实验三培养基的制备 目的要求 1,掌握一般培养基制备的原则和要求。 2.熟悉一般培养基制备的过程。 操作步骤 培养基的制备原则和婴求 培养基是根据各类微生物生长繁殖的需要，用人工方法把多种物质混合而成的营养物 一股用来分离、培养菌类。常用的培养基有基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培 养基和厌氧培养基。在制备培养基时，应掌握如下原则和要求： (一)培养基必须含有细南生长繁殖所需要的营养物质。所用的化学药品必须纯净，称 取的份量务必准确 培养基的酸碱度应符合细菌生长要求 。按各种培养基要求准确测定调节pH值。 多数细菌生长的适宜pH值为7.2~7.6，呈弱碱性。 (三)培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果及不 损失培养基的必需营养成分。培养基经灭菌后，必须置37℃温箱中培养24小时，无菌生长 者方可应用。 (四)所用器皿须洁净，忌用铁或钢质器皿，要求没有抑制细菌生长的物质存在 五)制成的培养基应该是透明的，以便观察细菌生长性状以及其他代谢活动所产生的 变化。 二、培养基制备过程 不同的培养基其制备方法也不同，一般句括以下步魔： (一)准确称量试剂根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必 须纯净。 (二)校正pH值将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补 充水分，测定酸碱度，常用pH6.8~8.0的精密试纸或酸度计测定。用1NNOH和1NHCI 调节pH值到适宜范围内。 (三)滤将玻璃漏斗置铁架上，再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培弟 基倒入其中过滤至透明 (四)分装将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装5mL:三角 瓶中装100~150ml),塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。 (五)灭菌培养基的灭南，常用高压燕汽灭南法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸 后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。 根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因此，在同一温度 条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下，菌体吸收水分后 其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。 高压蒸汽灭菌，一般采用15磅/平方（即1.05kg/cm2)压力，此时的温度是121.3℃。 灭菌20一30分钟后，可达到完全灭菌的目的。在进行灭菌的时候，首先要把灭菌锅内的冷 空气排出，否则，冷空气存在会降低内的实际温度，影响灭菌效果。 三、基础 养基的制 (一)牛肉浸液（肉水） 1.成分新鲜牛肉500g,水1000ml。 2.制法
实验三 培养基的制备 目的要求 1．掌握一般培养基制备的原则和要求。 2．熟悉一般培养基制备的过程。 操作步骤 一、培养基的制备原则和要求 培养基是根据各类微生物生长繁殖的需要，用人工方法把多种物质混合而成的营养物。 一般用来分离、培养菌类。常用的培养基有基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培 养基和厌氧培养基。在制备培养基时，应掌握如下原则和要求： （一）培养基必须含有细菌生长繁殖所需要的营养物质。所用的化学药品必须纯净，称 取的份量务必准确。 （二）培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。按各种培养基要求准确测定调节 pH 值。 多数细菌生长的适宜 pH 值为 7.2～7.6，呈弱碱性。 （三）培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果及不 损失培养基的必需营养成分。培养基经灭菌后，必须置 37℃温箱中培养 24 小时，无菌生长 者方可应用。 （四）所用器皿须洁净，忌用铁或钢质器皿，要求没有抑制细菌生长的物质存在。 （五）制成的培养基应该是透明的，以便观察细菌生长性状以及其他代谢活动所产生的 变化。 二、培养基制备过程 不同的培养基其制备方法也不同，一般包括以下步骤： （一）准确称量试剂 根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必 须纯净。 （二）校正 pH 值 将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补 充水分，测定酸碱度，常用 pH6.8～8.0 的精密试纸或酸度计测定。用 1N NaOH 和 1N HCl 调节 pH 值到适宜范围内。 （三）过滤 将玻璃漏斗置铁架上，再用纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养 基倒入其中过滤至透明。 （四）分装 将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装 5mL；三角 瓶中装 100～150ml），塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。 （五）灭菌 培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸 后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。 根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因此，在同一温度 条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下，菌体吸收水分后， 其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。 高压蒸汽灭菌，一般采用 15 磅／平方（即 1.05kg／cm2）压力，此时的温度是 121.3℃。 灭菌 20～30 分钟后，可达到完全灭菌的目的。在进行灭菌的时候，首先要把灭菌锅内的冷 空气排出，否则，冷空气存在会降低锅内的实际温度，影响灭菌效果。 三、基础培养基的制备 （一）牛肉浸液（肉水） 1．成分 新鲜牛肉 500g ，水 1000 ml。 2．制法
(1)取新鲜牛肉，剔除肌膜、脂肪，切成小块，用绞肉机纹碎。 (2)按上述比例加水，浸泡过夜（夏天应将浸泡液放置在低温的地方，防止腐败：如 果没有冷藏条件时，可省去浸泡过夜这一步)，其间应搅拌数次。 (3)次日取上液煮沸一小时，并不断搅拌。 (4)补足蒸发的水分，用白布或绒布过滤后分装于三角瓶中，准备灭菌。 (5)置高压灭菌器内，15磅灭茵20一30分钟，置低温、暗处保存备用。 3用涂 用于制备各种培养基的基础液 (二)肉浸液肉汤（普通肉汤） 1.成分肉水1000ml,蛋白胨10g,氯化钠5g,磷酸氢二钾2g。 2.制法 (1)将以上成份加温溶于牛肉浸液中 (4)15磅20~30分钟灭菌后备用。 3.用途作一般细菌培养用。 (三)营养琼脂培养基（普通琼脂） 上成究肉水0m蛋白晓03，满酸氢二钾8，氯化销58，琼脂20观 (1)将上述成分混合后，加热溶解，补足水份。 (2)校正pH值7.4~7.6。 (3)用纱布夹棉花过滤。 (4)分装干中试管或三角瓶中 (5)高压灭菌20一30分钟后 ,将中试管摆成斜面，保存各用 3.用途 一般细菌分离培养、菌种保存或用作特殊培养基。 (四)半固体培养基基本上与营养琼脂的制备相同，仅将琼脂量减少至0.5一0.7% (1000ml中加5~7g琼脂)即可。 (五)鲜血琼脂将灭菌的营养琼脂加执溶化，冷知至4550℃时，加入58%无诺 脱纤鲜血（绵羊、黄牛、马和免等），分装于试管后立即摆成斜面、或顿注于平皿中，待凝 固后，置37℃培养1一2日。有污染者废弃：无菌者保存，置冰箱各用。 无菌脱纤维鲜血的制备：以无菌操作采取动物鲜血（绵羊、黄牛、马从颈静脉采血： 兔则从心脏采血)，放入带玻璃珠的无菌三角瓶内，摇动5一10分钟，放冰箱中备用
（1）取新鲜牛肉，剔除肌膜、脂肪，切成小块，用绞肉机绞碎。 （2）按上述比例加水，浸泡过夜（夏天应将浸泡液放置在低温的地方，防止腐败；如 果没有冷藏条件时，可省去浸泡过夜这一步），其间应搅拌数次。 （3）次日取上液煮沸一小时，并不断搅拌。 （4）补足蒸发的水分，用白布或绒布过滤后分装于三角瓶中，准备灭菌。 （5）置高压灭菌器内，15 磅灭菌 20～30 分钟，置低温、暗处保存备用。 3.用途 用于制备各种培养基的基础液。 （二）肉浸液肉汤（普通肉汤） 1．成分 肉水 1000 ml ，蛋白胨 10g，氯化钠 5g，磷酸氢二钾 2g。 2．制法 （1）将以上成份加温溶于牛肉浸液中。 （2）调 pH 值为 7.4～7.6。 （3）滤纸过滤后分装。 （4）15 磅 20～30 分钟灭菌后备用。 3．用途 作一般细菌培养用。 （三）营养琼脂培养基（普通琼脂） 1．成分 肉水 1000ml，蛋白胨 10g，磷酸氢二钾 lg ，氯化钠 5g，琼脂 20g。 2．制法 （1）将上述成分混合后，加热溶解，补足水份。 （2）校正 pH 值 7.4～7.6。 （3）用纱布夹棉花过滤。 （4）分装于中试管或三角瓶中。 （5）高压灭菌 20～30 分钟后，将中试管摆成斜面，保存备用。 3．用途 一般细菌分离培养、菌种保存或用作特殊培养基。 （四）半固体培养基 基本上与营养琼脂的制备相同，仅将琼脂量减少至 0.5～0.7％ （1000 ml 中加 5～7g 琼脂）即可。 （五）鲜血琼脂 将灭菌的营养琼脂加热溶化，冷却至 45～50℃时，加入 5～8％无菌 脱纤鲜血（绵羊、黄牛、马和兔等），分装于试管后立即摆成斜面、或倾注于平皿中，待凝 固后，置 37℃培养 1～2 日。有污染者废弃；无菌者保存，置冰箱备用。 无菌脱纤维鲜血的制备：以无菌操作采取动物鲜血（绵羊、黄牛、马从颈静脉采血； 兔则从心脏采血），放入带玻璃珠的无菌三角瓶内，摇动 5～10 分钟，放冰箱中备用