实验十三ABO血型的鉴定与交叉配血 目的和原理 ABO血型系统是根据红细胞膜上A抗原(A凝集原)和B抗原(B凝集原)的存在与否,将血液分为 A、B、AB及0四种基本类型的。红细胞膜上含有A抗原者称为A型血,含有B抗原者称为B型血,含有A 与B两种抗原者称为AB型血,这两种抗原均没有者称为O型血。不同血型的血清中又含有不同的抗体 (又称凝集素)。在A型血的血清中含有抗B抗体(抗B凝集素),B型血的血清中含有抗A抗体(抗A 凝集素),O型血的血清中含有抗A和抗B两种抗体,AB型血的血清中则既不含抗A抗体也不含抗B抗 体。相应的抗原与抗体相遇(A抗原与抗A抗体相遇,或B抗原与抗B抗体相遇),将发生凝集反应 此时,肉眼或镜下可见红细胞聚集成块,摇动或搅拌均不能使红细胞再散开。 血型鉴定是将受试者红细胞分别加入到标准A、B、0型血清(含足量的抗B抗体;抗A抗体;抗 A、抗B抗体)中,观察有无凝集现象,从而测知受试者的红细胞膜上有无A抗原或B抗原。根据红细 胞膜上所含抗原的种类判定其血型。这种方法称正向定型法;与此相反,把受试者的血清与已知血 型的红细胞(含A抗原、B抗原以及无A抗原和B抗原)相混合,观察有无凝集现象,从而测知受试者 的血清中有无抗A抗体或抗B抗体,并根据血清中所含抗体的种类判定其血型。这种方法称为反向定 型法。 临床实践中若需进行输血治疗,在血型确定后,尚须将同型血进行交叉配血。交叉配血是将受 血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合,观察有无凝集现象。如无凝集现象,方可 进行输血。 本实验的目的是:1.学习用正向定型法和反向定型法鉴定受试者的ABO血型;2.学习交叉配血的 方法 二、实验对象人 三、器材和用品 弹簧采血针(或一次性采血针)、三凹玻片、小玻璃棒、消毒牙签、小试管、试管架、离心 机、37℃水浴锅、滴管、显微镜、碘酒棉球、巧5%酒精棉球、干棉球、消毒注射器、生理盐水、标 准抗A血清、标准抗B血清、标准抗A、抗B型血清、A型红细胞、B型红细胞、O型红细胞。 四、方法与步骤 (一)ABO血型鉴定一一玻片法 1.正向定型法 (1)在干洁三凹玻片的左、中、右3个凹陷旁依次标明A、B和AB字样。然后将标准抗A血清、标 准抗B血清和标准抗A、抗B血清,分别滴在三凹玻片注有A、B和AB字样的凹面中央。使血清呈直径为 1~2cm的圆形。 (②)用75%酒精棉球消毒耳垂或指腹后,用消毒采血针刺破皮肤,待血液流岀后,用三根干洁 小玻璃棒分别蘸取少量血液,置于三凹玻片上的血清中,并用玻璃棒搅拌使血液与血清相混匀(注 意严防三种血清相接触)
实验十三 ABO血型的鉴定与交叉配血 一、目的和原理 ABO血型系统是根据红细胞膜上A抗原（A凝集原）和B抗原（B凝集原）的存在与否，将血液分为 A、B、AB及O四种基本类型的。红细胞膜上含有A抗原者称为A型血，含有B抗原者称为B型血，含有A 与B两种抗原者称为AB型血，这两种抗原均没有者称为Ｏ型血。不同血型的血清中又含有不同的抗体 （又称凝集素）。在A型血的血清中含有抗B抗体（抗B凝集素），B型血的血清中含有抗A抗体（抗A 凝集素），Ｏ型血的血清中含有抗A和抗B两种抗体，AB型血的血清中则既不含抗A抗体也不含抗B抗 体。相应的抗原与抗体相遇（A抗原与抗A抗体相遇，或B抗原与抗B抗体相遇），将发生凝集反应。 此时，肉眼或镜下可见红细胞聚集成块，摇动或搅拌均不能使红细胞再散开。 血型鉴定是将受试者红细胞分别加入到标准A、B、O型血清（含足量的抗B抗体；抗A抗体；抗 A、抗B抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者的红细胞膜上有无A抗原或B抗原。根据红细 胞膜上所含抗原的种类判定其血型。