仪器分析实验指导书应用化学、化学系编写重庆科技学院化学化工学院2020.12前言
仪 器 分 析 实 验 指 导 书 应用化学、化学系编写 重庆科技学院化学化工学院 2020.12 前 言
-1-《仪器分析实验》是一门实践性很强的课程，理论教学与实验教学是一个不可分割的完整体系。搞好实验教学，是完整掌握这门课程的重要环节。《仪器分析实验》的教学目的是为了巩固和加强学生对该课程基本原理的理解和掌握，树立准确的“量”的概念，培养学生独立思考问题、解决问题及实际操作的能力。为实现上述目的，特编写了本书。旨在通过《仪器分析实验》教学，使学生正确掌握基础分析化学的基本操作和基本技能，掌握各类指标的测定方法和测定原理，了解并熟悉一引些大型分析仪器的使用方法，培养学生严谨的科学态度，提高他们的动手能力及对实验数据的确分析能力，使其初步具备分析问题、解决问题的能力，为学生后续专业课程的学习及完成学位论文和走上工作岗位后参加科研、生产奠定必需的理论和实践基础。目录
- 1 - 《仪器分析实验》是一门实践性很强的课程，理论教学与 实验教学是一个不可分割的完整体系。搞好实验教学，是完整 掌握这门课程的重要环节。《仪器分析实验》的教学目的是为了 巩固和加强学生对该课程基本原理的理解和掌握，树立准确的 “量”的概念，培养学生独立思考问题、解决问题及实际操作 的能力。为实现上述目的，特编写了本书。旨在通过《仪器分 析实验》教学，使学生正确掌握基础分析化学的基本操作和基 本技能，掌握各类指标的测定方法和测定原理，了解并熟悉一 引些大型分析仪器的使用方法，培养学生严谨的科学态度，提 高他们的动手能力及对实验数据的确分析能力，使其初步具备 分析问题、解决问题的能力，为学生后续专业课程的学习及完 成学位论文和走上工作岗位后参加科研、生产奠定必需的理论 和实践基础。 目 录
-2-实验一紫外吸收光谱法测定水中的总酚实验二火焰原子吸收光谱法测定人发中的锌S实验三原子吸收光谱法测定食品中的铜实验四荧光光度法测定维生素B2的含量9.11实验五电位滴定法测定自来水中氯离子浓度13实验六酸度计的性能测试实验实验七苯系混合物的气相色谱分析一一归一化法定量15实验八气相色谱测定甲苯的含量（内标法）.17实验九乙酰水杨酸红外吸收光谱的测绘1923实验十苯甲酸红外吸收光谱的测绘一KBr晶体压片法制样实验十一氯离子选择性电极性能的测试实验十二牙膏中含氟量的测定-标准加入法实验十三紫外吸收光谱法测定水中的硝酸根实验十四高效液相色谱法基本操作训练实验十五反相键合相色谱测定苯和萘的含量（外标法）
- 2 - 实验一 紫外吸收光谱法测定水中的总酚.3 实验二 火焰原子吸收光谱法测定人发中的锌.5 实验三 原子吸收光谱法测定食品中的铜.7 实验四 荧光光度法测定维生素 B2 的含量. 9 实验五 电位滴定法测定自来水中氯离子浓度.11 实验六 酸度计的性能测试实验 13 实验七 苯系混合物的气相色谱分析——归一化法定量. 15 实验八 气相色谱测定甲苯的含量（内标法）.17 实验九 乙酰水杨酸红外吸收光谱的测绘.19 实验十 苯甲酸红外吸收光谱的测绘—KBr 晶体压片法制样. 23 实验十一 氯离子选择性电极性能的测试 实验十二 牙膏中含氟量的测定-标准加入法 实验十三 紫外吸收光谱法测定水中的硝酸根 实验十四 高效液相色谱法基本操作训练 实验十五 反相键合相色谱测定苯和萘的含量（外标法）
