第2节 微生物的培养技术及应用 课后训练提升 基础巩固 1培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶适宜使用的灭菌 或消毒方法依次是( ①化学药物消毒法②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒法⑤高压蒸汽 灭菌⑥巴氏消毒法 A.⑤③②①④⑥ B.①②③④⑤⑥ C.⑥②③④①⑤ D.③④②①⑥⑤ 答案：A 解析：培养基宜用高压蒸汽灭菌法灭菌：培养皿能耐高温，需用千热灭菌法灭菌：接 种环可用灼烧灭菌法灭菌，以达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化 学药物进行消毒，如用酒精擦拭双手；对于空气，可用紫外线消毒法；为了不破坏牛 奶的营养成分，可采用巴氏消毒法对其进行消毒。 2.金黄色葡萄球菌有很强的致病能力，常引起骨髓炎等疾病，还可能引起食物中 毒。下列关于实验结束后的操作，错误的是( ） A.对接种环进行灼烧处理 B.带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉 C.带菌培养基必须经加热后才能倒掉 D接种后的双手必须用肥皂洗净，再用体积分数为75%的酒精棉球擦拭 答案：C 3不同的微生物对营养物质的需求各不相同，但一般都需要水、碳源、氮源和无 机盐。下列有关微生物所需营养物质的描述，正确的是( ) A.含氮物质只能为该微生物提供必要的氮元素 B.有些碳源也可以为微生物的生长提供能源 C.无机盐是微生物生长不可缺少的营养物质，所以无机盐越多越好 D.固体培养基中不含水分 答案B 解析：含氨的有机物既可给微生物提供氨元素，也可给微生物提供能源。含碳的有 机物既可给微生物提供碳源，也可给微生物提供能源。微生物生长需要无机盐，但 不是越多越好，无机盐过多会导致培养基渗透压过高，使微生物因失水过多而不能 生存。固体培养基中也含有水分，因其含有凝固剂琼脂，所以呈固态。 4.下列有关倒平板的操作，错误的是( )
第 2 节 微生物的培养技术及应用 课后· 基础巩固 1.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶适宜使用的灭菌 或消毒方法依次是( ) ①化学药物消毒法 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线消毒法 ⑤高压蒸汽 灭菌 ⑥巴氏消毒法 A.⑤③②①④⑥ B.①②③④⑤⑥ C.⑥②③④①⑤ D.③④②①⑥⑤ 答案:A 解析:培养基宜用高压蒸汽灭菌法灭菌;培养皿能耐高温,需用干热灭菌法灭菌;接 种环可用灼烧灭菌法灭菌,以达到迅速彻底的灭菌效果;实验操作者的双手可用化 学药物进行消毒,如用酒精擦拭双手;对于空气,可用紫外线消毒法;为了不破坏牛 奶的营养成分,可采用巴氏消毒法对其进行消毒。 2.金黄色葡萄球菌有很强的致病能力,常引起骨髓炎等疾病,还可能引起食物中 毒。下列关于实验结束后的操作,错误的是( ) A.对接种环进行灼烧处理 B.带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉 C.带菌培养基必须经加热后才能倒掉 D.接种后的双手必须用肥皂洗净,再用体积分数为 75%的酒精棉球擦拭 答案:C 3.不同的微生物对营养物质的需求各不相同,但一般都需要水、碳源、氮源和无 机盐。下列有关微生物所需营养物质的描述,正确的是( ) A.含氮物质只能为该微生物提供必要的氮元素 B.有些碳源也可以为微生物的生长提供能源 C.无机盐是微生物生长不可缺少的营养物质,所以无机盐越多越好 D.固体培养基中不含水分 答案:B 解析:含氮的有机物既可给微生物提供氮元素,也可给微生物提供能源。含碳的有 机物既可给微生物提供碳源,也可给微生物提供能源。微生物生长需要无机盐,但 不是越多越好,无机盐过多会导致培养基渗透压过高,使微生物因失水过多而不能 生存。固体培养基中也含有水分,因其含有凝固剂琼脂,所以呈固态。 4.下列有关倒平板的操作,错误的是( )
A.在酒精灯火焰旁进行操作 B.使打开的锥形瓶瓶口迅速通过酒精灯火焰 C将培养皿打开，皿盖倒放在桌面上 D.平板冷却凝固后需要倒过来放置 答案：C 解析：在进行倒平板操作时，用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙， 不能将皿盖完全打开。 5.下列有关平板划线操作的叙述，错误的是() A.第一次灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 B.每次划线前灼烧接种环，是为了杀死上次划线结束后接种环上的菌种 C.在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 D.