贵州师范大学DAN重组技术实验课程大纲（2013级使用）院（部）：生命科学学院编制人：审核人：生物技术适用专业：2015年7月15日
贵州师范大学 DAN 重组技术实验课程大纲 （2013 级使用） 院（部）： 生命科学学院 编制人：_ 审核人：_ 适用专业： 生物技术 2015 年 7 月 15 日
《DNA重组技术实验》课程大纲课程名称：DNA重组技术实验课程代码：学分：2学时：32适用专业（专业类）：生物技术一、课程的目的与任务基因重组技术实验课是在学习《分子生物学》理论课的基础上进行的一个实践性环节。本课程的教学任务是让学生在实验中学习和掌握限制性内切酶的酶切方法、凝胶电泳分离及回收技术、PCR扩增、DNA重组以及重组子的鉴定和筛选等进行基因重组技术所需要的一系列实验技术的原理及方法：同时深入理解重组某特定基因时的试验思路并学会试验流程设计：在此基础上培养学生提出问题、分析问题、解决问题的能力。课程且的是培养学生主动思考和主动动手的能力，通过对实际操作和数据处理等的规范要求培养其严谨的科研态度。实验项目与学时分配二、实验性质备注学序号实验项目时设少选验综做证合计做VV18DNA重组28/V大肠杆菌DH5α的转化38VV重组DNA的PCR筛选及提取8EGFP在BL21菌株中的诱导V4V表达及检测32合计1241三、课程的基本内容实验一：DNA重组1.实验目的：（1）学习使用限制性内切酶及DNA连接酶进行DNA酶切、重组的原理和方法；（2）学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。2.实验内容：（1）用限制性内切酶将实验所需片段切，进行重组连接：（2）利用琼脂糖凝胶电泳检测目的基因片段酶切和重组是否成功（3）根据DNA回收试剂盒说明进行回收实验。实验二：大肠杆菌DH5α的转化1.实验目的：了解和掌握质粒DNA转化大肠杆菌细胞的原理和方法：2.实验内容：
《DNA 重组技术实验》课程大纲 课程名称：DNA 重组技术实验 课程代码： 学 分：2 学 时：32 适用专业（专业类）：生物技术 一、课程的目的与任务 基因重组技术实验课是在学习《分子生物学》理论课的基础上进行的一个实践性环节。本 课程的教学任务是让学生在实验中学习和掌握限制性内切酶的酶切方法、凝胶电泳分离及回收 技术、PCR 扩增、DNA 重组以及重组子的鉴定和筛选等进行基因重组技术所需要的一系列实 验技术的原理及方法；同时深入理解重组某特定基因时的试验思路并学会试验流程设计；在此 基础上培养学生提出问题、分析问题、解决问题的能力。课程目的是培养学生主动思考和主动 动手的能力，通过对实际操作和数据处理等的规范要求培养其严谨的科研态度。 二、实验项目与学时分配 序号 实验项目 学 时 实验性质 备注 验 证 综 合 设 计 必 做 选 做 1 DNA 重组 8 √ √ 2 大肠杆菌 DH5α 的转化 8 √ √ 3 重组 DNA 的 PCR 筛选及提取 8 √ √ 4 EGFP 在 BL21 菌株中的诱导 表达及检测 8 √ √ 合计 32 1 1 2 4 三、课程的基本内容 实验一： DNA 重组 1．实验目的： （1） 学习使用限制性内切酶及 DNA 连接酶进行 DNA 酶切、重组的原理和方法； （2）学习琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 的方法和技术。 2．实验内容： （1）用限制性内切酶将实验所需片段切，进行重组连接； （2）利用琼脂糖凝胶电泳检测目的基因片段酶切和重组是否成功； （3）根据 DNA 回收试剂盒说明进行回收实验。 实验二：大肠杆菌 DH5α的转化 1．实验目的： 了解和掌握质粒 DNA 转化大肠杆菌细胞的原理和方法； 2．实验内容：
（1）配置培养基（2）涂平板的正确操作方法（2）加氨和不加氨苄的培养基对于菌落生长情况实验三：重组DNA的PCR筛选及提取1.实验目的：掌握一种最常用的质粒DNA提取方法：碱裂解法。同时掌握菌液PCR法鉴定重组质粒DNA的基本原理和操作。2.实验内容：（1）不同试剂的配置（2）PCR的原理及使用过程方法（3碱裂解法提取质粒DNA实验四：EGFP在BL21菌株中的诱导表达及检测1.实验目的：掌握用IPTG诱导EGFP基因表达的基本原理及基本操作步骤。2.实验内容：（1）IPTG认识(2)紫外检测蛋白表达四、课程的考核考核方式：考核。实验成绩评分方法：出勤率占10%，课堂表现占10%，实验报告占50%，期末考试占30%。考试可以采用试卷的方式，考查实验技术的原理、操作方法、注意事项：也可以采用现场考查学生对仪器的操作并简述其原理及其五、课程参考书、指导书1.J.萨姆布鲁克，D.W.拉塞尔.《分子克隆实验指南》（第三版）科学出版社.20082.龚朝辉，郭俊明：《生物化学与分子生物学实验指导》：双语版.浙江大学出版社.20123.林德馨：《生物化学与分子生物学实验》第二版.科学出版社：2014
（1）配置培养基 （2）涂平板的正确操作方法 （2）加氨苄和不加氨苄的培养基对于菌落生长情况 实验三：重组 DNA 的 PCR 筛选及提取 1．实验目的： 掌握一种最常用的质粒 DNA 提取方法：碱裂解法。同时掌握菌液 PCR 法鉴定 重组质粒 DNA 的基本原理和操作。 2．实验内容： （1）不同试剂的配置 （2）PCR 的原理及使用过程方法 （3 碱裂解法提取质粒 DNA 实验四：EGFP 在 BL21 菌株中的诱导表达及检测 1．实验目的： 掌握用 IPTG 诱导 EGFP 基因表达的基本原理及基本操作步骤。 2．实验内容： （1） IPTG 认识 （2)紫外检测蛋白表达 四、课程的考核 考核方式：考核。 实验成绩评分方法：出勤率占 10%，课堂表现占 10%，实验报告占 50%，期末考试占 30%。 考试可以采用试卷的方式，考查实验技术的原理、操作方法、注意事项；也可以采用现场考查 学生对仪器的操作并简述其原理及其 五、课程参考书、指导书 1．J.萨姆布鲁克，D.W.拉塞尔.《分子克隆实验指南》（第三版）.科学出版社. 2008 2. 龚朝辉，郭俊明.《生物化学与分子生物学实验指导》.双语版.浙江大学出版社.2012. 3．林德馨．《生物化学与分子生物学实验》．第二版.科学出版社．2014．