-3-实验一紫外吸收光谱法测定水中的总酚一、实验目的1.学会使用UV1100型紫外分光光度计；2．学会并掌握紫外吸收光谱曲线的绘制和测量波长的选择以及标准曲线的绘制。二、实验原理以同一个水样酸化后作空白对照，碱化后作测定样，用1cm石英比色血在292.6nm处测定含酚量较高的水样，用3cm石英比色皿在238nm处测定含酚量较低的水样。三、仪器、试剂1.UV1100型紫外分光光度计（附1cm石英皿1套）具塞磨口硬质玻璃试管（或比色管）10mL若干支吸量管1mL1支移液管10mL1支2.10mol/LNaOH水溶液3.0.5mol/LHCl水溶液4.0.250g/L苯酚标准溶液：准确称取25.0mg分析纯苯酚，用少量不含酚蒸馏水溶解，移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，混匀。此溶液苯酚含量为0.250mg/mL。5.不含酚蒸馏水：（1）蒸馏水加入少量高锰酸钾的碱性溶液（pH>11）后进行蒸馏制得（蒸馏过程中水应保持红色）。（2）于1L蒸馏水中加入0.2g经200C活化0.5h的活性炭粉末，充分振摇后，放置过夜。用双层中速滤纸过滤制得。四、实验内容1．绘制吸收光谱曲线和选择测量波长（1）用吸量管取0.8mL苯酚标准溶液（0.250mg/mL）2份，分别放入硬质玻璃试管中，用无酚蒸馏水稀释至10mL，摇匀。（2）其中一管中加1滴10mol/LNaOH溶液，另一管中加1滴0.5mol/LHCI溶液作空白。（3）以酸化标样作空白对照，碱化标样作测定样，在752型分光光度计上，取狭缝宽度为2.05mm，用1cm石英比色皿，在波长220～350nm范围内，从220m
- 3 - 实验一 紫外吸收光谱法测定水中的总酚 一、实验目的 1. 学会使用 UV1100 型紫外分光光度计； 2. 学会并掌握紫外吸收光谱曲线的绘制和测量波长的选择以及标准曲线的绘制。 二、实验原理 以同一个水样酸化后作空白对照，碱化后作测定样，用 1cm 石英比色皿在 292.6nm 处测定含酚量较高的水样，用 3cm 石英比色皿在 238nm 处测定含酚量较低 的水样。 三、仪器、试剂 1. UV1100 型紫外分光光度计（附 1cm 石英皿 1 套） 具塞磨口硬质玻璃试管（或比色管）10mL 若干支 吸量管 1mL 1 支 移液管 10mL 1 支 2. 10mol/LNaOH 水溶液 3. 0.5mol/LHCl 水溶液 4. 0.250g/L 苯酚标准溶液：准确称取 25.0mg 分析纯苯酚，用少量不含酚蒸馏水溶 解，移入 100 mL 容量瓶中，并稀释至刻度，混匀。此溶液苯酚含量为 0.250mg/mL。 5. 不含酚蒸馏水：（1）蒸馏水加入少量高锰酸钾的碱性溶液（pH＞11）后进行蒸馏 制得（蒸馏过程中水应保持红色）。（2）于 1L 蒸馏水中加入 0.2g 经 200℃活化 0.5h 的活性炭粉末，充分振摇后，放置过夜。用双层中速滤纸过滤制得。 四、实验内容 1. 绘制吸收光谱曲线和选择测量波长 （1）用吸量管取 0.8mL 苯酚标准溶液（0.250mg/mL）2 份，分别放入硬质玻璃 试管中，用无酚蒸馏水稀释至 10mL，摇匀。 （2）其中一管中加 1 滴 10mol/LNaOH 溶液，另一管中加 1 滴 0.5mol/LHCl 溶液 作空白。 （3）以酸化标样作空白对照，碱化标样作测定样，在 752 型分光光度计上，取 狭缝宽度为 2.05mm，用 1cm 石英比色皿，在波长 220～350nm 范围内，从 220nm
-4-起每隔10nm测定一次吸光度值，并做记录。以波长为横坐标，对应的吸光度为纵坐标绘制吸收光谱曲线，并选择测量波长。2.绘制标准曲线用吸量管分别吸取0.00，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00mL苯酚标准溶液（0.250mg/mL）各2份，分别放入试管中（请编上序号），用无酚蒸馏水稀释至10mL，混匀。此苯酚标准溶液系列对应的浓度为0.00，5.0，10.0，15.0，20.0，和25.0mg/L。同样以酸化标样作空白，碱性标样作测定样，在选定的工作波长处测定对应的吸光度值，做记录。以苯酚标准溶液的含量（mg/L）为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。