划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境或感染 操作者 答案：C 解析：在第二区域内划线时，接种环上的菌种来源于第一次划线的末端。 6.用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推 测出样品中的活菌数。原因是() A.平板上的一个菌落就是一个细菌 B.菌落中的细菌数是固定的 C.此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌 D.此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数目相同 答案C 解析：菌落和细菌不是一个概念，A项错误。菌落中的细菌数并不固定，其数目与 培养时间和培养条件有关，B项错误。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长 的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，C项正确。当两个或多个细胞连 在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以此方法统计的菌落数可能比活菌的 实际数目少，D项错误。 7.下图所示的四种菌落分布图中，可用平板划线法分离得到的是( 答案D 8.某同学在稀释倍数为1×106的培养基中测得平板上的菌数的平均值为275，那么 每克样品中的菌数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1L)( ) A.2.75×108个B.2.75×109个
A.在酒精灯火焰旁进行操作 B.使打开的锥形瓶瓶口迅速通过酒精灯火焰 C.将培养皿打开,皿盖倒放在桌面上 D.平板冷却凝固后需要倒过来放置 答案:C 解析:在进行倒平板操作时,用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙, 不能将皿盖完全打开。 5.下列有关平板划线操作的叙述,错误的是( ) A.第一次灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 B.每次划线前灼烧接种环,是为了杀死上次划线结束后接种环上的菌种 C.在第二区域内划线时,接种环上的菌种直接来源于菌液 D.划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上的菌种,避免细菌污染环境或感染 操作者 答案:C 解析:在第二区域内划线时,接种环上的菌种来源于第一次划线的末端。 6.用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时,通过统计平板上的菌落数就能推 测出样品中的活菌数。原因是( ) A.平板上的一个菌落就是一个细菌 B.菌落中的细菌数是固定的 C.此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌 D.此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数目相同 答案:C 解析:菌落和细菌不是一个概念,A 项错误。菌落中的细菌数并不固定,其数目与 培养时间和培养条件有关,B 项错误。当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长 的一个单菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌,C 项正确。当两个或多个细胞连 在一起时,平板上观察到的只是一个菌落,所以此方法统计的菌落数可能比活菌的 实际数目少,D 项错误。 7.下图所示的四种菌落分布图中,可用平板划线法分离得到的是( ) 答案:D 8.某同学在稀释倍数为 1×106 的培养基中测得平板上的菌数的平均值为 275,那么 每克样品中的菌数是(涂布平板时所用稀释液的体积为 0.1 mL)( ) A.2.75×108 个 B.2.75×109 个
C.275个 D.27.5个 答案B 解析：根据计算公式“每克样品中的菌数=(C÷门×°，则题中每克样品中的菌数 =(275÷0.1)×1×106=2.75×10(个)。 9.某化工厂的污水池中含有一种有害且难以降解的有机化合物A。研究人员用 化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选出能高效降解化 合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如下图所示，请回答下列问题。 振荡培养若干天 污水池中 后，测定各瓶中 污泥样品 化合物A的含量 接种 固体 初选 选择 培养基 \接种 重复多次，直至获得目的菌 (1)培养基中加入化合物A的目的是 这种培养基属于」 培 养基。 (2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的 实验需要 振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是 (3)在上述实验操作过程中，获得纯净“目的菌的关键是 (4)转为固体培养基时，常采用平板划线法进行接种，此过程中所用的接种工具 是 操作时采用的灭菌方法是 (⑤)实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉，这样做的目的 是 (6)某同学计划统计污水池中“目的菌”的总数，他选用1×104、1×105、1×106倍稀 释液进行平板划线，每种稀释液都设置了3个培养皿。从实验设计的角度看，还应 设置的一组对照实验是 此对照实验的目的 是 答案(1)筛选目的菌选择 (2)化合物A异养需氧型 (3)防止外来杂菌污染 (4)接种环灼烧灭菌 (⑤)防止造成环境污染 (6)不接种的空白培养基检验培养基灭菌是否合格 拓展提高 1.下列关于培养基的叙述，正确的是() A.为微生物的生长繁殖提供营养基质的是培养基 B.培养基只有液体培养基和选择培养基两类
C.275 个 D.27.5 个 答案:B 解析:根据计算公式“每克样品中的菌数=(C÷V)×M”,则题中每克样品中的菌数 =(275÷0.1)×1×106=2.75×109 (个)。 9.某化工厂的污水池中含有一种有害且难以降解的有机化合物 A。研究人员用 化合物 A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基,成功筛选出能高效降解化 合物 A 的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示,请回答下列问题。 (1)培养基中加入化合物 A 的目的是 ,这种培养基属于 培 养基。 (2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的 。实验需要 振荡培养,由此推测“目的菌”的代谢类型是 。 (3)在上述实验操作过程中,获得纯净“目的菌”的关键是 。 (4)转为固体培养基时,常采用平板划线法进行接种,此过程中所用的接种工具 是 ,操作时采用的灭菌方法是 。 (5)实验结束后,使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉,这样做的目的 是 。 (6)某同学计划统计污水池中“目的菌”的总数,他选用 1×104、1×105、1×106 倍稀 释液进行平板划线,每种稀释液都设置了 3 个培养皿。从实验设计的角度看,还应 设置的一组对照实验是 ,此对照实验的目的 是 。 答案:(1)筛选目的菌 选择 (2)化合物 A 异养需氧型 (3)防止外来杂菌污染 (4)接种环 灼烧灭菌 (5)防止造成环境污染 (6)不接种的空白培养基 检验培养基灭菌是否合格 拓展提高 1.下列关于培养基的叙述,正确的是( ) A.为微生物的生长繁殖提供营养基质的是培养基 B.培养基只有液体培养基和选择培养基两类
C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌 答案：A 解析：根据培养基的物理性质不同，可将培养基分为固体培养基和液体培养基，选 择培养基是按功能分类的，B项错误。液体培养基中无凝固剂，C项错误。单个细 菌用肉眼看不见，肉眼可见的是培养基上形成的菌落，D项错误。 2.下图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤。下列有关叙述正确的是() 3 ④ A.步骤①操作时，倒好平板后应立即将其倒置，防止水蒸气落在培养基上造成污染 B.步骤②接种环和试管口应先在火焰上灼烧，接种环冷却后再放入试管中蘸取菌 液 C.步骤③沿多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后可根据出现的单个菌落计数 D.步骤④将培养皿放在恒温培养箱中培养，一段时间后所得到的都是X细菌的菌 落 答案B 解析：倒完平板后应立即盖上皿盖，冷却凝固后将平板倒过来放置，A项错误。步 骤②接种环在火焰上灼烧后，待冷却后才可以蘸取菌液以平板划线，B项正确。步 骤③沿多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落，但不能用于计 数，C项错误。步骤④将培养皿放在恒温培养箱培养后，可用来对X细菌进行分 离以得到纯种，D项错误。 3.平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法。下列关于这两 种方法的描述，正确的是() A都要将菌液进行一系列的梯度稀释 B.平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的 操作 C稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养的操作 D.都会在培养基表面形成单菌落 答案D 解析：平板划线法不需要进行梯度稀释，平板划线法是将菌液通过接种环在固体培 养基表面连续划线的操作进行稀释，A、B两项错误。稀释涂布平板法需要将不 同稀释度的菌液涂布到固体培养基的表面，C项错误。 4.下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，正确的是( ) A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素
