实验七血细胞的计数 目的和原理 计算每立方毫米血液内红细胞的数目称为红细胞计数,计算每立方毫米血液内白细胞的数目称 为白细胞计数,二者统称血细胞计数。我国健康成年男子每立方毫米血液的红细胞数为450550万 个,平均约500万个(5.0×1012):成年女子每立方毫米血液为380~460万个,平均约420万个 (4.2×1012/)。健康成年人的白细胞数约为每立方毫米40001000个 血细胞计数的方法可分为两大类:一为显微镜下目视计数,另一为用自动细胞计数器进行计 数。本实验用显微镜下目视计数法来分别计数正常成人的红细胞数和白细胞数。其原理是:将一定 量的血液经一定量的等渗稀释液稀释后,置于血细胞计数室中,在显微镜下目视计数,然后通过换」 算求得每立方毫米血液内的红细胞数和白细胞数。本次实验目的在于掌握这一血细胞计数的方法。 实验对象人 三、器材和用品 血细胞计数板、血红蛋白吸管、lml和5ml吸管、试管、试管架、采血针、75%酒精棉球,红细胞 稀释液、白细胞稀释液。 四、方法与步骤 1.熟悉仪器 (1)血细胞计数板:是一块特制的长方形厚玻璃板,板面的中部有4条直槽,内侧两直槽的中间 有一横槽,横槽两边各有一计数室,两个计数室的划分完全相同。计数室比整个玻璃板的平面低 0.lm,当放上盖玻片后,室底与盖玻片之间距离(即高度)为0.1mm。计数室长宽各3mm,精确划 分为9个大方格(见图7-2),每个大方格面积为1平方毫米,体积为0.1立方毫米。四角的大方格, 又分为16个中方格,适用白细胞计数。中央的大方格则由双线划分为25个中方格,每个方格的面积 为0.04平方毫米,体积为0.004立方毫米,每个中方格又分为16个小方格,适用与红细胞计数。 (②)血红蛋白吸管:为一厚壁毛细玻璃管,其上有两个刻度,前端刻度的容量为10立方毫米,后 面的刻度为20立方毫米,尾端与带吸嘴的细橡皮管相通(有的吸管尾端稍膨大,上面套有一顶端有孔 的橡皮帽)。 2.采血并稀释 (1)将盛有0.38ml白细胞稀释液和盛有3.98ml红细胞稀释液的试管放在试管架上备用。 (②)用75%酒精棉球消毒受试者的耳垂或指端,用消毒采血针刺破该处皮肤2~3m,血液即刻留 岀,用干棉球擦去第一滴血,待再流出的血滴直径为2~3mm时,用血红蛋白吸管缓慢的吸取血液至 刻度20立方毫米处,用棉球擦干净血红蛋白吸管口外面的血,将血液吹入盛有白细胞稀释的试管 中,并吸上清液冲洗沾在管壁上的血液,使血液全部进入稀释液内。再用同样方法吸血至20立方毫 米处,将血液吹入有红细胞稀释液的试管内。 3.充液
实验七 血细胞的计数 一、目的和原理 计算每立方毫米血液内红细胞的数目称为红细胞计数，计算每立方毫米血液内白细胞的数目称 为白细胞计数，二者统称血细胞计数。我国健康成年男子每立方毫米血液的红细胞数为450~550万 个，平均约500万个（5.0×1012/L）；成年女子每立方毫米血液为380~460万个，平均约420万个 （4.2×1012/L）。健康成年人的白细胞数约为每立方毫米4000~10000个。 血细胞计数的方法可分为两大类：一为显微镜下目视计数，另一为用自动细胞计数器进行计 数。本实验用显微镜下目视计数法来分别计数正常成人的红细胞数和白细胞数。其原理是：将一定 量的血液经一定量的等渗稀释液稀释后，置于血细胞计数室中，在显微镜下目视计数，然后通过换 算求得每立方毫米血液内的红细胞数和白细胞数。本次实验目的在于掌握这一血细胞计数的方法。 二、实验对象人 三、器材和用品 血细胞计数板、血红蛋白吸管、1ml和5ml吸管、试管、试管架、采血针、75%酒精棉球，红细胞 稀释液、白细胞稀释液。 四、方法与步骤 1．熟悉仪器 (1)血细胞计数板：是一块特制的长方形厚玻璃板，板面的中部有4条直槽，内侧两直槽的中间 有一横槽，横槽两边各有一计数室，两个计数室的划分完全相同。计数室比整个玻璃板的平面低 0.1mm，当放上盖玻片后，室底与盖玻片之间距离（即高度）为0.1 mm。