3.水样的测定（1）取含酚水样10mL两份，放入硬质玻璃试管中。（2）其中一管中加入1滴10mol/LNaOH溶液，另一管中加入1滴0.5mol/LHC溶液，混匀。（3）以酸化水样为空白对照（调零），碱化水样作测定样，在选定测量波长处测定吸光度值，然后在标准曲线上查出对应水样中的总酚含量（mg/L）。4.实验数据处理（1）记录各步试验条件和测得数据：（2）绘制苯酚吸收光谱曲线，并选择测量波长；（3）绘制标准曲线，并由曲线上求算水样中总酚含量（mg/L）。五、注意事项该仪器较精密可靠，使用前必须认真阅读仪器说明书，认真听老师讲解与安排。避免因使用仪器不当而造成仪器性能下降甚至损坏仪器。六、思考题1.本实验中为什么使用石英比色皿？
- 4 - 起每隔 10nm 测定一次吸光度值，并做记录。以波长为横坐标，对应的吸光度为纵 坐标绘制吸收光谱曲线，并选择测量波长。 2. 绘制标准曲线 用吸量管分别吸取 0.00，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL 苯酚标准溶液 （0.250mg/mL）各 2 份，分别放入试管中（请编上序号），用无酚蒸馏水稀释至 10 mL， 混匀。此苯酚标准溶液系列对应的浓度为 0.00，5.0，10.0，15.0，20.0，和 25.0 mg/L。 同样以酸化标样作空白，碱性标样作测定样，在选定的工作波长处测定对应的吸光 度值，做记录。以苯酚标准溶液的含量（mg/L）为横坐标，对应的吸光度值为纵坐 标绘制标准曲线。 3. 水样的测定 （1）取含酚水样 10 mL 两份，放入硬质玻璃试管中。 （2）其中一管中加入 1 滴 10mol/LNaOH 溶液，另一管中加入 1 滴 0.5mol/LHCl 溶液，混匀。 （3）以酸化水样为空白对照（调零），碱化水样作测定样，在选定测量波长处测 定吸光度值，然后在标准曲线上查出对应水样中的总酚含量（mg/L）。 4.实验数据处理 （1）记录各步试验条件和测得数据； （2）绘制苯酚吸收光谱曲线，并选择测量波长； （3）绘制标准曲线，并由曲线上求算水样中总酚含量（mg/L）。 五、注意事项 该仪器较精密可靠，使用前必须认真阅读仪器说明书，认真听老师讲解与安排。 避免因使用仪器不当而造成仪器性能下降甚至损坏仪器。 六、思考题 1. 本实验中为什么使用石英比色皿？
-5-实验二火焰原子吸收光谱法测定人发中的锌一、实验目的1.掌握常用原子吸收光谱仪的操作方法2.理解火焰原子吸收光谱分析中工作曲线法的基本原理。3.掌握头发样品预处理技术。二、实验原理发样经洗涤、干燥处理后，称一定量用硝酸-高氯酸消化处理，将其微量锌以金属离子状态转入到溶液中，然后，按常规原子吸收光谱分析中的工作曲线法进行分析。锌在人和其他动物体内具有重要功能，它对生长发育、刨伤愈合、免疫预防都有重要作用。人发中的锌含量多少，标志着人体中微量锌含量是否正常。因此，分析人发中的锌具有重要意义。三、仪器与试剂1.仪器TAS一986型原子吸收分光光度计。火焙空心朗极灯2单色器光电检测器原子化系统试度地原子吸收光谱分析示意图2.试剂与试样锌离子标准溶液（5ug/mL）：准确称取1.0g高纯锌粒，用硝酸溶解处理，待锌粒消解完全后，用去离子定容至1000mL容量瓶，此时溶液浓度为1000ug/mL；移取10mL上述溶液于2000mL容量瓶中，用1%的稀硝酸定容。硝酸（优级纯）；高氯酸（分析纯）；头发样品。四、实验步骤1.发样采集与准备用不锈钢剪刀从头枕部剪取发样，要贴近头发剪取并弃去发梢，取发量以1g左右为宜，然后剪成1cm左右长。将发样放在100mL的烧杯中，用少量洗发精浸泡30min，用自来水冲洗干净