这种方法称正向定型法；与此相反，把受试者的血清与已知血 型的红细胞（含A抗原、B抗原以及无A抗原和B抗原）相混合，观察有无凝集现象，从而测知受试者 的血清中有无抗A抗体或抗B抗体，并根据血清中所含抗体的种类判定其血型。这种方法称为反向定 型法。 临床实践中若需进行输血治疗，在血型确定后，尚须将同型血进行交叉配血。交叉配血是将受 血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象。如无凝集现象，方可 进行输血。 本实验的目的是：1.学习用正向定型法和反向定型法鉴定受试者的ABO血型；2.学习交叉配血的 方法。 二、实验对象人 三、器材和用品 弹簧采血针（或一次性采血针）、三凹玻片、小玻璃棒、消毒牙签、小试管、试管架、离心 机、37℃水浴锅、滴管、显微镜、碘酒棉球、75％酒精棉球、干棉球、消毒注射器、生理盐水、标 准抗A血清、标准抗B血清、标准抗A、抗B型血清、A型红细胞、B型红细胞、O型红细胞。 四、方法与步骤 (一)ABO血型鉴定——玻片法 1．正向定型法 (1) 在干洁三凹玻片的左、中、右3个凹陷旁依次标明A、B和AB字样。然后将标准抗A血清、标 准抗B血清和标准抗A、抗B血清，分别滴在三凹玻片注有A、B和AB字样的凹面中央。使血清呈直径为 1～2cm的圆形。 (2) 用75％酒精棉球消毒耳垂或指腹后，用消毒采血针刺破皮肤，待血液流出后，用三根干洁 小玻璃棒分别蘸取少量血液，置于三凹玻片上的血清中，并用玻璃棒搅拌使血液与血清相混匀（注 意严防三种血清相接触）
(3)在室温下10min后用肉眼观察有无凝集现象,如无凝集现象,再用消毒牙签搅拌一次,等 20min后,再观察结果。必要时可在显微镜下观察。 (4)根据有无凝集反应判定受试者的血型(见图13-1)。 抗B抗A抗A、抗B 血清血清 血清 A型 (③ AB型 图13-1正向定型血型的鉴定 2.反向定型法 (1)用4%碘酒棉球和75%酒精消毒受试者肘窝皮肤,然后用消毒注射器在其肘静脉抽取2πl血 液,待血液凝固后,将其离心析出血清备用。 (2)在干洁的三凹玻片的左、中、右3个凹陷旁依次标明A、B和0字样。将已知的A型红细胞悬 液、B型红细胞悬液、0型红细胞悬液分别滴在三凹玻片注有A、B和0字样的凹面中央。 (3)将受试者制备好的血清用滴管分别滴入三凹玻片的血清中,用消毒牙签搅拌混匀,严防三 种血细胞相接触。 (4)在室温下10min后用肉眼观察有无凝集反应。如无凝集现象,再用消毒牙签搅拌一次,等 2omin后,再观察结果。必要时可在显微镜下观察。 (5)根据凝集现象判定受试者的血型(见图13-2)
(3) 在室温下10 min后用肉眼观察有无凝集现象，如无凝集现象，再用消毒牙签搅拌一次，等 20min后，再观察结果。必要时可在显微镜下观察。 (4) 根据有无凝集反应判定受试者的血型（见图13-1）。 图13-1 正向定型血型的鉴定 2．反向定型法 (1) 用4%碘酒棉球和75%酒精消毒受试者肘窝皮肤，然后用消毒注射器在其肘静脉抽取2ml血 液，待血液凝固后，将其离心析出血清备用。 (2) 在干洁的三凹玻片的左、中、右3个凹陷旁依次标明A、B和O字样。将已知的A型红细胞悬 液、B型红细胞悬液、O型红细胞悬液分别滴在三凹玻片注有A、B和O字样的凹面中央。 (3) 将受试者制备好的血清用滴管分别滴入三凹玻片的血清中，用消毒牙签搅拌混匀，严防三 种血细胞相接触。 (4) 在室温下10 min后用肉眼观察有无凝集反应。如无凝集现象，再用消毒牙签搅拌一次，等 20min后，再观察结果。必要时可在显微镜下观察。 (5) 根据凝集现象判定受试者的血型（见图13-2）
