩增 的代表性，才能保证建立的指纹图谱的可靠性。为避 DNM测序 限制性酶切 免走弯路，应先对现有研究的数据进行分析和整理、 收集不同产地或不同品系的菌株、选择分析仪器并 特异引物的 指纹图谱 CR扩增 指纹图谱 准备实验计划。 (2)分析方法的建立：筛选并建立分析方法（包 图1灵芝DNA指纹图谱的建立策略 括样品、样品的制备或分离、仪器的操作)，验证方法 Fig.1 Formation strategy of DNA fingerprint 的准确度和精确度，建立质量控制体系，建立分析测 of Ganoderma spp. 试方法的档案，提供给国家认定的质量评价单位或 指纹图谱的用途主要有2个，一是鉴别真伪，二 实验室。 是分析优劣，优劣即疗效。DNA指纹图谱所依赖的 (3)实验信息的评价：挑选可应用的技术，建立 技术称为DNA分子标记技术，是指通过直接分析 菌丝体、子实体和孢子粉等不同材料分析的方法，初 遗传物质(DNA)的多态性来诊断生物内在基因排 步界定指纹图谱。 布规律及外在性状表现的技术。此类技术大致分为 (4)标准图谱的确定：对当前完成的指纹图谱草 3类：①以电泳技术和分子杂交技术为核心的 案进行验收测试，用测试规范对已经确认的实验材 RFLP等技术；②以电泳技术和PCR技术为核心的 料进行试验，对试验结果进行周期性的评价，适当时 RAPD/SSR/AP-PCR等DNA指纹和DNA测序技 候转变成可接受的指纹图谱。 术；③前两类技术结合的AFLP、SCAR、DALP、 (5)指纹图谱的执行：选择指纹图谱的尺度，制 RFLPCPCR、RAPD-PCR及最新开发的基因芯片 定操作规范并颁布执行。 诊断技术。单从常用分子标记技术的技术要点来看， 2.2.2建立灵芝质量标准的方法学：灵芝具有多种 SSR和AFLP在物种的多态性程度和技术的重现 营养成分并具有多种生理活性和药理作用，因此有 性方面，无论是在种内还是在种间其多态性程度都
中草 菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs 第 37卷第 8期 2006年 8月 ·1123· 方面 ，重复 投资 、重复 研究 项 目(多 以孢子 粉破 壁 、多 糖和 三萜 为主要 指标 开发 产 品)的情 况仍 然存 在 。科 研 院所 之 间 尚未 形成 协 调 分工 、联 合 攻 关 和资 源 共 享 的局 面 ，科研 院所 和传 统 中医药 制 造 产业 还 没 有 建 立有 效 的协 同机 制 ，科 研 经 费 投入 不 足 和 以灵 芝 新 品种 为主 的新 药品种 匮乏 成为 中国灵芝 产业 发展 的症结 。 2．2 灵芝指 纹 图谱 的建立 方法 ：灵芝 指纹 图谱 构建 大致 可分 为原材 料 的准备 、实验 数据 的获 得 、数 据分 析 与评价 、指纹 图谱 的方 法检验 、图谱 的执行 等 5个 基本 步骤 。原料 药 、生 产工 艺 的规范 化是 研究 色谱 指 纹 图谱 的前 提 ，样本 的代 表性 、色谱 条件 的优 化是其 专属 、可靠 、稳定 的基 本保 障 。 2．2．1 建立灵芝 质 量标 准 的一般 策略 ：灵芝 及其 制 剂 的原 料 主要来 源 于菌 丝 体 、子 实 体 和孢 子 粉这 3 种不 同发 育时 期 的灵 芝材 料 。这 些 原料 和菌 种 、培 养 条件 或菌 丝体 与发 酵产 物等混 合 物 (菌 质 )有 很 大关 系。有效 部位 与子 实体 栽培 条件 或菌 丝体 发酵条 件 有 密切关 系 。因此 ，在借 用植 物药 材研究 经 验 的基 础 上 ，还必 须考 虑到 灵芝 的特殊 性 。 (1)原 材 料 的准 备 ：固定 品 种 、药 和 部 位 (菌 丝 体 、子 实 体 或孢 子 粉 )、产 地 、采 收 期 和 加 工 方 法 的 1O批 以上 药材 ，以及 足够数 量 的及 处方 组 成 和用 量 固定 、生 产工 艺稳定 的中间体 或成 品 。只有保 证样 品 的代表性 ，才 能保证 建立 的指 纹 图谱 的可靠 性 。为避 免走 弯路 ，应先 对现 有研 究 的数据 进行 分析 和整 理 、 收 集不 同产地 或 不 同 品系 的 菌株 、选 择 分 析仪 器 并 准 备实 验计划 。 (2)分 析 方法 的建 立 ：筛 选 并 建 立分 析 方 法 (包 括 样品 、样 品的制 备或分 离 、仪器 的操作 )，验证方 法 的准确 度和精 确度 ，建立 质量 控制 体 系 ，建 立分 析测 试 方法 的档 案 ，提 供 给 国家 认 定 的质 量 评 价单 位 或 实验 室 。 (3)实验信 息 的评 价 ：挑 选 可应 用 的技 术 ，建 立 菌 丝体 、子实体 和孢 子粉 等不 同材 料分 析 的方法 ，初 步界 定 指纹 图谱 。 (4)标准 图谱 的确定 ：对 当前 完成 的指 纹 图谱 草 案进行 验 收测 试 ，用 测 试规 范 对 已经 确 认 的 实验 材 料 进行试 验 ，对 试 验结果 进行 周期 性 的评价 ，适 当时 候 转变 成可接 受 的指纹 图谱 。 (5)指纹 图谱 的执 行 ；选 择 指 纹 图谱 的尺 度 ，制 定 操作 规范并 颁 布执行 。 2．2．2 建立 灵芝 质量 标 准的方 法学 ：灵 芝 具有多 种 营养 成 分并 具有 多 种 生理 活 性 和药 理 作用 ，因此 有 “功 能食 品资 源 ”的美誉 ，所 以在 世 界 范 围 内迅速 兴 起 灵芝 的开 发热潮 。利用灵 芝进 行保 健食 品 和药 品 开 发 主要有 3个方 面 ：① 以子实 体 为原料 ，提取 有效 成 分 ，制成各 种 功能性 食 品或药 品 ；② 以深层 培养 液 为原 料 ，生 产保 健 饮 品 ，或 提取 药 用 成分 生 产 药 品 ； ③ 以 孢 子 粉 为 原 料 ，开 发 系 列 功 能 性 食 品 或 药 品[1引。尽 管从 开发 的层 次来讲 利 用 了灵 芝生 长发 育 的各 个 时期一 菌丝 体 、子实体 和孢 子 等 ，但 涉及 的灵 芝 种 类 仅 2～ 3种 ，仅 占 目前 研 究 可 开 发 灵 芝 的 1／4～ 1／5，占我 国灵芝 资源 的 2 ～3 。 就 灵 芝 而 言 化 学 指 纹 图 谱 目前 国 内外 研 究 较 多 ，涉及 到各 类研究 手 段 ，但 目前 公认 的还 是使用 色 谱 方 法 ，且 在 这方 面 也 有 较 为 深 入 的研 究 [1‘引，这 里 也就 不再 赘 述 。而就 DNA 指纹 图谱 的研 究 目前 在 国 内处 于起 步 阶段 ，而 如何 建 立 有效 的指 纹 图谱 各 家说 法不 一 ，但 总 的基本 思路 如 图 1所 示 。 成分 鉴定 农残留检测 一 曰 一 DA拙 提 样晶的选择 IL————叫开的基因的选 DNA扩 增 指纹图谱 图 1 灵 芝 DNA 指 纹 图谱 的 建 立 策 略 Fig．1 Form ation strategy of DNA fingerprint ofGanodermaspp． 指 纹 图谱 的用途 主要 有 2个 ，一 是鉴 别真 伪 ，二 是分 析 优劣 ，优劣 即疗 效 。DNA 指纹 图谱 所依赖 的 技 术 称 为 DNA 分子 标 记 技 术 ，是 指 通 过 直 接 分 析 遗 传 物 质 (DNA)的 多态 性 来 诊 断 生 物 内在 基 因排 布 规律 及外在 性状 表现 的技 术 。此类 技术 大致 分为 3类 ：① 以 电 泳 技 术 和 分 子 杂 交 技 术 为 核 心 的 RFLP等技 术 ；② 以 电泳技 术 和 PCR技 术 为核 心 的 RAPD／SSR／AP—PCR 等 DNA 指纹 和 DNA 测 序技 术 ；③ 前 两 类 技 术 结 合 的 AFLP、SCAR、DALP、 RFLPCPCR、RAPD—PCR 及 最 新 开 发 的基 因 芯 片 诊 断技 术 。单 从 常用分 子标 记技 术 的技术 要点来 看 ， SSR 和 AFLP在 物 种 的 多 态性 程 度 和技 术 的重 现 性 方 面 ，无 论是 在 种 内还 是 在种 间其 多态 性 程度 都 [一～一～ 维普资讯 http://www.cqvip.com
拉普资讯http://www.cqvip.com ·1124· 中草秀Chinese Traditional and Herbal Drugs第37卷第8期2006年8月 比较高，且又有较好的重现性。当然各种分子标记方 并基本形成了利用指纹图谐控制中药材及其产品质 法是互补的，任何一种标记技术不可能全面分析所 量的基本思路：将药材或制剂的特征指纹图谱转化 有药材，选择方法应视研究对象的实际需要和可能， 为在特定条件下的特征数据组，再按照药材→质量 以及按照不同标记技术的特点和优势而定，目前存 标准→特征图谱制作条件→特征图谱数据组逐级划 在一些误解，以为指纹图谱使用的技术越先进就越 分目录的方式存人数据库，而后将待测样品在相同 好，这种看法是片面的。当然在具体选用技术时，该 条件下的特征数据组输入计算机进行检索并进行相 技术的普及程度和样品分析的成本也是必须考虑的 关检验，就可提供一个对中药材进行快速、准确鉴定 一个因素。 及质量评价的客观标准。中药化学指纹图谱研究的 2.3灵芝研究中指纹图谱技术的应用：中药指纹图 基本思路给灵芝指纹图谱的建立在研究策略上提供 谱应用的主要目的之一就是作为中药质量控制的一 了有益的参考和在技术上的借鉴。 种模式，其一是灵芝药材本身指纹图谱的制定，其二 灵芝在我国的研究和应用有着悠久的历史，已 是利用灵芝加工成的产品的指纹图谱的制定。就灵 积累了丰富的研究经验，随着进一步对灵芝基因组 芝及其产品的质量控制而言，目前大多数是针对灵 学、有效化学成分和药理作用的深人研究，阐明基因 芝的有效成分而采用的化学指纹图谱的方法，如针 组与大分子物质、小分子物质和药理活性之间的关 对灵芝中存在的尿嘧啶、腺嘌呤、腺苷进行的薄层色 系，建立包括DNA、蛋白和化学指纹图谱在内的灵 谱鉴别，或采用紫外分光光度法测定灵芝胶囊中的 芝多维指纹图谱将会成为可能，并用于规范现有的 总核苷1幻；针对灵芝（及其产品）中的多糖，采用可 灵芝产品的生产和指导开发灵芝新产品。