计数室长宽各3 mm，精确划 分为9个大方格（见图7-2），每个大方格面积为1平方毫米，体积为0.1立方毫米。四角的大方格， 又分为16个中方格，适用白细胞计数。中央的大方格则由双线划分为25个中方格，每个方格的面积 为0.04平方毫米，体积为0.004立方毫米，每个中方格又分为16个小方格，适用与红细胞计数。 (2)血红蛋白吸管：为一厚壁毛细玻璃管，其上有两个刻度，前端刻度的容量为10立方毫米，后 面的刻度为20立方毫米，尾端与带吸嘴的细橡皮管相通(有的吸管尾端稍膨大，上面套有一顶端有孔 的橡皮帽)。 2．采血并稀释 (1)将盛有0.38ml白细胞稀释液和盛有3.98ml红细胞稀释液的试管放在试管架上备用。 (2)用75%酒精棉球消毒受试者的耳垂或指端，用消毒采血针刺破该处皮肤2～3mm，血液即刻留 出，用干棉球擦去第一滴血，待再流出的血滴直径为2～3mm时，用血红蛋白吸管缓慢的吸取血液至 刻度20立方毫米处，用棉球擦干净血红蛋白吸管口外面的血，将血液吹入盛有白细胞稀释的试管 中，并吸上清液冲洗沾在管壁上的血液，使血液全部进入稀释液内。再用同样方法吸血至20立方毫 米处，将血液吹入有红细胞稀释液的试管内。 3．充液
取干洁的计数板,平放于实验桌上,将干洁的盖玻片置于计数板正中。将盛有稀释血液的试管 缓慢摇动,使其内的稀释血液充分混匀,用癿小吸管吸取摇匀的稀释血液,滴一小滴于盖玻片边缘 的记数板上,使稀释血液通过毛细管的作用,进入并充满计数室。注意充液不可过多,也不可过 少。计数室内如有气泡时,应洗净计数板和盖玻片,干燥后重新充液。可以先充红细胞稀释液,充 好后进行红细胞计数。再将计数板和盖玻片洗净并干燥后,充白细胞稀释液,进行白细胞计数。也 可将红细胞稀释液和白细胞稀释液分别充入两个计数室,一次在显微镜下分别计数红细胞和白细 胞 计数 计数室充好后,将计数板放于显微镜载物台上,静置2~3min,然后在低倍镜下计数。计数白细 胞时,数四角4个大方格的白细胞总数:计数红细胞时,数中央大方格中四角的4个中方格和中央的 一个中方格(共5个中方格)的红细胞总数。为防止重数和遗漏,计数时应循一定的路径,即“从左 到右,自上而下”,对压在线上的血细胞,依照“数上不数下,数左不数右”的原则进行计数。计 数白细胞时,如发现各大方格的白细胞数相差8个以上:计数红细胞时各中方格的红细胞数相差20个 以上,表示血细胞分布不均匀,须把稀释液摇匀后重新充液和计数 计算 白细胞数:将4个大方格内数得的白细胞总数乘以50,即得每立方毫米血内的白细胞总数。因 为:(1)稀释液0.38m1加入血液20立方毫米(1m1=1立方厘米=1000立方毫米,故20立方毫米 =0.02m1)后,使血液稀释了20倍,换算成未稀释血液时应乘以20。(2)四角上4个大方格内的容积为 1×1×0.1×4=0.4立方毫米换算成每立方毫米时应乘以2.5,所以将4个大方格内数得的白细胞总数 乘以50(20×2.5=50),即为每立方毫米血内的白细胞总数 红细胞数:将5个中方格内数得的红细胞总数乘以10,000,即得每立方毫米血内的红细胞总数。 因为:(1)稀释液3.98ml加入血液20立方毫米(0.02ml)后,使血液稀释200倍,换算成未稀释血液时 应乘以200。(2)在计数室内只计数0.02立方毫米(即1个中方格的容积为0.2×0.2×0.1=0.004立 方毫米,5个中方格的容积为0.004×5=0.02立方毫米)换算成每立方毫米应乘以50。因此,将5个中 方格内数得的红细胞总数乘以10,000(200×50=10,000),即为每立方毫米血内的红细胞总数 6.清洁仪器 作完实验后,应将所用玻璃器皿清洗干净。吸管应先弃去管内的液体,然后用蒸馏水冲洗三 次,再吸入95%酒精冲洗1~2次,最后吸入乙醚冲洗1~2次,这些步骤都不应用口吹吸,而应用吸耳 球或泵抽吸。如吸管内有血凝块,不易洗去时,可将之侵λ1%氨水中,使血凝块溶解脱落后再按上 法洗涤。计数板和盖玻片用清水冲洗,再用绸布拭干收藏。 五、注意事项 1.采血时操作要迅速,避免血液凝固。 2.计数血细胞时,一定要认真、仔细,力求准确,减少误差。 六、要求 1.掌握微量采血和血细胞计数的方法 2.了解血细胞计数的意义
