贵州师范大学 《DNA 重组技术实验》课程大纲 （2014 级使用） 院（部）： 生命科学学院 编制人：_洪鲲_ 审核人：_ 适用专业： 生物技术 2016 年 2 月 25 日
《DNA 重组技术》实验大纲 课程名称：DNA 重组技术 课程代码： 学 分：2 学 时：48 适用专业（专业类）：生物技术 一、课程的目的与任务 本课程是一门专业实验课，综合了目的基因的分离、克隆，载体的构建等方面的实验内容， 在注重专业性和可操作性的前提下突出先进性和系统性，加强教学内容的选择性。通过本课程的 学习和实践，使学生对基因工程的全过程有系统、明确的认识，达到熟识、理解并掌握 DNA 重组 实验原理和操作方法，提高分析问题和解决问题的能力，开拓创新能力，为从事生物技术及其相 关领域的科学研究工作打下基础。 二、实验项目与学时分 请根据课程性质和目的以及实验条件，增加选作实验； 序 号 实验项目 学 时 实验性质 备注 验 证 综 合 设 计 必 做 选 做 1 质粒 DNA 的提取 8 √ √ 2 目的基因与载体的双酶切和连接 8 √ √ 3 大肠杆菌感受态细胞的制备 8 √ √ 4 重组质粒的转化 8 √ √ 5 阳性重组质粒的筛选 8 √ √ 6 重组质粒微量提取与鉴定 8 √ √ 合计 ？ ？ ？ 三、课程的基本内容 实验一：质粒 DNA 的提取 1．实验目的：学习质粒 DNA 的提取原理和方法，学习琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 的方法和技 术。 2．实验内容：培养和收集含有质粒载体的大肠杆菌 DH5α菌体；利用碱裂法提取质粒；对提取 的质粒进行 PCR 鉴定。 实验二：目的基因与载体的双酶切和连接 1．实验目的：学习使用限制性内切酶及 DNA 连接酶进行 DNA 酶切、重组的原理和方法。 2．实验内容：使用限制性内切酶分别对质粒和目的基因(如绿色荧光蛋白基因（GFP）)进行双 酶切反应，并回收所需片段；将目的基因与质粒回收片段用连接酶进行连接。 实验三：大肠杆菌感受态的制备 1．实验目的：学习 CaCl2 法制备大肠杆菌感受态细胞的方法
2．实验内容：用 CaCl2 法制备大肠杆菌 DH5α感受态细胞。 实验四：重组质粒的转化 1．实验目的：了解和掌握质粒 DNA 转化大肠杆菌感受态细胞的原理和方法。 2．实验内容：用重组质粒连接液转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞，在含有氨苄青霉素（Amp） 的 LB 固体培养基上进行培养。 实验五：阳性重组质粒的筛选 1．实验目的：掌握菌液 PCR 法鉴定重组质粒 DNA 的基本原理和操作。 2．实验内容：挑选含 Amp 平板上的菌落，通过菌液 PCR 的方法筛选阳性重组质粒。 实验六：重组质粒微量提取与鉴定 1．实验目的：了解和掌握双酶切法鉴定目的基因是否插入质粒载体的原理和方法。 2．实验内容：利用碱裂法提取阳性重组质粒，用限制性内切酶进行双酶切鉴定。 四、课程的考核 考核方式：笔试。 注明该门实验课程的考核形式，即考核还是考试； 实验成绩评分方法：出勤率占 10%，课堂表现占 10%，实验报告占 50%，期末考试占 30%。 写出期末考试建议 五、课程参考书、指导书 1．洪鲲. 《DNA 重组技术实验指导》.自编教材.时间 2．王关林. 《基因工程原理与技术》. 科学出版社. 1998. 3．？加 3 本以上近期出版的相关实验指导参考书