C.固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D.微生物在固体培养基上生长时,可以形成肉眼可见的单个细菌 答案:A 解析:根据培养基的物理性质不同,可将培养基分为固体培养基和液体培养基,选 择培养基是按功能分类的,B 项错误。液体培养基中无凝固剂,C 项错误。单个细 菌用肉眼看不见,肉眼可见的是培养基上形成的菌落,D 项错误。 2.下图表示培养和纯化 X 细菌的部分操作步骤。下列有关叙述正确的是( ) A.步骤①操作时,倒好平板后应立即将其倒置,防止水蒸气落在培养基上造成污染 B.步骤②接种环和试管口应先在火焰上灼烧,接种环冷却后再放入试管中蘸取菌 液 C.步骤③沿多个方向划线,使接种物逐渐稀释,培养后可根据出现的单个菌落计数 D.步骤④将培养皿放在恒温培养箱中培养,一段时间后所得到的都是 X 细菌的菌 落 答案:B 解析:倒完平板后应立即盖上皿盖,冷却凝固后将平板倒过来放置,A 项错误。步 骤②接种环在火焰上灼烧后,待冷却后才可以蘸取菌液以平板划线,B 项正确。步 骤③沿多个方向划线,使接种物逐渐稀释,培养后出现单个菌落,但不能用于计 数,C 项错误。步骤④将培养皿放在恒温培养箱培养后,可用来对 X 细菌进行分 离以得到纯种,D 项错误。 3.平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法。下列关于这两 种方法的描述,正确的是( ) A.都要将菌液进行一系列的梯度稀释 B.平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的 操作 C.稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养的操作 D.都会在培养基表面形成单菌落 答案:D 解析:平板划线法不需要进行梯度稀释,平板划线法是将菌液通过接种环在固体培 养基表面连续划线的操作进行稀释,A、B 两项错误。稀释涂布平板法需要将不 同稀释度的菌液涂布到固体培养基的表面,C 项错误。 4.下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述,正确的是( ) A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素
B.筛选分解尿素的细菌时，应以尿素作为培养基中唯一的营养物质 C.统计样品中的活菌数目一般用平板划线法 D.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则表明筛选到 了能分解尿素的细菌 答案：A 解析：筛选分解尿素的细菌时，采用的是以尿素为唯一氮源的选择培养基，B项错 误。统计样品中的活菌数目一般用稀释涂布平板法，C项错误。酚红指示剂变红， 则表明筛选到了能分解尿素的细菌，D项错误。 5.下图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程。请回答下列问题。 逐级 筛 挑取 稀释 单菊落 10g 细菌 选择培 土壤样品 鉴别培 培养基 养基 养基 菌种 (1)图中选择培养基应以 为唯一氮源：鉴别培养基还需添加酚红作指示 剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成 色。 (2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为1×105的土壤样品溶液0.1mL, 培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13个、156个、462个、178 个和191个。该过程采取的接种方法是 每克土壤样品中的细菌数 为 ×108个，与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较 (填“多或“少)。 答案1)尿素红 (2)稀释涂布平板法1.75少 解析：(2)该过程采取的接种方法为稀释涂布平板法。利用稀释涂布平板法对细菌 进行计数时，应选择菌落数为30~300的平板，因此平板上长出的细菌菌落平均数 为(156+178+191)÷3=175（个），每克土壤样品中的细菌数为 (175÷0.1)×1×105=1.75×108(个)。血细胞计数板计数法能将死菌计算在内，而稀释 涂布平板法只能计数活菌（只有活菌才能在平板上生长），故一般血细胞计数板计 数法要比稀释涂布平板法的结果大。 挑战创新 回答下列有关微生物培养与应用的问题。 组分 含量 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO47H2O 0.2g