但也不容 见-紫外分光光度法测定其多糖量)；也有对灵芝 忽视灵芝指纹图谱的建立还面临许多问题：①材料 子实体中醇溶酸性组分进行比色定量的研究，并认 来源。灵芝属于广布种，收集代表产地的大量样本作 为可以此作为控制灵芝产品质量的标准]；也有利 为研究对象是必须条件之一，然而灵芝在全国各地 用RP-HPLC技术建立了灵芝中所含三萜类组分的 均有分布，这就给“代表产地”的确定带来了困难，而 高效液相指纹图谱，用于灵芝及其制剂的质量控 指纹图谱研究首先需要解决这个源头问题。②新技 制[9,2o)。在DNA指纹图谐的研究中，目前国内主要 术的应用。在灵芝研究中新技术的应用还不够前沿， 利用的是RAPD技术，如唐传红等2利用RAPD 如灵芝的有效成分是一个复杂的体系，在化学指纹 和酯酶同工酶技术对来自国内外的10个灵芝属代 图谱研究中，需要解决分离与检测两大间题，而采用 表菌株进行了遗传多样性分析；罗联忠等2从247 单一分离模式勉为其难，采用传统的检测手段或单 个随机引物中筛选出具有较高多态性扩增检测能力 一联用技术也易丢失大量信息，在生物指纹图谱研 的引物9条，对23株灵芝菌种进行RAPD分析，从 究中，新兴的基因组学指纹图谱及中药蛋白组学指 DNA水平上探讨不同产地的灵芝菌种的差异等。另 纹图谱在灵芝研究中并未涉足。③规范化程度。从 外，也有利用AFLP技术、胶束电动毛细管色谱 灵芝的制种、栽培（或发酵）到有效成分的提取分离、 (micellar electrokinetic chromatography,MEKC) 分析检测，全过程的标准化、规范化程度不够，影响 针对灵芝种间和种内变异进行研究的一些报 实验室之间的重现性，难以推广。④分析处理手段。 道232)，虽然其研究目的并非是针对建立灵芝的指 尽管从理论上讲，存在众多的数据分析处理方法，但 纹图谐而进行的，但说明在灵芝指纹图谱的建立中 就目前的状况来看，还是缺少对大量信息的统计分 这些技术是切实可行的，并在该领域有着一定程度 析处理，指纹图谱的特征性不够明确、具体。 上的技术上的先进性。 4结语 3灵芝指纹图谱的研究前景与问题 近年来，中药指纹图谱的研究取得了极大的进 自从提倡利用指纹图谱对中药产品进行质量评 展，而在灵芝研究和生产方面的应用仍处于初始阶 价以来，国内外许多学者都致力于中药指纹图谱的 段，尽管灵芝产品不论是在药品还是在保健食品上 方法学研究。随着中药材化学成分的分离、分析研究 都得到了一定程度的开发和利用，但总的来讲科技 的多模式、多柱、多元检测技术基础与平台的建立， 含量较低，大多是原始材料的简单加工，有些产品如 药效组分的分析研究及其药效组分的指纹图谱的建 灵芝孢子粉、孢子油等缺乏统一的国家标准，出现许 立，以及多水平评价的方法学的建立和发展，中药化 多“作坊式”的生产厂家，给相关管理部门带来了一 学指纹图谱已趋于成熟并得到了较为广泛的应用， 定的困难，严重影响了整个灵芝产业的声誉。迄今为
·1124· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs 第 37卷第8期 2006年 8月 比较高 ，且 又有较 好 的重现性 。当然各 种分子 标记 方 法 是 互补 的 ，任何 一 种 标记 技 术 不 可能 全 面分 析 所 有药材 ，选择 方法 应 视研究 对象 的实 际需要 和 可能 ， 以及 按 照不 同标 记 技 术 的特 点 和优 势 而 定 ，目前 存 在一 些 误解 ，以为 指纹 图谱 使用 的技 术越 先 进 就越 好 ，这种看 法是 片面 的 。当然 在具体 选用 技术 时 ，该 技 术的普 及程度 和 样 品分析 的成本 也是 必须 考虑 的 一 个 因素 。 2．3 灵芝 研究 中指 纹 图谱技 术 的应用 ：中药 指纹 图 谱 应用 的主 要 目的之一 就是 作 为中药 质量控 制 的一 种 模式 ，其一 是灵芝 药 材本 身指纹 图谱 的制 定 ，其 二 是 利用 灵芝 加工 成 的产 品 的指纹 图谱 的制 定 。就灵 芝 及 其产 品 的质 量 控 制而 言 ，目前 大多 数 是针 对 灵 芝 的有效 成 分而 采 用 的化 学 指纹 图谱 的方 法 ，如针 对灵芝 中存 在 的尿嘧 啶 、腺 嘌 呤 、腺苷 进行 的薄 层色 谱 鉴 别 ，或采 用 紫外 分 光 光度 法 测 定灵 芝 胶囊 中 的 总 核 苷口 ；针 对 灵 芝 (及 其 产 品 )中 的多 糖 ，采 用 可 见一紫 外 分 光 光 度 法 测 定 其 多糖 量 [】；也 有 对 灵 芝 子 实体 中醇 溶 酸性 组 分 进行 比色 定量 的研 究 ，并认 为 可 以此作 为控 制 灵芝 产 品质 量 的标 准[1胡；也 有 利 用 RP—HPLC技 术建立 了灵芝 中所 含 三萜类 组 分 的 高 效 液 相 指 纹 图谱 ，用 于 灵 芝 及 其 制 剂 的 质 量 控 制 [】 。。。