- 5 - 实验二 火焰原子吸收光谱法测定人发中的锌 一、实验目的 1．掌握常用原子吸收光谱仪的操作方法 2．理解火焰原子吸收光谱分析中工作曲线法的基本原理。 3. 掌握头发样品预处理技术。 二、实验原理 发样经洗涤、干燥处理后，称一定量用硝酸-高氯酸消化处理，将其微量锌以金 属离子状态转入到溶液中，然后，按常规原子吸收光谱分析中的工作曲线法进行分 析。 锌在人和其他动物体内具有重要功能，它对生长发育、刨伤愈合、免疫预防都 有重要作用。人发中的锌含量多少，标志着人体中微量锌含量是否正常。因此，分 析人发中的锌具有重要意义。 三、仪器与试剂 1.仪器 TAS—986 型原子吸收分光光度计。 原子吸收光谱分析示意图 2.试剂与试样 锌离子标准溶液（5μg/mL）：准确称取 1.0g 高纯锌粒，用硝酸溶解处理，待锌 粒消解完全后，用去离子定容至 1000mL 容量瓶，此时溶液浓度为 1000μg/mL；移 取 10mL 上述溶液于 2000mL 容量瓶中，用 1%的稀硝酸定容。 硝酸（优级纯）；高氯酸（分析纯）；头发样品。 四、实验步骤 1．发样采集与准备 用不锈钢剪刀从头枕部剪取发样，要贴近头发剪取并弃去发梢，取发量以 1 g 左 右为宜，然后剪成 1 cm 左右长。 将发样放在 100mL 的烧杯中，用少量洗发精浸泡 30min，用自来水冲洗干净
-6-再用去离子水洗涤3遍，于65～67℃的烘箱中干燥4小时（或在100℃于燥1小时），取出后放入干燥器中保存备用。2．消化处理称取上述处理过的发样0.2000g于100mL烧杯中，加入5mL浓硝酸，盖上表面血，在电热板上低温加热消解，待完全溶解以后，取下冷却。然后加入高氯酸1mL，再放在电热板上继续加热，冒白烟至溶液余1～2mL（不可蒸干），取下冷却后，用针式过滤器（0.45微米滤头）过滤溶液，用去离子水将其移入到25mL比色管中，稀释至刻度摇匀待测。每批试样需同时进行消化，制取二份空白溶液。3.仪器的工作条件见下表表1仪器工作条件参数仪器工作条件参数213.9测定波长/nm4灯电流/mA0.2狭缝宽度/mm1.47X10空气压力/Pa空气流量/L-min!6.5乙炔压力/Pa4.90X10°1.2乙炔流量/L·min7燃烧器高度/mm4.标准系列溶液的配制及吸光度测定吸取5μg/mL的锌标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0mL分别放入5个25mL的比色管中，用去离子水稀释至刻度摇匀。按上述工作条件测定各标准溶液的吸光度。5.试液吸光度的测定将经消化处理的发样溶液和空白液用测定标准溶液系列相同的工作条件，测定其吸光度。五、数据处理1.将标准溶液系列和发样的测定结果按下表列出：表2锌标准曲线序号125空白发样34Zn(μg/mL)吸光度2.以标准系列溶液测定结果作A～C工作曲线。3：用发样吸收度减去空白吸收度所得值，从工作曲线中找出相应浓度。然后按发样称量算出Zn的含量(ppm)。六、问题讨论1.发样的处理与消解完全，对分析结果影响较大，本实验在发样处理等方面应注意哪些问题？
- 6 - 再用去离子水洗涤 3 遍，于 65～67℃的烘箱中干燥 4 小时（或在 100℃干燥 1 小时）， 取出后放入干燥器中保存备用。 2．消化处理 称取上述处理过的发样 0.2000 g 于 100mL 烧杯中，加入 5 mL 浓硝酸，盖上表 面皿，在电热板上低温加热消解，待完全溶解以后，取下冷却。然后加入高氯酸 1 mL， 再放在电热板上继续加热，冒白烟至溶液余 1～2 mL(不可蒸干)，取下冷却后，用针 式过滤器（0.45 微米滤头）过滤溶液，用去离子水将其移入到 25 mL 比色管中，稀 释至刻度摇匀待测。每批试样需同时进行消化，制取二份空白溶液。 3. 仪器的工作条件见下表 表 1 仪器工作条件参数 仪器工作条件 参数 测定波长/nm 213.9 灯电流/mA 4 狭缝宽度/mm 0.2 空气压力/Pa 1.47×10 5 空气流量/L·min -1 6.5 乙炔压力/Pa 4.90×10 5 乙炔流量/L·min -1 1.2 燃烧器高度/mm 7 4．