实验十四主要病原菌的认识（二） 目的要求 认识葡萄球菌、链球菌、岛疽杆菌、肉毒梭菌、魏氏梭南的形态染色特性和培养特性」 操作步骤 、葡萄球菌 可挑取葡萄球菌的培养物或病料涂片，自然干燥后，火焰固定，用革兰氏染色后，镜检 观察。 (一)形态染色特性革兰氏阳性呈葡萄串状排列，在病料涂片中，常呈单个，成对或 短链状，在固体培养基上生长的常呈典型的葡萄串状排列。不形成芽胞，无鞭毛，不运动。 某些萄萄球菌形成莱膜或粘液层。 二)培养特性 普通琼脂上菌落呈圆形、湿润、不透明，边缘整齐表面隆起的光滑菌 落。由于菌株不同可呈现黄色、白色或柠檬色。血液琼脂平板上多数致病性菌株形成明显的 溶血l。 二、链球菌 桃取链球黄培养物或取病料（脓汁、乳汁、参出液等）涂片，用革兰氏染色或碱性美蓝 染色，镜检后观察 )形态染色特性革兰氏阳性链球菌，多数链球菌在血清肉汤中常呈长链状排列 幼龄培养物易发现荚膜，以后消失，而在固体培养基上或病料涂片上，常为短链状排列，有 些链球菌在脓汁中常呈长链状排列。 (二)培养特性营养要求高，在普通琼脂培养基上生长不良，在血琼脂上形成透明、 闪光、微隆起有粘性的露滴样的小菌落，有溶血现象，分为三型：甲型(·)溶血又称绿色 溶直型，有些不产生典型的 血现象，培养24小时后，在血平板深处形成绿灰色菌落 周围有不透明绿色轮晕。乙型(B)溶血，在血平板上菌落周围形成无色透明的溶血环，其 直径有时超过菌落的直径。丙型(Y)溶血，又称非溶血型，在血平板上的菌落周围不产生 溶血现象。 三、鼻疽杆萧 病料可取患马的鼻汁、皮肤溃疡分泌物、脓肿的穿刺物及病死马内脏（肺脏、肺的淋巴 结、肝、脾等)作涂片，自然干燥后用革兰氏染色或碱性美蓝染色，待干后，镜检观察 (一)形态染色特性革兰氏阴性短杆菌，菌端纯圆，形状平直或微弯。在病料中多单 在，有时成双或成丛排列。老龄菌呈显著的多形性，如球杆状、分枝状和长丝状等。其陈旧 培养物用美蓝染色时，可见到若色不均匀的题粒。 (二)培养特性在甘油琼脂上，24小时后形成细小、正圆形、灰白色带有黄色光泽， 表面湿润，半透明， 稍粘稠的 小菌落。培养时间延长，菌落增大至2 3mm, 呈灰黄色 马铃薯培养基上，可生成黄棕色粘稠的蜂蜜样菌落。在孔雀绿酸性复红琼脂上，菌落呈淡绿 色。不溶血，有特臭。 四、號氏梭菌（产气英膜梭菌） 用疱肉培养基的培养物注射小白鼠，死后取肝脏抹片或取培养物涂片，用瑞特氏或革兰 氏染色，干后、镜检、观察 一)形态染色特性革兰氏阳性粗大杆菌，两端纯圆，单在、成双排列，或短链排列。 有芽胞，位于菌体中央或近端。在机体内形成荚膜，无鞭毛，不能运动。 (二)培养特性厌氧菌，但不严格，营养要求不高，在普通琼脂上呈灰白色不透明， 表面光滑，边缘整齐的菌落（直径2~5mm),葡萄糖血清球脂上形成中央隆起或圆盘样大
实验十四 主要病原菌的认识（二） 目的要求 认识葡萄球菌、链球菌、鼻疽杆菌、肉毒梭菌、魏氏梭菌的形态染色特性和培养特性。 操作步骤 一、葡萄球菌 可挑取葡萄球菌的培养物或病料涂片，自然干燥后，火焰固定，用革兰氏染色后，镜检 观察。 （一）形态染色特性 革兰氏阳性呈葡萄串状排列，在病料涂片中，常呈单个，成对或 短链状，在固体培养基上生长的常呈典型的葡萄串状排列。不形成芽胞，无鞭毛，不运动。 某些葡萄球菌形成荚膜或粘液层。 （二）培养特性 普通琼脂上菌落呈圆形、湿润、不透明，边缘整齐表面隆起的光滑菌 落。由于菌株不同可呈现黄色、白色或柠檬色。血液琼脂平板上多数致病性菌株形成明显的 溶血。 二、链球菌 挑取链球菌培养物或取病料（脓汁、乳汁、渗出液等）涂片，用革兰氏染色或碱性美蓝 染色，镜检后观察。 （一）形态染色特性 革兰氏阳性链球菌，多数链球菌在血清肉汤中常呈长链状排列， 幼龄培养物易发现荚膜，以后消失，而在固体培养基上或病料涂片上，常为短链状排列，有 些链球菌在脓汁中常呈长链状排列。 （二）培养特性 营养要求高，在普通琼脂培养基上生长不良，在血琼脂上形成透明、 闪光、微隆起有粘性的露滴样的小菌落，有溶血现象，分为三型；甲型（α）溶血又称绿色 溶血型，有些不产生典型的溶血现象，培养 24 小时后，在血平板深处形成绿灰色菌落，其 周围有不透明绿色轮晕。乙型（β）溶血，在血平板上菌落周围形成无色透明的溶血环，其 直径有时超过菌落的直径。丙型（γ）溶血，又称非溶血型，在血平板上的菌落周围不产生 溶血现象。 三、鼻疽杆菌 病料可取患马的鼻汁、皮肤溃疡分泌物、脓肿的穿刺物及病死马内脏（肺脏、肺的淋巴 结、肝、脾等）作涂片，自然干燥后用革兰氏染色或碱性美蓝染色，待干后，镜检观察。 （一）形态染色特性 革兰氏阴性短杆菌，菌端钝圆，形状平直或微弯。在病料中多单 在，有时成双或成丛排列。老龄菌呈显著的多形性，如球杆状、分枝状和长丝状等。其陈旧 培养物用美蓝染色时，可见到着色不均匀的颗粒。 （二）培养特性 在甘油琼脂上，24 小时后形成细小、正圆形、灰白色带有黄色光泽， 表面湿润，半透明，稍粘稠的小菌落。培养时间延长，菌落增大至 2～3mm，呈灰黄色。在 马铃薯培养基上，可生成黄棕色粘稠的蜂蜜样菌落。在孔雀绿酸性复红琼脂上，菌落呈淡绿 色。不溶血，有特臭。 四、魏氏梭菌（产气荚膜梭菌） 用疱肉培养基的培养物注射小白鼠，死后取肝脏抹片或取培养物涂片，用瑞特氏或革兰 氏染色，干后、镜检、观察。 （一）形态染色特性 革兰氏阳性粗大杆菌，两端钝圆，单在、成双排列，或短链排列。 有芽胞，位于菌体中央或近端。在机体内形成荚膜，无鞭毛，不能运动。 （二）培养特性 厌氧菌，但不严格，营养要求不高，在普通琼脂上呈灰白色不透明， 表面光滑，边缘整齐的菌落（直径 2～5mm），葡萄糖血清琼脂上形成中央隆起或圆盘样大
菌落，表面有放射状条纹，边缘锯齿状，灰白色、半透明，外观好似“勋章”。血琼脂有明 品B溶血。 五、肉毒梭菌 用疱肉培养基的培养物注射小白鼠死后，取肝触片、或培养物抹片，用瑞氏染色或草兰 氏染色，干燥镜检。 (一)形态特性革兰氏阳性较粗大杆菌。茵体两端钝圆，多数单在，偶尔有成对和短 链状排列。有周鞭毛，运动活泼，无荚膜，有芽胞，呈椭圆形。A、B型菌株芽胞的直径大 于菌体的横径，位于菌体近端，故菌呈匙形或网球拍状。其余菌型芽胞的直径一般不超过菌 体横径。 二)培养特征为严格厌氧菌，对营养要求不严格。在普通琼脂上形成灰白色、半透 明边缘不整齐的绒毛网状、并向外扩散的菌落，直径为3一5mm。血清琼脂上培养48~72 小时，形成中央隆起，边缘不整齐，灰白色较粗糙绒球菌落。卵黄琼脂平板上，在肉毒梭菌 临路2下的指基形成吸性国白全不区.因时还形天样先益在商及 其边缘的琼脂上。 肉培养 治生长的1 昆浊 A、B F型菌将肉渣消化呈烂泥状，肉渣变黑，有恶臭味，产生气体。培养两天后，混浊肉汤变清 亮，菌体下沉于管底
菌落，表面有放射状条纹，边缘锯齿状，灰白色、半透明，外观好似“勋章”。血琼脂有明 显β溶血。 五、肉毒梭菌 用疱肉培养基的培养物注射小白鼠死后，取肝触片、或培养物抹片，用瑞氏染色或革兰 氏染色，干燥镜检。 （一）形态特性 革兰氏阳性较粗大杆菌。菌体两端钝圆,多数单在，偶尔有成对和短 链状排列。有周鞭毛，运动活泼，无荚膜，有芽胞，呈椭圆形。A、B 型菌株芽胞的直径大 于菌体的横径，位于菌体近端，故菌呈匙形或网球拍状。其余菌型芽胞的直径一般不超过菌 体横径。 （二）培养特征 为严格厌氧菌，对营养要求不严格。在普通琼脂上形成灰白色、半透 明边缘不整齐的绒毛网状、并向外扩散的菌落，直径为 3～5mm。血清琼脂上培养 48～72 小时，形成中央隆起，边缘不整齐，灰白色较粗糙绒球菌落。卵黄琼脂平板上，在肉毒梭菌 菌落之下的培养基形成局限性乳白色不透明区域，同时还形成一层彩虹样光彩覆盖在菌落及 其边缘的琼脂上。疱肉培养基上，生长良好，开始生长的 1～2 天，肉汤呈均匀混浊，A、B、 F 型菌将肉渣消化呈烂泥状，肉渣变黑，有恶臭味，产生气体。培养两天后，混浊肉汤变清 亮，菌体下沉于管底