贵州师范大学 生物化学与分子生物学实验课程大纲 （2014 级使用） 院（部）： 生命科学学院 编制人：_ 审核人：_ 适用专业：生物科学、生物技术、生物工程、园艺 2015 年 7 月 15 日
《生物化学与分子生物学》实验大纲 课程名称：生物化学与分子生物学实验 课程代码：2210900017 学 分：2 学 时：32 适用专业（专业类）：生物科学、生物技术、生物工程、园艺 一、课程的目的与任务 生物化学与分子生物学综合实验课是在学习《生物化学》与《分子生物学》理论课的基础 上进行的一个实践性环节。本课程的教学任务是让学生在实验中学习和掌握层析、电泳、滴定、 分光光度、离心、质粒提取、基因组 DNA 提取、PCR 扩增、DNA 重组等生物化学与分子生物 学相关的实验技术的原理及方法；同时学会使用电泳仪、分光光度计、离心机、PCR 仪等基础 生物化学与分子生物仪器；在此基础上培养学生提出问题、分析问题、解决问题的能力。课程 目的是加深和巩固对生物化学与分子生物学课程中基本理论知识的理解和掌握，掌握该课程中 最基本实验技术的原理和操作以及相关仪器的正确使用。培养学生的动手能力和创新能力。同 时训练学生理论知识的运用能力、实验操作技能、仪器仪表的使用能力、实验数据的处理和分 析能力。 二、实验项目与学时分配 序号 实验项目 学 时 实验性质 备注 验 证 综 合 设 计 必 做 选 做 1 氨基酸的分离 3 √ √ 2 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 3 √ √ 3 甲醛滴定法测定氨基酸含量 3 √ √ 4 糖的定量测定 3 √ √ 5 酪蛋白的制备 3 √ √ 6 蛋白质含量测定 3 √ √ 7 影响酶促反应速度的因素 3 √ √ 8 酶的特性 3 √ √ 9 发酵过程中无机磷的利用 3 √ √ 10 维生素 c 的定量测定 3 √ √ 11 基因组 DNA 的提取制备及检测 4 √ √ 12 质粒 DNA 的提取制备及检测 4 √ √ 13 总 RNA 的提取制备及检测 3 √ √ 14 PCR 基因扩增实验 4 √ √ 15 大肠杆菌感受态细胞的制备及 重组 DNA 转化与筛选 6 √ √
16 聚丙烯酰胺凝胶电泳 6 √ √ 17 层析实验 6 √ √ 18 自拟题目设计性实验 6 √ √ 合计 69 2 12 4 5 13 三、课程的基本内容 实验一：氨基酸的分离 1．实验目的： （1）掌握纸层析法分离氨基酸的基本原理； （2）掌握纸层析法分离氨基酸的操作方法； （3）学习并了解分配层析的原理。 2．实验内容： （1）采用纸层分析法分离鉴定几种常见氨基酸（如赖氨酸、苏氨酸、脯氨酸、缬氨酸等）； （2）利用展层结果，测量迁移距离并根据公式计算个氨基酸的迁移率 Rf 值。 实验二：血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 1．实验目的： （1）了解电泳的基本原理； （2）学习醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法及操作。 2．实验内容： （1）以醋酸纤维薄膜作为电泳支持物,分离血清中的几种蛋白质； （2）蛋白质的染色及观察。 实验三：甲醛滴定法测定氨基酸含量 1．实验目的： 掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。 2．实验内容： （1）中性甲醛的制备； （2）用甲醛滴定法测氨基氮； （3）根据滴定结果计算氨基氮含量。 实验四：糖含量的测定 1．实验目的： （1）了解蔬菜和食品中糖含量测定的原理和方法； （2）掌握分光光度计的使用方法。 2．实验内容： （1）标准曲线的制作； （2）样品制备； （3）用蒽酮比色法测定样品中糖原或者还原性糖的含量。 实验五：酪蛋白的制备 1．实验目的： （1）了解从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法； （2）掌握离心机的使用方法。 2．实验内容： （1）采用沉淀法分离牛乳中酪蛋白； （2）计算牛乳中酪蛋白得率。 实验六：蛋白质含量的测定