A型红细胞B型红细胞0型红细胞 0型 型 B型 图13-2反向定型血型的鉴定 二)交叉配血一一玻片法 1.在受血者的肘正中静脉处,以4%碘酒棉球和75%酒精棉球消毒皮肤后,用干燥消毒注射器抽 取静脉血2ml。取其1~2滴加入装有2m生理盐水的小试管中,制成红细胞悬液。其余血液装入另 小试管中,待其凝固后,离心析出血清备用(亦可将其余血液装入盛有3.8%枸橼酸钠溶液0.4ml的 小试管内,混匀,离心沉淀,析出血浆备用)。 2.以同样方法制成供血者的红细胞悬液与血清(或血浆)。 3.取双凹玻片一张,标明主、次侧字样,在主侧凹内加受血者血清(或血浆)2滴及供血者红 细胞悬液1滴;在次侧凹内加供血者血清(或血浆)2滴及受血者红细胞悬液1滴,混均,置37℃条件 下10~30分钟后观察结果。 交叉配血时的主、次侧反应示意如下 主侧次侧 供血者红细胞悬液血清 受血者血清红细胞悬液 如果主侧和次侧均无凝集反应,即配血相合,可以输血:如果主侧发生凝集反应则为配血不 合,不能输血;如果仅次侧发生凝集反应,则只能在应急情况下,少量而缓慢地输血,并密切观 察,一旦发生输血反应,应立即停止输注
图13-2反向定型血型的鉴定 （二）交叉配血——玻片法 1．在受血者的肘正中静脉处，以4%碘酒棉球和75％酒精棉球消毒皮肤后，用干燥消毒注射器抽 取静脉血2ml。取其1～2滴加入装有2ml生理盐水的小试管中，制成红细胞悬液。其余血液装入另一 小试管中，待其凝固后，离心析出血清备用（亦可将其余血液装入盛有3.8％枸橼酸钠溶液0.4ml的 小试管内，混匀，离心沉淀，析出血浆备用）。 2．以同样方法制成供血者的红细胞悬液与血清（或血浆）。 3．取双凹玻片一张，标明主、次侧字样，在主侧凹内加受血者血清（或血浆）2滴及供血者红 细胞悬液1滴；在次侧凹内加供血者血清（或血浆）2滴及受血者红细胞悬液1滴，混均，置37℃条件 下10～30分钟后观察结果。 交叉配血时的主、次侧反应示意如下： 主侧 次侧 供血者红细胞悬液血清 ＋ ＋ 受血者血清红细胞悬液 4．如果主侧和次侧均无凝集反应，即配血相合，可以输血；如果主侧发生凝集反应则为配血不 合，不能输血；如果仅次侧发生凝集反应，则只能在应急情况下，少量而缓慢地输血，并密切观 察，一旦发生输血反应，应立即停止输注
五、注意事项 1.红细胞悬液和标准血清均应新鲜,合格且无污染,以防出项假凝集现象。 2.在操作中,应严格分离各种检测用品,注意滴管和搅拌作用的玻璃棒、消毒牙签等用品绝不 能混用,即防止在进行操作时相互污染。 3.勿使血清,红细胞悬液滴干燥,必要时可滴1~2滴生理盐水 六、要求 1.每位同学必须正确鉴定自己的血型。 2.将全组同学的血型列表统计。 七、思考题 1.只用A,B两种标准血清可以鉴定ABO血型吗?加用0型标准血清有何意义? 2.根据自己的血型,说明你能接受何种血型的血液和能给何种血型的人输血?为什么? 3.已知受血者和供血者的ABO血型相同,输血前需要做交叉配血吗?为什么? 在接受多名供血者输血的情况下,供血者之间要进行交叉配血吗
五、注意事项 1．红细胞悬液和标准血清均应新鲜，合格且无污染，以防出项假凝集现象。 2．在操作中，应严格分离各种检测用品，注意滴管和搅拌作用的玻璃棒、消毒牙签等用品绝不 能混用，即防止在进行操作时相互污染。 3．勿使血清，红细胞悬液滴干燥，必要时可滴1～2滴生理盐水。 六、要求 1．每位同学必须正确鉴定自己的血型。 2．将全组同学的血型列表统计。 七、思考题 1．只用A,B两种标准血清可以鉴定ABO血型吗？加用O型标准血清有何意义？ 2．根据自己的血型，说明你能接受何种血型的血液和能给何种血型的人输血？为什么？ 3．已知受血者和供血者的ABO血型相同，输血前需要做交叉配血吗？为什么？ 4．在接受多名供血者输血的情况下，供血者之间要进行交叉配血吗？
