磺基水杨酸比色法测定微量铁的 条件筛选与含量测定 复且大学版权所有
磺基水杨酸比色法测定微量铁的 条件筛选与含量测定 复旦大学版权所有 1
Experimental purposes and requirements 1. 了解紫外-可见分光光度法和比色法测定物质含 量的原理和方法。 2.学习紫外-可见分光光度计的使用。 复旦大学版权所有
Experimental purposes and requirements 1. 了解紫外-可见分光光度法和比色法测定物质含 量的原理和方法。 2. 学习紫外-可见分光光度计的使用。 2 复旦大学版权所有
Experimental Principle 分光光度法基本原理 分光光度法(spectrophotometry)是基于物质分子对光的选择性吸收而建 立起来的分析方法。按物质吸收光的波长不同，分光光度法可分为紫外分 光光度法、可见分光光度法、红外分光光度法。 Lambert-Beer定律：当用适当波长的单色光照射一固定浓度的溶液时，液 层厚度()一定，溶液均匀时，吸光度与浓度成正比。 A=-Ig(I/Io)=Ig(Io /I )=cl. 分光光度法的灵敏度较高，适用于微量组分的测定。其灵敏度一般能达到 1~10μgL的数量级。但该方法的相对误差较大，一般可达到2~5%。 复旦大学版权所有
Experimental Principle 3 分光光度法（spectrophotometry）是基于物质分子对光的选择性吸收而建 立起来的分析方法。按物质吸收光的波长不同，分光光度法可分为紫外分 光光度法、可见分光光度法、红外分光光度法。 Lambert-Beer定律：当用适当波长的单色光照射一固定浓度的溶液时，液 层厚度（l）一定，溶液均匀时，吸光度与浓度成正比。 A= -lg(It／I0 )= lg(I0／It )=εcl。 分光光度法的灵敏度较高，适用于微量组分的测定。其灵敏度一般能达到 1～10μg/L的数量级。但该方法的相对误差较大，一般可达到2 ～5%。 分光光度法基本原理 复旦大学版权所有
Experimental principle 本实验测量的Fe3+溶液的浓度很稀(50μg/mL)，基本可以 认为是无色的，直接使用紫外-可见分光光度法测量得不到有强 度的信号。因此，需要加入显色剂进行比色法测定。 比色法：以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较 或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。 复旦大学版权所有
Experimental Principle 4 本实验测量的Fe3+溶液的浓度很稀（50μg/mL），基本可以 认为是无色的，直接使用紫外-可见分光光度法测量得不到有强 度的信号。因此，需要加入显色剂进行比色法测定。 比色法：以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较 或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。 复旦大学版权所有
Experimental Principle 磺基水杨酸(CH,OS2H,0)与Fe3+可以形成稳定的配合 物，其组成随溶液pH值的不同而改变。在不同的pH下，磺基水 杨酸与F3+能分别形成三种不同颜色的配离子： pH=23,生成n=1,磺基水杨酸合铁（Ⅲ）紫红色配合物； pH=49,生成n=2,二磺基水杨酸合铁（Ⅲ）红色配合物； pH=9~11,生成=3，三磺基水杨酸合铁（Ⅲ)黄色配合物。 本实验使用紫外-可见分光光度法测定H>9时所形成的黄色 三磺基水杨酸合铁（Ⅲ）的浓度来定量测定。 复旦大学版权所有
Experimental Principle 磺基水杨酸（ C7H6O6S·2H2O）与Fe3+可以形成稳定的配合 物，其组成随溶液pH值的不同而改变。在不同的pH下，磺基水 杨酸与Fe3+能分别形成三种不同颜色的配离子： pH=2～3，生成n=1，磺基水杨酸合铁（Ⅲ）紫红色配合物； pH=4 ～9，生成n=2 ，二磺基水杨酸合铁（Ⅲ）红色配合物； pH= 9 ～11，生成n=3，三磺基水杨酸合铁（Ⅲ） 黄色配合物。 本实验使用紫外-可见分光光度法测定pH>9时所形成的黄色 三磺基水杨酸合铁（Ⅲ）的浓度来定量测定。 5 复旦大学版权所有
Procedures and methods 1930 显色剂用量 组别 显色剂用量 组 A 10%磺酸水杨酸 4-5 B 5%磺酸水杨酸 2 2%磺酸水杨酸 2 复旦大学版权所有
Procedures and methods 6 显色剂用量 组别 显色剂用量 组 A 10%磺酸水杨酸 4-5 B 5%磺酸水杨酸 2 C 2%磺酸水杨酸 2 复旦大学版权所有