1．实验目的： （1）掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质含量的原理与方法； （2）了解测定蛋白质含量的各种方法及原理。 2．实验内容： （1）考马斯亮蓝法标准曲线的制作； （2）样品制备； （3）用考马斯亮蓝法等测定样品中蛋白质含量。 实验七：影响酶促反应速度的因素 1．实验目的： 了解温度、PH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。 2．实验内容： （1）激活剂对唾液酶促反应速度的影响。 （2）抑制剂对唾液酶促反应速度的影响。 （3）pH 值对唾液酶促反应速度的影响。 （4）温度对唾液酶促反应速度的影响。 实验八：酶的特性 1．实验目的： （1）了解酶的活性测定方法； （2）了解酶对底物催化的专一性。 2．实验内容： （1）唾液淀粉酶专一性实验； （2）唾液淀粉酶活性测定。 实验九：发酵过程中无机磷的利用 1．实验目的： （1）了解发酵过程中无机磷的作用； （2）掌握定磷法的原理和方法。 2．实验内容： （1）标准曲线制作； （2）酵母发酵； （3）用钼蓝法测定酵母发酵过程对无机磷的利用情况。 实验十：维生素 C 的定量测定 1．实验目的： （1）掌握定量测定维生素 C 的原理和方法； （2）了解蔬菜、水果中维生素 C 含量情况。 2．实验内容： （1）猕猴桃等水果、蔬菜样品制备； （2）标准液滴定； （2）氧化还原滴定法测定维样品中生素 C 含量。 实验十一：基因组 DNA 的提取制备及检测 1．实验目的： （1）掌握基因组 DNA 的提取原理及方法 （2）了解基因组 DNA 的各种检测方法和原理。 2．实验内容： （1）用酚/氯仿抽提法提取基因组 DNA；
（2）比色法检测基因组 DNA 的浓度。 实验十二：质粒 DNA 的提取制备及检测 1．实验目的： （1）了解质粒 DNA 的提取原理和方法； （2）掌握琼脂糖凝胶电泳原理和方法。 2．实验内容： （1）细菌培养； （2）碱裂解法制备质粒 DNA； （3）制备的质粒 DNA 进行琼脂糖凝胶电泳检测。 实验十三：总 RNA 的提取制备及检测 1．实验目的： （1）了解真核生物基因组 RNA 提取的一般原理。 （2）掌握提取 RNA 的方法和步骤。 （3）了解 RNA 纯度的检测。 2．实验内容： （1）破碎细胞，用有机溶剂抽提总 RNA； （2）利用紫外分光光度计检测 RNA 的纯度。 实验十四：PCR 扩增目的基因 1．实验目的： （1）掌握 PCR 反应的基本原理； （2）掌握 PCR 反应体系的构建和实验技术。 （3）掌握琼脂糖凝胶电泳的原理及操作技术。 2．实验内容： （1）PCR 体系构建和实验； （2）PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳和分析检测。 实验十五：大肠杆菌感受态细胞的制备及重组 DNA 转化与筛选 1．实验目的： （1）学习 CaCl2 法制备大肠杆菌感受态细胞的方法； （2）掌握质粒 DNA 转化大肠杆菌感受态细胞的原理和方法； （3）掌握重组 DNA 转化与筛选。 2．实验内容： （1）CaCl2 制备感受态细胞； （2）重组 DNA 的转化、培养及重组子的筛选； （3）计算转化率。 实验十六：聚丙烯酰胺凝胶电泳 1．实验目的： （1）掌握 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理； （2）掌握垂直板电泳的基本操作； （3）学会用该方法测定蛋白质的相对分子量。 2．实验内容： （1）凝胶的制备； （2）加样及电泳的过程； （3）染色、脱色及实验结果分析； （4）计算未知蛋白质的相对分子量
实验十七：层析实验 1．实验目的： （1）了解柱层析的基本原理； （2）掌握其操作技术； （3）掌握利用该技术测定蛋白质分子量。 2．实验内容： （1）柱子的制备、加样及层析分离过程； （2）标准曲线制作； （3）测定未知蛋白质分子量。 实验十八：自拟题目设计性实验 1．实验目的： （1）培养学生的自主设计和创新能力； （2）培养学生综合运用知识的能力。 2．实验内容： （1）学生自己设计实验内容； （2）根据学生设计实验方案结合实验室情况，师生共同对实验设计进行修改和完善； （3）实验方案确定，学生进行实验操作。 四、课程的考核 考核方式：考核。 实验成绩评分方法：出勤率占 10%，课堂表现占 10%，实验报告占 50%，期末考试占 30%。 考试可以采用试卷的方式，考查实验技术的原理、操作方法、注意事项；也可以采用现场考查 学生对仪器的操作并简述其原理及其 五、课程参考书、指导书 1．刘煜.《生物化学实验指导》. 第一版.人民卫生出版社.2007. 2．宋方洲,何凤田，马永平等. 《生物化学与分子生物学实验》.第一版.科学出版社.2008. 3. 万晴姣. 《生物化学实验指导》. 自编教材.2012. 4. 龚朝辉，郭俊明.《生物化学与分子生物学实验指导》.双语版.浙江大学出版社.2012