贵州师范大学 《细胞生物学》实验教学大纲 （2013 级使用） 院（部）： _生命科学学院_ 编制人：_江昱 _ 审核人：_ 适用专业： _生物科学 生物技术_ 2015 年 7 月 16 日
《细胞生物学》实验大纲 课程名称：细胞生物学实验 课程代码：2210900019 学 分： 1 学 时：16 适用专业（专业类）：生物技术、生物科学 一、课程的目的与任务 细胞生物学是生命科学四大基础学科之一，它从细胞水平、亚细胞水平和分子水平三个不同层 次上研究细胞的结构功能和生命活动的基本规律，位于分子生物学与个体生物学之间，同他们互相 衔接，互相渗透。细胞生物学实验课程教学以理论课教学为基础，理论与实践相结合，加深对所学 知识的理解，对实验仪器要求较高，因此细胞生物学实验课程是生命科学相关专业学生的必修课程。 本课程的任务是通过实验教学，使学生初步掌握各类显微镜使用、细胞大小的测定、细胞膜渗透现 象及影响因素、细胞凝集、叶绿体等细胞器分离及观察、Feulgen 反应、Unna 反应、细胞中高尔基 体和线粒体的形态结构特征及分布规律、光镜下观察细胞骨架的基本形态结构操作方法、活体染色 法的实验原理及液泡和线粒体的活体染色方法、原生质体的分离与融合等。同时学会使用普通光学 显微镜、荧光显微镜、离心机、测微尺等细胞生物学实验常用仪器，了解电子显微镜、暗视野显微 镜、细胞融合仪等操作和应用。开设本课程的目的是使学生掌握细胞生物学实验设备的操作方法， 使学生更加牢固地掌握基础知识，更重要的是培养学生的动手能力和科学研究能力，为学生学习生 命科学中的其他相关课程作好基础准备。同时也使学生具备观察和研究细胞结构与功能的基本方法， 学会发现问题和解决问题的基本技能，为毕业后从事生物学相关的科研和教学工作奠定基础。 二、实验项目与学时分配 序号 实验项目 学时 实验性质 备注 验 证 综 合 设 计 必 做 选 做 1 叶绿体的提取及荧光 观察 3 √ √ 2 细胞膜的渗透性及细 胞的凝集反应 4 √ √ 3 光镜下植物细胞骨架 的制片技术及观察 3 √ √ 4 线粒体和液泡系的超 活染色与观察 3 √ √ 5 DNA 的细胞化学反应 3 √ √ 6 Unna 染色法显示 DNA 与 RNA 3 √ √ 7 电子显微镜演示 3 √ √ 8 植物原生质体的分离 4 √ √
和融合 9 细胞大小的测定 3 √ √ 10 细胞核及线粒体的荧 光观察 3 √ √ 合计 32 5 4 1 5 5 三、课程的基本内容 实验一：叶绿体的提取及荧光观察 1．实验目的： （1）通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法； （2）观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。 2．实验内容： （1）叶绿体悬浮液的制备（离心机的应用）； （2）叶绿体的显微与荧光观察（荧光显微镜的应用）。 实验二：细胞膜的渗透性及细胞的凝集反应 1．实验目的： （1）了解细胞膜的表面结构； （2）了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞膜的速度。 2．实验内容： （1）细胞凝集反应 （2）细胞膜的渗透性 实验三：光镜下植物细胞骨架的制片技术及观察 1．实验目的： （1）观察光学显微镜下细胞骨架的结构； （2）了解显示植物细胞骨架的方法及其原理。 2．实验内容： （1）材料处理； （2）制片观察； （3）绘图。 实验四：线粒体和液泡系的超活染色与观察 1．实验目的： （1）观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布； （2）学习一些细胞器的超活染色技术。 2．实验内容： （1）人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察； （2）洋葱内表皮细胞线粒体的超活染色； （3）黄豆根尖细胞液泡系的中性红染色观察。 实验五：DNA 的细胞化学反应 1．实验目的： （1）了解 Feulgen 反应的原理； （2）掌握有关的操作方法。 2．实验内容： （1）实验组装片制作； （2）对照组装片制作；
（3）对比观察，并绘图。 实验六：Unna 染色法显示 DNA 与 RNA 1．实验目的： （1）掌握显示细胞内 RNA 和 DNA 的主要细胞化学方法； （2）了解 RNA 和 DNA 在细胞内的一般分布状况。 2．实验内容： （1）实验组装片制作； （2）对照组装片制作； （3）对比观察，并绘图。 实验七：电子显微镜演示 1．实验目的： （1）了解电子显微镜的工作原理和结构； （2）观摩超薄切片技术演示；了解电镜图像反差来源的基础； （3）判断、识别电镜下细胞中的各种亚显微结构。 2．实验内容： （1）制片及扫描电子显微镜观察； （2）超薄切片（取材——固定——脱水——包埋——切片——染色——镜检）； （3）透射电子显微镜观察。 实验八：植物原生质体的分离和融合 1．实验目的： （1）掌握原生质体分离的方法； （2）了解并掌握利用 PEG 原生质体融合的原理和方法； （3）掌握原生质体的游离、纯化、收集和融合的技术。 2．实验内容： （1）植物原生质体的分离与纯化； （2）生质体融合； （3）原生质的培养。 实验九：细胞大小的测定 1．实验目的： （1）观察几种细胞的形态结构： （2）掌屋用测微尺测定细胞大小的原理和方法。 2.实验内容： 细胞形态观察： （1）人口腔上皮细胞临时装片的制作与显微观察； （2）洋葱内表皮临时装片的制作与显微观察； （3）葫芦藓叶片临时装片的制作与显微观察； （4）鸡血红细胞临时装片的制作与显微观察； （5）甜椒表皮临时装片的制作与显微观察； 细胞大小测量 （1）目镜测微尺的校正 （2）将制作的各种细胞临时装片置于载物台上，测定细胞的大小（包括长径和短径）。 实验十：细胞核及线粒体的荧光观察 1．实验目的： （1）初步了解荧光显微镜的基本组件、位置和基本光路；
（2）初步掌握荧光显微镜的基本调节步骤。 （3）通过在荧光显微镜下观察口腔上皮细胞的细胞核和线粒体，了解荧光探针与细胞成分的 结合特性和光谱特性。 2．实验内容： （1）细胞核的染色及荧光观察； （2）线粒体的染色及荧光观察。 四、课程的考核（宋体 五号 粗体）：内容（宋体 五号） 1．考核方式：考核； 2．考核方法：出勤＋课程报告＋期末考试； 3．成绩评定：总评成绩 100 分＝平时 70 分＋期末考试 30 分 平时成绩： 考勤考纪：10 分 课程报告：60 分 期末考试的考核内容为笔试或实验技术操作：30 分。 按优、良、中、及格、不及格五级分制记分。 五、课程参考书、指导书 1．曾宪录，巴雪青，朱筱娟. 细胞生物学实验指导. 第一版. 高等教育出版社. 2011. 2．桑建利，谭信. 细胞生物学实验指导. 第一版. 科学出版社. 2010. 3．龚宁．细胞生物学实验指导．自编教材．2010． 4．项荣．细胞生物学实验指导．第一版．湖南科学技术出版社．2014．