在 DNA 指 纹 图谱 的研究 中 ，目前 国内主要 利 用 的 是 RAPD 技 术 ，如 唐 传 红 等[21]利 用 RAPD 和 酯酶 同工酶 技 术对 来 自国 内外 的 1O个 灵 芝 属代 表 菌株 进 行 了遗 传 多样 性 分 析 ；罗 联 忠 等[2]从 247 个 随机 引物 中筛选 出具 有较 高多态性 扩 增检 测能 力 的引物 9条 ，对 23株 灵芝 菌种 进 行 RAPD 分析 ，从 DNA 水平 上探 讨不 同产 地 的灵芝 菌种 的差异 等 。另 外 ，也 有 利 用 AFLP技 术 、胶 束 电 动 毛 细 管 色 谱 (micellar electrokinetic chromatography。M EKC) 针 对 灵 芝 种 间 和 种 内 变 异 进 行 研 究 的 一 些 报 道 [23~24]，虽 然 其研 究 目的并 非 是针 对 建立 灵 芝 的 指 纹 图谱 而 进行 的 ，但 说 明在 灵 芝指 纹 图谱 的建 立 中 这 些技 术 是切 实 可行 的 ，并 在该 领 域 有 着一 定 程度 上 的技 术上 的先进性 。 3 灵芝 指纹 图谱 的研 究前景 与 问题 自从 提倡 利用指 纹 图谱对 中药 产 品进行 质量 评 价 以来 ，国 内外 许 多学 者 都 致 力 于 中药 指纹 图谱 的 方法 学研 究 。随着 中药材 化学 成分 的分 离 、分 析研 究 的多模 式 、多 柱 、多元 检 测 技 术基 础 与平 台的 建立 ， 药效 组分 的分 析研究 及其 药效 组分 的指 纹 图谱 的建 立 ，以及 多水平 评价 的方 法学 的 建立和 发展 ，中药 化 学 指 纹 图谱 已趋 于 成熟 并 得 到 了较 为 广泛 的应用 ， 并 基本 形 成 了利 用指 纹 图谱控 制 中药材及 其产 品质 量 的基本 思路 ：将药 材或 制 剂 的特 征 指纹 图谱 转化 为在 特 定条 件 下 的特 征 数 据组 ，再 按 照药 材 一 质量 标准一 特 征 图谱 制作 条件 一 特征 图谱数 据组 逐级 划 分 目录 的方式 存 人数 据 库 ，而 后将 待 测 样 品在 相 同 条件 下 的特征 数据 组输 入计 算机进 行检 索并 进行 相 关 检验 ，就可 提供 一个 对 中药 材进 行快 速 、准确 鉴定 及 质量评 价 的客观 标准 。中药化 学指 纹 图谱 研 究 的 基本 思路 给 灵芝指 纹 图谱 的建立 在研 究策 略上 提供 了有益 的参 考和在 技 术上 的借 鉴 。 灵 芝 在 我 国 的研 究 和应 用 有 着悠 久 的历 史 ，已 积 累了 丰 富的研 究 经 验 ，随 着进 一 步 对灵 芝 基 因组 学 、有 效化学 成分 和药 理作 用 的深入 研究 ，阐明基 因 组 与 大分 子 物质 、小 分 子 物质 和 药 理 活性 之 间 的关 系 ，建立 包 括 DNA、蛋 白和化 学 指 纹 图谱 在 内 的灵 芝 多 维指 纹 图谱 将 会 成 为可 能 ，并 用 于规 范 现 有 的 灵芝产 品 的生产 和 指导开 发灵 芝新产 品 。但也 不容 忽 视灵芝 指 纹 图谱 的建立 还 面 临许 多 问题 ：① 材料 来源 。灵芝 属于 广布种 ，收 集代 表产地 的大 量样 本作 为研 究 对象 是 必须 条 件 之一 ，然 而 灵芝 在 全 国 各地 均有分 布 ，这就 给“代 表产地 ”的确定 带来 了 困难 ，而 指纹 图谱 研究 首先需 要解 决这 个源 头 问题 。② 新技 术 的应用 。在灵芝 研 究 中新 技 术 的应 用还 不够 前沿 ， 如灵 芝 的有 效 成分 是 一 个复 杂 的 体 系 ，在 化 学指 纹 图谱 研究 中 ，需 要解 决分 离与检 测两 大 问题 ，而 采用 单一 分 离模 式勉 为其 难 ，采用 传 统 的检 测 手 段或 单 一 联用 技术 也 易 丢失 大 量信 息 ；在 生 物指 纹 图谱 研 究 中 ，新 兴 的基 因组学 指 纹 图谱 及 中药 蛋 白组学 指 纹 图谱在 灵芝 研究 中并未 涉 足 。③ 规范 化程度 。从 灵芝 的制 种 、栽 培 (或 发酵 )到 有效成 分 的提取 分离 、 分 析检 测 ，全过 程 的标 准 化 、规 范 化程 度 不够 ，影 响 实验 室之 间 的重现性 ，难 以推 广 。④ 分析 处理 手段 。 尽管从 理 论上讲 ，存 在众 多 的数 据分 析处 理方 法 ，但 就 目前 的状 况 来 看 ，还 是 缺 少对 大 量 信息 的统 计分 析处 理 ，指 纹 图谱 的特征性 不 够明确 、具体 。 4 结语 近 年来 ，中药 指纹 图谱 的研 究 取 得 了极 大 的进 展 ，而在 灵 芝研 究 和生 产 方 面 的应 用 仍处 于 初 始 阶 段 ，尽 管灵 芝产 品不论 是在 药 品还 是 在保 健 食 品 上 都 得 到 了一 定 程度 的开 发 和 利用 ，但 总 的来 讲 科 技 含 量较低 ，大 多是原 始 材料 的简单 加工 ，有些 产 品如 灵芝 孢子 粉 、孢 子油 等 缺乏统 一 的 国家 标准 ，出现 许 多 “作 坊式 ”的生 产厂 家 ，给 相 关管 理 部 门带 来 了一 定 的 困难 ，严 重影 响 了整 个灵芝 产业 的声誉 。迄 今为 维普资讯 http://www.cqvip.com
