实验七动物试验法 目的要求 掌握实验动物的保定、接种、采血以及剖检的方法。 在微生物实验研究中，除了应用形态学、生物学和血清学检查外，有时动物试验也很重 要。涌常它可用于鉴别分离应原微生物、病原激生物毒力的测定及毒力的增强或减弱、制名 诊断血清、疫苗、抗毒素及补体。微生物学实验室常用的实验动物有家兔、豚鼠、小白鼠等 操作步骤 一、实验动物保定法 (一)小白鼠保定法先用右手抓住尾巴，提起后肢，令其前爪抓住饲养笼的铁丝盖， 然后用左手的拇指和食指捏住两耳及头顶部皮肤，并翻转左手，背部皮肤固定于左手中指、 图7-1小白鼠的保定及注射 无名指及拇指基部之间，以小指压住其尾根，小白鼠即仰卧保定于左手上，消毒术部后，即 可进行注射，见图实71。 (二)豚鼠保定法助手用左手拇指挟住豚鼠右前肢基部，用食指和中指挟住左前肢， 然后用右手紧捉其腹部和两后肢，使其腹部朝上，术者即可进行注射，见图实7-2。 然 图7-2豚鼠的保定及心脏采血 (三)家兔保定法较小的家兔，基本上和豚鼠的保定法一样，但大家兔须用仰卧或保 定器保定。如果进行耳静脉注射，让家兔卧在手术台上，由助手把握住前后躯即可。也可用 筒式金属保定器保定（见图实7-3)。 二、实验动物接种法 接种时，使用干热灭菌的注射器。吸取接种 材料时，吸取量应比使用量稍多些。注射器内不 可留有气泡，吸取接种物后，倒转注射器使针头 向上，在针头上插一个无菌棉花球，使注射器内 泡上升，并慢慢推出，再将此棉球投入煮 毒器内，或子以焚烧。注射器用过后，先在煮洲 图7-3家兔的保定及静脉注射 消毒器内吸水冲洗一次，再将针头用镊子取下， 注射器拔出筒心后，一并放入煮沸消毒器内，进
实验七 动物试验法 目的要求 掌握实验动物的保定、接种、采血以及剖检的方法。 在微生物实验研究中，除了应用形态学、生物学和血清学检查外，有时动物试验也很重 要。通常它可用于鉴别分离病原微生物、病原微生物毒力的测定及毒力的增强或减弱、制备 诊断血清、疫苗、抗毒素及补体。微生物学实验室常用的实验动物有家兔、豚鼠、小白鼠等。 操作步骤 一、实验动物保定法 （一）小白鼠保定法 先用右手抓住尾巴，提起后肢，令其前爪抓住饲养笼的铁丝盖， 然后用左手的拇指和食指捏住两耳及头顶部皮肤，并翻转左手，背部皮肤固定于左手中指、 无名指及拇指基部之间，以小指压住其尾根，小白鼠即仰卧保定于左手上，消毒术部后，即 可进行注射，见图实 7-1。 （二）豚鼠保定法 助手用左手拇指挟住豚鼠右前肢基部，用食指和中指挟住左前肢， 然后用右手紧握其腹部和两后肢，使其腹部朝上，术者即可进行注射，见图实 7-2。 图 7-2 豚鼠的保定及心脏采血 （三）家兔保定法 较小的家兔,基本上和豚鼠的保定法一样，但大家兔须用仰卧或保 定器保定。如果进行耳静脉注射，让家兔卧在手术台上，由助手把握住前后躯即可。也可用 筒式金属保定器保定（见图实 7-3）。 二、实验动物接种法 接种时，使用干热灭菌的注射器。吸取接种 材料时，吸取量应比使用量稍多些。注射器内不 可留有气泡，吸取接种物后，倒转注射器使针头 向上，在针头上插一个无菌棉花球，使注射器内 气泡上升，并慢慢推出，再将此棉球投入煮沸消 毒器内，或予以焚烧。注射器用过后，先在煮沸 消毒器内吸水冲洗一次，再将针头用镊子取下， 注射器拔出筒心后，一并放入煮沸消毒器内，进 图 7-1 小白鼠的保定及注射 图 7-3 家兔的保定及静脉注射