标准系列溶液的配制及吸光度测定 吸取 5 μg/mL 的锌标准溶液 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0 mL 分别放入 5 个 25 mL 的 比色管中，用去离子水稀释至刻度摇匀。按上述工作条件测定各标准溶液的吸光度。 5．试液吸光度的测定 将经消化处理的发样溶液和空白液用测定标准溶液系列相同的工作条件，测定 其吸光度。 五、数据处理 1. 将标准溶液系列和发样的测定结果按下表列出： 表 2 锌标准曲线 序号 1 2 3 4 5 空白发样 Zn(μg/mL) 吸光度 2. 以标准系列溶液测定结果作 A～C 工作曲线。 3．用发样吸收度减去空白吸收度所得值，从工作曲线中找出相应浓度。然后， 按发样称量算出 Zn 的含量(ppm)。 六、问题讨论 1．发样的处理与消解完全，对分析结果影响较大，本实验在发样处理等方面应 注意哪些问题?
-7-实验三原子吸收光谱法测定食品中的铜一、实验目的1：掌握常用原子吸收光谱仪的操作方法。2．掌握原子吸收光谱分析中标准加入法进行定量分析的方法。3.学会食品样品溶液的制备技术。二、实验原理铜是原子吸收光谱分析中经常和最容易测定的元素，在贫燃的空气乙炔火焰干扰很少。样品溶液中的铜离子在火焰温度下变成基态铜原子，由光源（铜空心阴极灯）辐射出的铜原子特征谱线（共振波长324.8nm）在通过原子化系统铜原子蒸汽时被强烈吸收，其吸收的程度与火焰中铜原子蒸汽浓度的关系符合朗伯比尔定律，铜原子蒸汽浓度与溶液中离子的浓度成正比，在一定条件下，测定一系列不同浓度铜离子标准溶液的吸光度值，再根据铜未知液的吸光度值即可求出未知液中铜离子浓度。为减少实际样品中基体效应影响，可以采用标准加入法测定样品中待测离子含量。标准加入法是将已知的不同浓度的标准溶液加到几个相同量的待测试样溶液中，然后一起测定，并绘制分析曲线，将直线外推延长至与横轴相交，其交点与原点的距离所相应的浓度，即为待测试样溶液的浓度。这种方法可以消除一些基体的于扰，但不能补偿由背景吸收引起的影响，因此，采用标准加入法时最好对背景进行校正。A080.41.2/20103040..020ug/n1三、仪器与试剂1.仪器TAS一986型原子吸收分光光度计铜空心阴极灯
- 7 - 实验三 原子吸收光谱法测定食品中的铜 一、实验目的 1．掌握常用原子吸收光谱仪的操作方法。 2．掌握原子吸收光谱分析中标准加入法进行定量分析的方法。 3．学会食品样品溶液的制备技术。 二、实验原理 铜是原子吸收光谱分析中经常和最容易测定的元素，在贫燃的空气~乙炔火焰 干扰很少。样品溶液中的铜离子在火焰温度下变成基态铜原子，由光源（铜空心阴 极灯）辐射出的铜原子特征谱线（共振波长 324.8nm）在通过原子化系统铜原子蒸 汽时被强烈吸收，其吸收的程度与火焰中铜原子蒸汽浓度的关系符合朗伯比尔定律， 铜原子蒸汽浓度与溶液中离子的浓度成正比，在一定条件下，测定一系列不同浓度 铜离子标准溶液的吸光度值，再根据铜未知液的吸光度值即可求出未知液中铜离子 浓度。 为减少实际样品中基体效应影响，可以采用标准加入法测定样品中待测离子含 量。标准加入法是将已知的不同浓度的标准溶液加到几个相同量的待测试样溶液中， 然后一起测定，并绘制分析曲线，将直线外推延长至与横轴相交，其交点与原点的 距离所相应的浓度，即为待测试样溶液的浓度。这种方法可以消除一些基体的干扰， 但不能补偿由背景吸收引起的影响，因此，采用标准加入法时最好对背景进行校正。 三、仪器与试剂 1．仪器 TAS—986 型原子吸收分光光度计 铜空心阴极灯
