实验二十六离体小肠平滑肌的运动 、目的和原理 消化管、血管、子宫、输尿管以及输精管等的管壁均由平滑肌组成。平滑肌与骨骼肌不同,它 具有自动节律性,较大的伸展性,和对化学物质、温度改变及牵张刺激较为敏感等生理特性。测量 离体小肠段的活动,不仅可以证明平滑肌的生理特性,而且这种方法还可以用来测定微量化学物质 或药物的生物活性,被称为生物学鉴定法。 本实验的目的是:(1)观察哺乳动物离体肠管段的活动,借以了解消化道平滑肌的一般生理特 性;(2)学习离体器官灌流的一种方法。 实验对象家兔或豚鼠 、器材和用品 离体灌流恒温浴槽、生物信号采集处理系统、张力换能器(量程为25g以下)、铁支架、球胆、温 度计、电热器、滴管、L型玻璃管、烧杯、棉线、哺乳动物手术器械一套,台氏溶液、肾上腺素溶液 (1:10,000、乙酰胆碱溶液(1:100,000)、NaOH溶液(lmol/L)、HCl溶液(lmol/L)、氯化钙溶液 (1:100)等。 四、方法与步骤 1.离体灌流恒温浴槽的准备。为了观察的方便,离体灌流恒温浴槽应由透明的有机玻璃制成。 浴槽内外有加热器(由恒温控制装置控制其加热)、恒温控制装置、搅拌叶轮、器官浴管等部分。 如图26-1所示,它应具有营养液的供给、氧气的供给、恒温的控制等三方面的功能。浴管是一直 径为2~3cm的玻璃管,下有侧管,可放出浴液。实验前先将浴槽放满水,浴管内加台氏液。温度工作 点定在38℃左右。开启升温开关,接通电源,搅拌轮开始转动,加热器开始加热至所需温度。浴管 内置一L型玻璃通气管,一端接橡皮管与球胆相连,球胆内装有混合气体(5%C02和95‰02);另一端 较细而且弯成钩状,使逸出的气泡细小而均匀。另外用大烧杯装满台氏液,放在保温浴锅内保温, 以便用于更换浴管内的台氏液 2.标本的制备。将兔或豚鼠执于手中倒悬,用木槌猛击头枕部使其昏迷。快速剖开腹腔,找出 胃幽门与十二指肠交界处,以此为起点取长20~30cm的肠管。先将与该段肠管相连的肠系膜从肠缘剪 去,再将拟取的肠管两端剪断,取出体外。将肠管用台氏液迅速冲洗干净,然后保存于低温 (4^6℃)台氏液中。实验时剪取一端长约2^3cm的肠断,用细丝线在其两端各扎一结,一端系于通 气管的钩上,另一端与张力换能器相连。此连线必须垂直,且不得与浴管的管壁、通气管的管壁接 触,以避免摩擦。 3.连接实验装置。将充满混合气体(5%02和95‰02)的球胆用橡皮管与通气管相连,调节夹在橡 皮管上的何氏夹,控制气流速度,使气泡一个一个地进入台氏液中。气泡逸出过多过急会振动悬线 而影响记录,逸出太少则使标本得不到足够的氧气而影响其活动。张力换能器连接生物信号采集处 理系统
实验二十六 离体小肠平滑肌的运动 一、目的和原理 消化管、血管、子宫、输尿管以及输精管等的管壁均由平滑肌组成。平滑肌与骨骼肌不同，它 具有自动节律性，较大的伸展性，和对化学物质、温度改变及牵张刺激较为敏感等生理特性。测量 离体小肠段的活动，不仅可以证明平滑肌的生理特性，而且这种方法还可以用来测定微量化学物质 或药物的生物活性，被称为生物学鉴定法。 本实验的目的是：(1)观察哺乳动物离体肠管段的活动，借以了解消化道平滑肌的一般生理特 性；(2)学习离体器官灌流的一种方法。 