B.筛选分解尿素的细菌时,应以尿素作为培养基中唯一的营养物质 C.统计样品中的活菌数目一般用平板划线法 D.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,若指示剂变蓝,则表明筛选到 了能分解尿素的细菌 答案:A 解析:筛选分解尿素的细菌时,采用的是以尿素为唯一氮源的选择培养基,B 项错 误。统计样品中的活菌数目一般用稀释涂布平板法,C 项错误。酚红指示剂变红, 则表明筛选到了能分解尿素的细菌,D 项错误。 5.下图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程。请回答下列问题。 (1)图中选择培养基应以 为唯一氮源;鉴别培养基还需添加酚红作指示 剂,产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后,其菌落周围的指示剂将变成 色。 (2)在 5 个细菌培养基平板上,均接种稀释倍数为 1×105 的土壤样品溶液 0.1 mL, 培养一段时间后,平板上长出的细菌菌落数分别为 13 个、156 个、462 个、178 个和 191 个。该过程采取的接种方法是 ,每克土壤样品中的细菌数 为 ×108 个;与血细胞计数板计数法相比,此计数方法测得的细菌数较 (填“多”或“少”)。 答案:(1)尿素 红 (2)稀释涂布平板法 1.75 少 解析:(2)该过程采取的接种方法为稀释涂布平板法。利用稀释涂布平板法对细菌 进行计数时,应选择菌落数为 30~300 的平板,因此平板上长出的细菌菌落平均数 为(156+178+191)÷3=175(个),每克土壤样品中的细菌数为 (175÷0.1)×1×105=1.75×108 (个)。血细胞计数板计数法能将死菌计算在内,而稀释 涂布平板法只能计数活菌(只有活菌才能在平板上生长),故一般血细胞计数板计 数法要比稀释涂布平板法的结果大。 挑战创新 回答下列有关微生物培养与应用的问题。 组分 含量 KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g
FeCl3 0.1g 1.0g 维生素 微量 琼脂 15.0g 水 定容至1000mL (1)上表是筛选异养细菌的培养基配方。从物理性质上看，该培养基属于 培养基，其中成分X除了为目的菌提供能源外，还能提供 。 制备该 培养基的一般操作顺序是配制培养基→ 对培养基进行灭菌 的常用方法是 (2)下图A、B是微生物培养的两种接种方法，图C、D是培养后的效果。某同学 接种培养后获得图C所示效果，则其采用的接种方法是[1 ]中 填“A”或B”):由图C所示效果推测接种时可能的失误操作是 图A 图B 图C 图D (3)微生物强化采油是利用某些微生物能降解石油、增大石油的乳化度、降低石 油黏度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术。为筛选 和纯化该类微生物，应向培养基中添加 作为唯一碳源：培养一段时间 后在培养基上形成降油圈，此时选取降油圈 (填“大”或“小的菌落就可 获得高效菌株。 答案1)固体碳源和氮源灭菌倒平板高压蒸汽灭菌法 (2)B稀释涂布平板法涂布不均匀 (3)石油大
FeCl3 0.1 g X 1.0 g 维生素 微量 琼脂 15.0 g 水 定容至 1 000 mL (1)上表是筛选异养细菌的培养基配方。从物理性质上看,该培养基属于 培养基,其中成分 X 除了为目的菌提供能源外,还能提供 。制备该 培养基的一般操作顺序是配制培养基→ → ,对培养基进行灭菌 的常用方法是 。 (2)下图 A、B 是微生物培养的两种接种方法,图 C、D 是培养后的效果。某同学 接种培养后获得图 C 所示效果,则其采用的接种方法是[ ] ([ ]中 填“A”或“B”);由图 C 所示效果推测接种时可能的失误操作是 。 (3)微生物强化采油是利用某些微生物能降解石油、增大石油的乳化度、降低石 油黏度的原理,通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术。为筛选 和纯化该类微生物,应向培养基中添加 作为唯一碳源;培养一段时间 后在培养基上形成降油圈,此时选取降油圈 (填“大”或“小”)的菌落就可 获得高效菌株。 答案:(1)固体 碳源和氮源 灭菌 倒平板 高压蒸汽灭菌法 (2)B 稀释涂布平板法 涂布不均匀 (3)石油 大