雉普黄说http://www.cqvip..com 中草嘴Chinese Traditional and Herbal Drugs第37卷第8期2006年8月 ·1125· 止，在国内外，灵芝（包括其他真菌类中药材）的生物 Biotech(药物生物技术)，2002,9(3)：150-152. 技术及其质量标准的研究还处于相对薄弱的环节， [12]Weng X G.Detect quantification of Ganodenic acid in Gano- derma lucidum by enzyme-linked immunoad sorbent assay 因此熟悉中药质量标准研究的基本策略和相关技 U].Foreign Med Sci:Tradit Chin Med(国外医学：中医中 术，加快对灵芝生物技术及质量标准的研究，是这一 药分册)，2003,25(1)：47-48. [13]Xie Y Z,Zhang Z,Li SZ,et al.Recent Advances in the de- 我国传统药用真菌产业化、国际化的必由之路。在灵 velopment and processing works of the lingzhi fungus (Gano 芝指纹图谱的建立中如果能结合分子生物学手段， derma lucidum)[J].J Microbiol(微生物学杂志)，2002,22 (6):43-45. 采用多种分析仪器联用获得的多维指纹图谱，并和 [14]Xing Z T.You Q H,Zhang J S,et al.Comparative study on 药物疗效相结合，则既能反映基因的信息、化学信 triterpenesin different Ganoderma species []J Chin Med 息，又能反映药效信息，进而阐明基因、化学成分和 Mater(中药材)，2004,27(8)：575-576. [15]Huang S M,Yang X L,Huang J,et al.HPLC fingerprinting 疗效的相关性，从而建立一个高水平的质量标准。 of triterpenoids from Anoderma lucidum []J Beijing Insti- References: tute Technol(北京理工大学学报)，2004,24(5)：458-461. [1]Zhou X W,Lin J.Resources of wild Ganoderma spp.in Chi [16]Jiang Y Q.Study on quality control for Lingzhi capsules [J]. na and their development and itilization [J].Acta Edib Fungi Northwest Pharm J(西北药学杂志)，2001,16(3)：112- (食用菌学报)，1999,6(1)：58-64. 113. [2]Chen T D,Li K B.Resources,taxonomy,ecological distri- [17]Sun Y F,Zhuang Y X,Huang X C.Studies on the prepara- bution,exploitation and utilization of Ganodermataceae from tion and quality contraol of the extract from Taishan's Gano- China[U].Acta Agric Univ Jiangxi(江西农业大学学报)， derma lucidum[J].Chin Pharm J(中国药学杂志)，2001， 2004,26(1):89-95. 36(6):394-396. [3]Hon CC,Chow Y C,Zeng F Y,et al.Genetic authentica- [18]Huang S M,Yang X L,Wang B W,et al.Study on prepara- tion of ginseng and other traditional Chinese medicine [J] tion process and analytical methods of ESAC from Ganoder- Acta Pharmacol Sin,2003,24(9):841-846. ma lucidum[J].China J Chin Mater Med(中国中药杂志)， [4]Zhang K Y,Leung H W,Yeung H W,et al.Differentiation 2003,28(4):332-334. of Lycium barbarum from its related Lycium species using [19]Gao J J,Nakamura N,Min BS,et al.Quantitative determi- random amplified