二、实验对象家兔或豚鼠 三、器材和用品 离体灌流恒温浴槽、生物信号采集处理系统、张力换能器(量程为25g以下)、铁支架、球胆、温 度计、电热器、滴管、L型玻璃管、烧杯、棉线、哺乳动物手术器械一套，台氏溶液、肾上腺素溶液 (1:10,000)、乙酰胆碱溶液(1:100,000)、NaOH溶液(1mol/L)、HCl溶液(1mol/L)、氯化钙溶液 (1:100)等。 四、方法与步骤 1.离体灌流恒温浴槽的准备。为了观察的方便，离体灌流恒温浴槽应由透明的有机玻璃制成。 浴槽内外有加热器（由恒温控制装置控制其加热）、恒温控制装置、搅拌叶轮、器官浴管等部分。 如图26-1 所示，它应具有营养液的供给、氧气的供给、恒温的控制等三方面的功能。浴管是一直 径为2~3cm的玻璃管，下有侧管，可放出浴液。实验前先将浴槽放满水，浴管内加台氏液。温度工作 点定在38℃左右。开启升温开关，接通电源，搅拌轮开始转动，加热器开始加热至所需温度。浴管 内置一L型玻璃通气管，一端接橡皮管与球胆相连，球胆内装有混合气体（5%CO2和95%O2）；另一端 较细而且弯成钩状，使逸出的气泡细小而均匀。另外用大烧杯装满台氏液，放在保温浴锅内保温， 以便用于更换浴管内的台氏液。 2.标本的制备。将兔或豚鼠执于手中倒悬，用木槌猛击头枕部使其昏迷。快速剖开腹腔，找出 胃幽门与十二指肠交界处，以此为起点取长20~30cm的肠管。先将与该段肠管相连的肠系膜从肠缘剪 去，再将拟取的肠管两端剪断，取出体外。将肠管用台氏液迅速冲洗干净，然后保存于低温 （4~6℃）台氏液中。实验时剪取一端长约2~3cm的肠断，用细丝线在其两端各扎一结，一端系于通 气管的钩上，另一端与张力换能器相连。此连线必须垂直，且不得与浴管的管壁、通气管的管壁接 触，以避免摩擦。 3.连接实验装置。将充满混合气体（5%CO2和95%O2）的球胆用橡皮管与通气管相连，调节夹在橡 皮管上的何氏夹，控制气流速度，使气泡一个一个地进入台氏液中。气泡逸出过多过急会振动悬线 而影响记录，逸出太少则使标本得不到足够的氧气而影响其活动。张力换能器连接生物信号采集处 理系统
张力换能器 通O2 (或空气) 热水出口 肠肌 热水出口 麦氏浴槽 螺丝夹 图26-1记录离体小肠段平滑肌活动的装置和麦氏浴槽 4.观察项目 (1)正常的自动节律收缩:不给任何刺激,观察和记录肠段在恒温(38℃)、供氧的台氏液中的 收缩情况,并从记录的曲线上分析收缩的节律、波形及幅度。收缩曲线的基线升高,表示肠段平滑 肌的紧张性升高;相反,收缩曲线的基线下降,表示紧张性降低。 (②)乙酰胆碱的作用:用滴管加2~3滴乙酰胆碱溶液于浴管内,观察肠段活动(即平滑肌收缩) 的改变。在观察到明显效应后,立即从侧管放出浴管内含有乙酰胆碱的台氏液,再加入新鲜而温热 的台氏液,如此反复3~4次,以洗涤残留的乙酰胆碱。最后换入与实验开始时等量的新鲜温热台氏 液,并待肠段的收缩恢复正常后,先记录一段正常收缩曲线。再加药进行下一个项目的观察和记 录。以下的每一次实验后,都要如此进行。 (3)肾上腺素的作用:加2~3滴肾上腺素溶液于浴管内,观察平滑肌的反应。 (4)氯化钙的作用::加2滴氯化钙溶液于浴管内,观察平滑肌的反应 (5)盐酸的作用:加12滴盐酸溶液于浴管内,观察平滑肌的反应。 (6)氢氧化钠的作用:在加盐酸使平滑肌收缩减弱的基础上,再加2滴氢氧化钠溶液于浴管内, 观察平滑肌的反应。 五、注意事项 1.加药前必须先记录一段正常收缩曲线作伪对照。并准备好更换用的38℃的台氏液。 2.每次加药出现效果后,应立即放掉含药物的台氏液,并冲洗多次,以免平滑肌出现不可逆的 反应。 3.浴槽内的温度应保持恒定的38℃,不能过高过低,也不能忽高忽低。 4从动物体内取出小肠采用将动物击昏的办法,而不是将动物麻醉,为的是避免麻醉剂对小肠 平滑肌活动的影响。不能用麻醉替代击昏。 六、要求
图26-1 记录离体小肠段平滑肌活动的装置和麦氏浴槽 4.观察项目 (1)正常的自动节律收缩：不给任何刺激，观察和记录肠段在恒温（38℃）、供氧的台氏液中的 收缩情况，并从记录的曲线上分析收缩的节律、波形及幅度。收缩曲线的基线升高，表示肠段平滑 肌的紧张性升高；相反，收缩曲线的基线下降，表示紧张性降低。 (2)乙酰胆碱的作用：用滴管加2~3滴乙酰胆碱溶液于浴管内，观察肠段活动（即平滑肌收缩） 的改变。在观察到明显效应后，立即从侧管放出浴管内含有乙酰胆碱的台氏液，再加入新鲜而温热 的台氏液，如此反复3~4次，以洗涤残留的乙酰胆碱。最后换入与实验开始时等量的新鲜温热台氏 液，并待肠段的收缩恢复正常后，先记录一段正常收缩曲线。再加药进行下一个项目的观察和记 录。以下的每一次实验后，都要如此进行。 (3) 肾上腺素的作用：加2~3滴肾上腺素溶液于浴管内，观察平滑肌的反应。 (4)氯化钙的作用：：加2滴氯化钙溶液于浴管内，观察平滑肌的反应。 (5)盐酸的作用：加1~2滴盐酸溶液于浴管内，观察平滑肌的反应。 (6)氢氧化钠的作用：在加盐酸使平滑肌收缩减弱的基础上，再加2滴氢氧化钠溶液于浴管内， 观察平滑肌的反应。 五、注意事项 1.加药前必须先记录一段正常收缩曲线作伪对照。并准备好更换用的38℃的台氏液。 2.每次加药出现效果后，应立即放掉含药物的台氏液，并冲洗多次，以免平滑肌出现不可逆的 反应。 3.浴槽内的温度应保持恒定的38℃，不能过高过低，也不能忽高忽低。 4.从动物体内取出小肠采用将动物击昏的办法，而不是将动物麻醉，为的是避免麻醉剂对小肠 平滑肌活动的影响。不能用麻醉替代击昏。 六、要求
正确地记录出一套各药物对肠管平滑肌收缩影响的曲线,并分析各药物产生作用的机制 七、思考题 1.有一未知药液,加入浴管后引起平滑肌收缩幅度加大,基线升高。如果预先加入阿托品,再 加入此药液,则平滑肌无明显反应。你能否推测出此药液中含有什么物质? 2.试比较维持哺乳动物离体小肠平滑肌活动和维持离体蛙心活动所需的条件有何不同?为什 么?
正确地记录出一套各药物对肠管平滑肌收缩影响的曲线，并分析各药物产生作用的机制。 七、思考题 1.有一未知药液，加入浴管后引起平滑肌收缩幅度加大，基线升高。如果预先加入阿托品，再 加入此药液，则平滑肌无明显反应。你能否推测出此药液中含有什么物质？ 2.试比较维持哺乳动物离体小肠平滑肌活动和维持离体蛙心活动所需的条件有何不同？为什 么？