行煮沸消毒，然后将其洗净备用」 先进行去毛（剪毛或剃毛），再以碘酒或酒精进行局部消毒。接种后，针头 以防注射物外溢 (一)皮下接种注射部位，多选择腹股沟、腹壁中线或背部，局部去毛消毒后，用左 手拇指和食指将局部皮肤提起，右手将注射器针头刺入提起的皮肤下，然后左手放松，将接 种物缓缓注入，此时可见在注射处皮肤有片状的隐起，迅速拔针头，并以酒精棉球压按片刻 防止注射物外。 自鼠皮下注射时，左手保定 ,右手操作局部消毒，把持注射器，以针头稍微挑起腹股 沟皮肤插入皮下，注射时见有水泡微微鼓起即表示注入皮下。 (二)皮内接种术者以左手拇指及食指夹起皮肤，右手持注射器，用1ml注射器附 以最小号针头(5号针头)，针头插入拇指与食指之内的皮肤内，针头插入不宜过深，同时 针头划入角度要小，即与夹起的皮肤平行，注射时感到有阴力，且注射完毕后皮肤上有小厨 疱为注入皮内的表现。皮内注射要慢，否则容易使皮肤胀裂或自针孔流出注射物而散播传染 注射量一般为0. 0.2m (三)肌肉接种注射部位，以腿部肌肉为宜，若为鸟类则以胸侧肌肉为宜。由一人抓 住实验动物，局部去毛消毒后，另一人将针头刺入肌肉层内，缓缓将接种物注入。注射量视 动物大小而定，一般为0.2一1ml (四)腹腔内接种腹腔接种，宜采取仰卧保定。接种时其后躯稍抬高使其内脏顿向前 腔，接种部位 腹后侧面， 针头先插入皮下，后进入腹腔，注射时应无阻力， 注射后店 无疱隆起。 (五)静脉接种 1.家免注射部位以耳外缘静脉为宜，若作多次注射，应先从耳尖部开始，以免因注 射造成血管栓塞，致使下次注射不能再利用该血管。为便于注射经弹兔耳、酒精涂及助 手以拇指、食指紧压耳根部 ,可使家兔耳边静脉扩张隆起 注射时，术者左手执兔耳，右手 持针，以与静脉平行方向刺入静脉，同时助手放松其紧压手指，以便血液流通。注射时无阻 力且有血向前流，即表示注入静脉，缓缓注射，注射完针头拔出后，用消毒棉球紧压针孔片 刻，以免血或注射物溢出。 2.豚鼠豚鼠静脉内接种比较闲难。因为豚鼠没有裸露明显的静脉可寻，若必须作静 脉注射时，使豚鼠伏卧保定，并施以全身麻醉，选后腿下部外侧静脉，将该处剪毛消毒， 锐刀切 长约lcm的切口， 露出皮下静脉，用最小号针头，刺入静脉慢慢注入接种物。接 种完毕，皮肤应缝合一两针。 3.小白鼠注射部位为尾静脉，以体重15一20g为宜。注射前，将小白鼠尾巴以热水 (60℃左右)棉球或酒精棉球擦拭，使静脉扩张。接种时用一玻璃漏斗扣住小白鼠，将尾巴 拉出。实验者左手拉尾巴，右手持注射器，用小号针头刺入尾侧静脉，缓缓注入接种物，若 注射无阻力，出现一条白线，表示注入到静脉内 (六)脑内接科 1.小白最小白限脑内接种的应用比其它实验动物为多。注射时可先用乙醚作轻度麻 醉，术者以左手固定头部，右手持锋利的短小针头连接结核菌素注射器，于两耳根连接线中 点略偏左（或右），垂直刺入少许即可，缓缓注入接种物，以免突然增高颅内压力，注射量 不超过004m 2.家兔和豚鼠 脑内接种法基本和小白鼠相同，唯其颅骨较硬，最好事先用短锥先缺 孔，然后用注射器接种，深度宜浅，否则易伤脑组织。注射量为0.1~02ml。 凡作脑内接种后一小时内出现神经症状的动物作废，认为是接种创伤所致。 三、实验动物采血法