polymorphic DNA ]Planta Med,2001, nation of bitter principles in specimens of Ganoderma lucidum 67(4):379-381. using high-performance liquid chromatography and its appli- [5]Yuan M,Hong Y.Heterogeneity of Chinese medical herbs in cation to the evaluation of Ganoderma products [J].Chem Singapore assessed by fluorescence AFLP analysis [J].Am J Pharm Bull,2004,52(6):688-695- Chin Med,2003,31(5):773-779. [20]Deng W H,Huang S M,Zou X W,et al.Establishment of [6]Hong D Y,Lau A J,Yeo C L,et al.Genetic diversity and fingerprint of Lingzhi (Ganoderma lucidum Karst.)and its variation of saponin contents in Panax notoginseng roots from preparations by HPLC].Chin J Pharm Anal(药物分析杂 a single farm [J].J Agric Food Chem,2005,53(22):8460- 志)，2005,25(3)：352355. 8467. [21]Tang C H,Zhang J S,Chen M J,et al.Preliminary study on [7] Thiede B,Hohenwarter W,Krah A,et al.Peptide mass fin genetic diversity among ten strains of Ganoderma [J].J gerprinting [J].Methods,2005,35(3):237-247. Nanjing Agric Univ(南京农业大学学报)，2005,28(2)： [8]Lin J,Chen Y,Xu Y,et al.Cloning and expression of 133-136. curcin,a ribosome-inactivating protein from the seed of jat- [22]Luo L Z,Lin SQ,Xie BG,et al.Molecular identification of ropha curcas [J].Acta Bot Sin,2003,45(7):858-863. 23 Ganoderma strains[J].Strait Pharm(海峡药学)，2005， [9]Fredriksson S A,Hulst A G,Artursson E,et al.Forensic 17(2):83-85. identification of neat ricin and of ricin from crude castor bean [23]Qi J J,Ma R C,Chen X D,et al.Analysis of genetic varia- extracts by mass spectrometry []Anal Chem,2005,77 tion in Ganoderma lucidum after space flight [J].Adv Space (6):1545-1555. Res,2003,31(6):1617-1622. [10]Han F M,Cai M,Chen Y.The current research of TCM fin [24] Cheung H Y,Ng C W,Hood DJ.Identification and quantifi- gerprinting technique[J刀.J Anal Sci(分析科学学报)， cation of base and nucleoside markers in extracts of Ganoder- 2004,20(6):647-651. ma lucidum,Ganoderma japonicum and Ganoderma capsules [11]Ye B P,Wang Q H,Zhou S J,et al.Isolating of proteins by micellar electrokinetic chromatography [J].JChromatogr from Lingzhi and study on its immune activity [J].Pharm A,2001,911(1):119-126. 《中草秀》投稿特别注意事项 1,实验性论文需要单位介绍信（注明：论文内容真实，作者排名无争议，无一稿两投，无泄密）。 2.创新性论文优先发表，新化合物免收版面费。 3.图题、表题、图注、表注需中英文双语表示。 4,文后参考文献译成英文。 5.本刊不收审稿费，但刊用稿件要收取版面费。 6、投稿时请留下联系方式（电话和E-mail)