取干洁的计数板，平放于实验桌上，将干洁的盖玻片置于计数板正中。将盛有稀释血液的试管 缓慢摇动，使其内的稀释血液充分混匀，用1mL小吸管吸取摇匀的稀释血液，滴一小滴于盖玻片边缘 的记数板上，使稀释血液通过毛细管的作用，进入并充满计数室。注意充液不可过多，也不可过 少。计数室内如有气泡时，应洗净计数板和盖玻片，干燥后重新充液。可以先充红细胞稀释液，充 好后进行红细胞计数。再将计数板和盖玻片洗净并干燥后，充白细胞稀释液，进行白细胞计数。也 可将红细胞稀释液和白细胞稀释液分别充入两个计数室，一次在显微镜下分别计数红细胞和白细 胞。 4．计数 计数室充好后，将计数板放于显微镜载物台上，静置2～3min，然后在低倍镜下计数。计数白细 胞时，数四角4个大方格的白细胞总数；计数红细胞时，数中央大方格中四角的4个中方格和中央的 一个中方格（共5个中方格）的红细胞总数。为防止重数和遗漏，计数时应循一定的路径，即“从左 到右，自上而下”，对压在线上的血细胞，依照“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数。计 数白细胞时，如发现各大方格的白细胞数相差8个以上；计数红细胞时各中方格的红细胞数相差20个 以上，表示血细胞分布不均匀，须把稀释液摇匀后重新充液和计数。 5．计算 白细胞数：将4个大方格内数得的白细胞总数乘以50，即得每立方毫米血内的白细胞总数。因 为：(1)稀释液0.38ml加入血液20立方毫米（1ml=1立方厘米=1000立方毫米，故20立方毫米 =0.02ml）后，使血液稀释了20倍，换算成未稀释血液时应乘以20。(2)四角上4个大方格内的容积为 1×1×0.1×4=0.4立方毫米换算成每立方毫米时应乘以2.5，所以将4个大方格内数得的白细胞总数 乘以50（20×2.5=50），即为每立方毫米血内的白细胞总数。 红细胞数：将5个中方格内数得的红细胞总数乘以10,000，即得每立方毫米血内的红细胞总数。 因为：(1)稀释液3.98ml加入血液20立方毫米(0.02ml)后，使血液稀释200倍，换算成未稀释血液时 应乘以200 。(2)在计数室内只计数0.02立方毫米（即1个中方格的容积为0.2×0.2×0.1=0.004立 方毫米，5个中方格的容积为0.004×5=0.02立方毫米）换算成每立方毫米应乘以50。因此，将5个中 方格内数得的红细胞总数乘以10,000（200×50=10,000），即为每立方毫米血内的红细胞总数。 6．清洁仪器 作完实验后，应将所用玻璃器皿清洗干净。吸管应先弃去管内的液体，然后用蒸馏水冲洗三 次，再吸入95%酒精冲洗1～2次，最后吸入乙醚冲洗1～2次，这些步骤都不应用口吹吸，而应用吸耳 球或泵抽吸。如吸管内有血凝块，不易洗去时，可将之侵入1%氨水中，使血凝块溶解脱落后再按上 法洗涤。计数板和盖玻片用清水冲洗，再用绸布拭干收藏。 五、注意事项 1．采血时操作要迅速，避免血液凝固。 2．计数血细胞时，一定要认真、仔细，力求准确，减少误差。 六、要求 1．掌握微量采血和血细胞计数的方法。 2．了解血细胞计数的意义
附:血细胞稀释液配置法 白细胞稀释液 冰醋酸(破坏红细胞)1.5m1 1%龙胆紫(染白细胞核,便于计数)1ml 蒸馏水加至100m1 2.红细胞稀释液 NaCl(维持渗透压)0.5g Na2SO4(使溶液比重增加,红细胞均匀分布不易下沉)2.5g HgCl2(固定红细胞并防腐)0.25g 蒸馏水加至100m1
附：血细胞稀释液配置法 1．白细胞稀释液 冰醋酸（破坏红细胞）1.5ml 1%龙胆紫（染白细胞核，便于计数）1ml 蒸馏水加至100ml 2．红细胞稀释液 NaCl（维持渗透压） 0.5g Na2SO4（使溶液比重增加，红细胞均匀分布不易下沉）2.5g HgCl 2（固定红细胞并防腐）0.25g 蒸馏水加至100ml