-8-2.试剂与试样铜标准溶液：取1.0000g纯铜，加入50mLHNO3，加热溶解，煮沸除去氮氧化物，冷至室温，移入1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为1mg/mL。吸取上述溶液，稀释成10μg·mL"的铜工作溶液。浓硝酸、浓硫酸、过氧化氢、待测食品样品。四、实验内容1.试样消解（以饮料、黄酒、料酒等为例）移取100mL试样溶液于250mL烧杯中，置于封闭式电炉上加热煮沸，将大量水分、酒精等蒸发至溶液呈现浆液状，取下冷却，慢慢加入20mL浓硫酸于上述烧杯中消解有机物至澄清透明状溶液，若消解不完全可以加510mL浓硝酸继续加热消解（若有炭化的黑色物质出现可以加入5~10mL过氧化氢溶液），待试样消解完全后，取下冷却，用针式过滤器（0.45微米）过滤溶液，用去离子水洗涤烧杯并过滤至100mL容量瓶中，定容摇匀备用。2.工作曲线的绘制（标准加入法）分取试样溶液10.0mL五份于5个25mL比色管（或容量瓶）中，分别加入10μg·mL铜标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0mL，用水稀释至刻度，摇匀。按仪器条件测量吸光度，以比色管中铜离子标准溶液浓度为横坐标，溶液吸光度值为纵坐标绘制工作曲线。五、数据处理1.绘制分析曲线，将直线外推与横轴相交，其交点与原点的距离所相应的浓度，即为试液的浓度，从而计算出试样中铜的百分含量。六、问题讨论1.工作曲线法与标准加入法定量分析各有什么优点？在什么情况下采用这些方法？2.同一样品采样工作曲线法和标准加入法测量结果有无偏差？产生偏差的原因？七、注意事项1.样品消解时温度不能太高，避免炭化。2.实验过程中样品溶液必须通过滤膜过滤后，再上仪器进行吸光度测定
- 8 - 2．试剂与试样 铜标准溶液：取 1.0000g 纯铜，加入 50mLHNO3，加热溶解，煮沸除去氮氧化物， 冷至室温，移入 1000mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为 1mg/mL。 吸取上述溶液，稀释成 10μg·mL -1的铜工作溶液。 浓硝酸、浓硫酸、过氧化氢、待测食品样品。 四、实验内容 1.试样消解（以饮料、黄酒、料酒等为例） 移取 100mL 试样溶液于 250mL 烧杯中，置于封闭式电炉上加热煮沸，将大量水 分、酒精等蒸发至溶液呈现浆液状，取下冷却，慢慢加入 20mL 浓硫酸于上述烧杯中 消解有机物至澄清透明状溶液，若消解不完全可以加 5~10mL 浓硝酸继续加热消解 （若有炭化的黑色物质出现可以加入 5~10mL 过氧化氢溶液），待试样消解完全后， 取下冷却，用针式过滤器（0.45 微米）过滤溶液，用去离子水洗涤烧杯并过滤至 100mL 容量瓶中，定容摇匀备用。 2.工作曲线的绘制（标准加入法） 分取试样溶液 10.0mL 五份于 5 个 25mL 比色管（或容量瓶）中，分别加入 10μg·mL -1 铜标准溶液 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0mL，用水稀释至刻度，摇匀。按仪器条件测 量吸光度，以比色管中铜离子标准溶液浓度为横坐标，溶液吸光度值为纵坐标绘制 工作曲线。 五、数据处理 1．绘制分析曲线，将直线外推与横轴相交，其交点与原点的距离所相应的浓度，即 为试液的浓度，从而计算出试样中铜的百分含量。 六、问题讨论 1．工作曲线法与标准加入法定量分析各有什么优点？在什么情况下采用这些方法？ 2．同一样品采样工作曲线法和标准加入法测量结果有无偏差？产生偏差的原因？ 七、注意事项 1.样品消解时温度不能太高，避免炭化。 2.实验过程中样品溶液必须通过滤膜过滤后，再上仪器进行吸光度测定