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs 第37卷第8期2006年8月 ·1125· 止 ，在 国 内外 ，灵 芝 (包 括其 他真 菌类 中药 材)的生物 技术 及其 质 量标 准 的研究 还 处 于相 对 薄 弱 的环 节 ， 因 此 熟悉 中药 质 量 标 准 研 究 的基 本 策 略 和 相 关 技 术 ，加快对 灵芝 生物 技术 及质量 标 准 的研 究 ，是这 一 我 国传统 药用 真菌 产业 化 、国际化 的必 由之路 。在 灵 芝 指 纹 图谱 的建 立 中如 果 能 结合 分 子 生物 学 手段 ， 采 用 多种 分析 仪 器 联用 获 得 的 多维 指 纹 图谱 ，并 和 药 物 疗 效 相 结 合 ，则 既 能反 映基 因 的 信 息 、化 学 信 息 ，又能 反 映药 效 信息 ，进 而 阐明基 因、化 学 成分 和 疗效 的相关 性 ，从 而 建立一 个高 水平 的质 量标 准 。 References： r1] ZhouX W ，LinJ．ResourcesofwildGanodermaspp．inChi— naandtheirdevelopmentanditilization[J]．ActaEdibFungi (食用菌学报)，1999，6(1)：58—64． [2] ChenTD，LiKB．Resources，taxonomy，ecologicaldistri— bution，exploitation and utilization ofGanodermataceaefrom China[J]．ActaAgricUnivJiangxi(江西农 业大学学报 )， 2004，26(1)：89—95． [3] HonCC，Chow Y C，ZengFY，eta1．Geneticauthentica— tionofginsengandothertraditionalChinesemedicine[J]． Acta PharmacolSin，2003，24(9)：841—846． [4] ZhangKY，LeungH W，YeungHW ，eta1．Differentiation of Lycium barbarum from its related Lycium species using random amplifiedpolymorphicDNA[J]．PlantaMed，2001， 67(4)：379—381． [5] YuanM，HongY．HeterogeneityofChinesemedicalherbsin SingaporeassessedbyfluorescenceAFLPanalysis[J]．AmJ ChinM ed，2003，31(5)：773—779． [6] HongDY，LauA J，YeoCL，eta1．Geneticdiversityand variationofsaponincontentsinPanax notoginseng rootsfrom asinglefarm [J]．JAgricFoodChem，2005，53(22)：8460— 8467． [7] ThiedeB，HohenwarterW，KrahA，eta1．Peptidemassfin— gerprinting[J]．Methods，2005，35(3)；237—247． [8] LinJ，Chen Y，XuY，eta1．Cloning andexpressionof curcin，aribosome-inactivatingprotein from theseedofjat— rophacurcas[J]．ActaBotSin，2003，45(7)；858—863． [9] FredrikssonS A，HulstA G，ArturssonE，eta1．Forensic identificationofneatricinand ofricin from crudecastorbean extractsby massspectrometry LJ]．AnalChem，2005，77 (6)：1545—1555． [12] [13] [14] [15] [16] [17] [18] [19] [2O] [21] [22] [23] [1o] HanFM，caiM，ChenY．ThecurrentresearchofTCM fin一 [24] gerprintingtechnique[J]．J AnalSci(分 析 科 学 学 报 )， 2004，2O(6)：647—651． [11] YeBP，WangQ H，ZhouSJ，eta1．Isolatingofproteins from Lingzhiandstudyonitsimmuneactivity[J]．