Procedures and methods (1)吸收曲线的制作和测量波长的选择 Fe3+标准溶液 10%NH4CI溶液 根据组别选择 (50μg/mL) 25.00ml量瓶 磺酸水杨酸 加入3.00mL 加入2mL 2.00ml 氨试液 在380nm-480nm波 滴加氨试液，振 加蒸馏水至刻 长下，每隔10nm测 摇至溶液呈黄色 加入2mL 度，摇匀 一次吸光度 绘制曲线，选出合适波长 在最大吸收峰附近， 每隔2nm测定吸光 度 空白溶液 复旦大学版权所有
Procedures and methods 25.00ml量瓶 Fe3+标准溶液 （50μg/mL） 加入3.00mL 根据组别选择 磺酸水杨酸 2.00ml 10%NH4Cl溶液 加入2mL 7 氨试液 （1） 吸收曲线的制作和测量波长的选择 在380nm-480nm波 长下，每隔10nm测 一次吸光度 滴加氨试液，振 摇至溶液呈黄色 加入2mL 加蒸馏水至刻 度，摇匀 在最大吸收峰附近， 每隔2nm测定吸光 度 绘制曲线，选出合适波长 空白溶液 复旦大学版权所有
Procedures and methods (2)》 显色时间 Fe3+标准溶液 (50μg/mL) 10%NH4CI溶液 25ml容量瓶 根据组别选择 加入2mL 磺酸水杨酸 加入3.00mL 分别加入 滴加氨试液，振摇 氨试液 加蒸馏水至刻 2.0ml 至溶液呈黄色 加入2mL 度，摇匀 ??nm 测量10min、20min、 记录表格 30min、45min的吸光度 绘制曲线 复旦大学版权所有
Procedures and methods 25ml容量瓶 Fe3+标准溶液 （50μg/mL） 加入3.00mL 分别加入 2.0ml 10%NH4Cl溶液 加入2mL 8 氨试液 （2） 显色时间 加蒸馏水至刻 度，摇匀 根据组别选择 磺酸水杨酸 滴加氨试液，振摇 至溶液呈黄色 加入2mL 测量10 min、20min、 30 min、45min的吸光度 记录表格， 绘制曲线 复旦大学版权所有 ??nm
Procedures and methods (3)显色剂用量的选择 Fe3+标准溶液 (50μg/mL) 10%NH4CI溶液 根据组别选择 25ml容量瓶 磺酸水杨酸 加入3.00mL 加入2mL 每组5份 滴加氨试液，振摇 氨试液 加蒸馏水至刻 分别精密加入1.00， 至溶液呈黄色 加入2mL 度，摇匀 2.00,3.00,4.00, 5.00ml 测量吸光度 记录表格， 绘制曲线，空白溶液 复旦大学版权所有
Procedures and methods 25ml容量瓶 Fe3+标准溶液 （50μg/mL） 加入3.00mL 每组5份 分别精密加入1.00， 2.00，3.00，4.00， 5.00ml 10%NH4Cl溶液 加入2mL 9 氨试液 （3） 显色剂用量的选择 加蒸馏水至刻 度，摇匀 根据组别选择 磺酸水杨酸 滴加氨试液，振摇 至溶液呈黄色 加入2mL 测量吸光度 记录表格， 绘制曲线，空白溶液 复旦大学版权所有
Procedures and methods UV2000紫外可见分光光度计的使用（见视频) 1、仪器预热20分钟以上，调节旋钮选择测定波长。 2、用键设置测定方式：选择吸光度(A),红灯亮。 3、用手接触比色皿（杯）磨砂面，将样品溶液和参比溶液分别倒入比色皿 (杯)中，用溶液分别淋洗2-3次，溶液倒入约三分之二位置，用软纸擦干 比色皿（杯）四周，切忌将溶液带入仪器内部。 4、打开样品室盖，将盛有样品溶液和参比溶液的比色皿（杯）分别插入比 色槽（通常将参比液放入第一个槽位)，盖上样品室盖，比色皿（杯）光 面应处于光路中。 5、将参比溶液推（拉)至光路中，按“100%.ic”键，使显示器显示的 “BLA”直至显示“0.000”A为止，将样品溶液拉（推）至光路中，读取数据， 依次测定。 6、测定完毕后，关闭仪器开关，拔下电源。倾出溶液至废液杯中，比色皿 (杯)用合适溶剂清洗，再用无水乙醇淋洗，擦干放好。 复旦大学版权所有
Procedures and methods 10 UV2000紫外-可见分光光度计的使用（见视频） 复旦大学版权所有 1、仪器预热20分钟以上，调节旋钮选择测定波长。 2、用键设置测定方式: 选择吸光度（A），红灯亮。 3、用手接触比色皿（杯）磨砂面，将样品溶液和参比溶液分别倒入比色皿 （杯）中，用溶液分别淋洗2-3次，溶液倒入约三分之二位置，用软纸擦干 比色皿（杯）四周，切忌将溶液带入仪器内部。 4、打开样品室盖，将盛有样品溶液和参比溶液的比色皿（杯）分别插入比 色槽（通常将参比液放入第一个槽位），盖上样品室盖，比色皿（杯） 光 面应处于光路中。 5、将参比溶液推（拉）至光路中，按“100%.inc”键，使显示器显示的 “BLA”直至显示“0.000”A为止，将样品溶液拉（推）至光路中，读取数据， 依次测定。 6、测定完毕后，关闭仪器开关，拔下电源。倾出溶液至废液杯中，比色皿 （杯）用合适溶剂清洗，再用无水乙醇淋洗，擦干放好