-9-实验四荧光光度法测定维生素B2的含量一。实验目的1.掌握荧光光度法测定实际样品中维生素B,的方法原理。2.掌握荧光光度计的操作技术。二，实验原理维生素B，又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶。维生素B,易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂。在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。维生素B,水溶液在430~440nm蓝光或紫外光照射下会发生绿色荧光，荧光峰在535nm，在pH6~7的溶液中荧光强度最大，在pH11的碱性溶液中荧光消失。由于维生素B在碱性溶液中经光线照射，会发生光分解而转化为光黄素，后者的荧光比核黄素的荧光强的多。因此，测量维生素B,的荧光时，溶液要控制在酸性范围内，且须在避光条件下进行。三，仪器与试剂荧光分光光度计。10ug/mL维生素B,标准溶液：准确称取10.Omg维生素B，用热蒸馏水溶解后，转入1L棕色容量瓶中，冷却后加蒸馏水至标线，摇匀，置于暗处保存。冰乙酸（AR）；多维葡萄糖粉（或核黄素片）试样。四．实验内容（1）标准曲线的绘制于6只50mL容量瓶中，分别加入10μg/mL维生素B,标准溶液0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mL，再各加入冰乙酸2.0mL，加水至标线，摇匀。在970CRT荧光分光光度计上，用1cm荧光比色皿于激发波长440nm，发射波长540nm处，测量标准系列溶液的荧光强度。(2）多维葡萄糖粉（或核黄素片）中维生素B,的测定准确称取0.150.2g多维葡萄糖粉（或核黄素片）试样，用少量水溶解后转入50mL容量瓶中，加冰乙酸2mL，摇匀。在相同的测量条件下，测量其荧光强度。平
- 9 - 实验四 荧光光度法测定维生素 B2 的含量 一. 实验目的 1. 掌握荧光光度法测定实际样品中维生素 B2的方法原理。 2.掌握荧光光度计的操作技术。 二. 实验原理 维生素 B2，又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶。维生素 B2易溶于 水而不溶于乙醚等有机溶剂。在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对 热稳定。 维生素 B2水溶液在 430~440nm 蓝光或紫外光照射下会发生绿色荧光， 荧光峰在 535nm，在 pH 6~7 的溶液中荧光强度最大，在 pH 11 的碱性溶液 中荧光消失。 由于维生素 B2在碱性溶液中经光线照射，会发生光分解而转化为光 黄素，后者的荧光比核黄素的荧光强的多。因此，测量维生素 B2的荧光时， 溶液要控制在酸性范围内，且须在避光条件下进行。 三. 仪器与试剂 荧光分光光度计。10μg/mL 维生素 B2标准溶液：准确称取 10.0mg 维生 素 B2，用热蒸馏水溶解后，转入 1L 棕色容量瓶中，冷却后加蒸馏水至标线， 摇匀，置于暗处保存。 冰乙酸（AR）；多维葡萄糖粉（或核黄素片）试样。 四. 实验内容 (1) 标准曲线的绘制 于 6 只 50mL 容量瓶中，分别加入 10μg/mL 维生素 B2标准溶液 0.50、 1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mL，再各加入冰乙酸 2.0mL，加水至标线， 摇匀。在 970 CRT 荧光分光光度计上，用 1cm 荧光比色皿于激发波长 440nm， 发射波长 540nm 处，测量标准系列溶液的荧光强度。 (2) 多维葡萄糖粉（或核黄素片）中维生素 B2的测定 准确称取 0.15~0.2g 多维葡萄糖粉（或核黄素片）试样，用少量水溶解后转入 50mL 容量瓶中，加冰乙酸 2mL，摇匀。在相同的测量条件下，测量其荧光强度。平