Pharm Biotech (药 物 生 物 技 术 )，2002，9(3)：150—152． W eng X G． Detectquantification ofGanodenicacid in Ganoderma lucidum by enzyme—linked imm unoad sorbent assay [J]．ForeignMedSci：TraditChinMed (国外医学 ：中医中 药 分 册 )，2003，25(1)：47—48． XieY Z，ZhangZ，LiS Z，eta1．RecentAdvancesin thede— velopmentand processingworksofthelingzhifungus (Gan~ derm alucidum)[J]．JMicrobiol(微生物学杂志 )，2002，22 (6)：43—45． XingZ T，YouQ H，ZhangJS，eta1．Comparativestudyon triterpenesindifferentGanodermaspecies[J]．JChinMed Mater(中 药 材 )，2004，27(8)：575—576． HuangSM ，YangXL，HuangJ，eta1．HPLC fingerprinting oftriterpenoidsfromAnoderm alucidum [J]．JBeOingInsti— tuteTechnol(北 京 理 工 大 学 学 报 )，2004，24(5)：458—461． JiangYQ．StudyonqualitycontrolforLingzhicapsulesD]． NorthwestPharm J (西 北 药 学 杂 志 )，2001，16(3)：ll2— 113． SunY F，Zhuang Y X ，Huang X C． Studiesonthe prepara— tionand qualitycontraoloftheextractfrom Taishan’sGanoderm alucidum [J]．ChinPharm J (中国药 学杂志 )，2001， 36(6)：394—396． Huang SM ，YangX L，W ang B W ，eta1．Studyonprepara— tion processand analyticalmethodsofESAC from Ganod er— malucidum [J]．ChinaJChinMaterMed(中国中药杂志)， 2003，28(4)：332—334． GaoJJ，NakamuraN，MinBS，eta1．Quantitativedetermi— nationofbitterprinciplesin specimensofGanod ermalucidum using high—-performance liquid chromatography and itsappli—- cationtotheevaluationofGanoderm aproducts[J]．Chem Pharm Bull，2004，52(6)：688—695． De ng W H ，HuangS M ，Zou X W ，eta1． Establishmentof fingerprintofLingzhi(Ganod erm a lucidum Karst．) and its preparationsbyHPLC[J]．ChinJPharm Anal(药物分析杂 志 )，2005，25(3)：352—355． TangCH，ZhangJS，ChenM J，eta1．Preliminarystudyon geneticdiversityamong ten strainsofGanoderm a [J]． J Nanjing AgricUniv (南 京 农 业 大 学 学 报 )，2005，28(2)： 133—136． LuoLZ，LinSQ，XieBG，eta1．M olecularident．ficationof 23Ganodermastrains[J]．StraitPharm (海峡药学 )，2005， 17(2)：83—85． QiJJ，MaRC，ChenX D，eta1．Analysisofgeneticvaria— tioninGanodermalucidumafterspaceflight[J]．AdvSpace Res，2003，31(6)：1617—1622． CheungH Y，NgC W ，HoodD J．Identificationandquantifi— cation ofbaseand nucleosidemarkersinextractsofGanod er— malucidum，Ganod ermajaponicum andGanodermacapsules bymicellarelectrokineticchromatography[J]．JChromatogr A ，2001，911(1)：119—126． 维普资讯 http://www.cqvip.com