行煮沸消毒，然后将其洗净备用。 接种部位，先进行去毛（剪毛或剃毛），再以碘酒或酒精进行局部消毒。接种后，针头 拔出处，应以酒精棉球轻轻按压片刻，以防注射物外溢。 （一）皮下接种 注射部位，多选择腹股沟、腹壁中线或背部，局部去毛消毒后，用左 手拇指和食指将局部皮肤提起，右手将注射器针头刺入提起的皮肤下，然后左手放松，将接 种物缓缓注入，此时可见在注射处皮肤有片状的隐起，迅速拔针头，并以酒精棉球压按片刻， 防止注射物外溢。 小白鼠皮下注射时，左手保定，右手操作局部消毒，把持注射器，以针头稍微挑起腹股 沟皮肤插入皮下，注射时见有水泡微微鼓起即表示注入皮下。 （二）皮内接种 术者以左手拇指及食指夹起皮肤，右手持注射器，用 1ml 注射器附 以最小号针头（5 号针头），针头插入拇指与食指之内的皮肤内，针头插入不宜过深，同时 针头刺入角度要小，即与夹起的皮肤平行，注射时感到有阻力，且注射完毕后皮肤上有小硬 疱为注入皮内的表现。皮内注射要慢，否则容易使皮肤胀裂或自针孔流出注射物而散播传染。 注射量一般为 0.1～0.2ml。 （三）肌肉接种 注射部位，以腿部肌肉为宜，若为鸟类则以胸侧肌肉为宜。由一人抓 住实验动物，局部去毛消毒后，另一人将针头刺入肌肉层内，缓缓将接种物注入。注射量视 动物大小而定，一般为 0.2～1ml。 （四）腹腔内接种 腹腔接种，宜采取仰卧保定。接种时其后躯稍抬高使其内脏倾向前 腔，接种部位在腹后侧面，针头先插入皮下，后进入腹腔，注射时应无阻力，注射后皮肤应 无疱隆起。 （五）静脉接种 1．家兔 注射部位以耳外缘静脉为宜，若作多次注射，应先从耳尖部开始，以免因注 射造成血管栓塞，致使下次注射不能再利用该血管。为便于注射,轻弹兔耳、酒精涂擦及助 手以拇指、食指紧压耳根部，可使家兔耳边静脉扩张隆起。注射时，术者左手执兔耳，右手 持针，以与静脉平行方向刺入静脉，同时助手放松其紧压手指，以便血液流通。注射时无阻 力且有血向前流，即表示注入静脉，缓缓注射，注射完针头拔出后，用消毒棉球紧压针孔片 刻，以免血或注射物溢出。 2. 豚鼠 豚鼠静脉内接种比较困难，因为豚鼠没有裸露明显的静脉可寻，若必须作静 脉注射时，使豚鼠伏卧保定，并施以全身麻醉，选后腿下部外侧静脉，将该处剪毛消毒，用 锐刀切一长约 1cm 的切口，露出皮下静脉，用最小号针头，刺入静脉慢慢注入接种物。接 种完毕，皮肤应缝合一两针。 3．小白鼠 注射部位为尾静脉，以体重 15～20g 为宜。注射前，将小白鼠尾巴以热水 （60℃左右）棉球或酒精棉球擦拭，使静脉扩张。接种时用一玻璃漏斗扣住小白鼠，将尾巴 拉出。实验者左手拉尾巴，右手持注射器，用小号针头刺入尾侧静脉，缓缓注入接种物，若 注射无阻力，出现一条白线，表示注入到静脉内。 （六）脑内接种 1.小白鼠 小白鼠脑内接种的应用比其它实验动物为多。注射时可先用乙醚作轻度麻 醉，术者以左手固定头部，右手持锋利的短小针头连接结核菌素注射器，于两耳根连接线中 点略偏左（或右），垂直刺入少许即可，缓缓注入接种物，以免突然增高颅内压力，注射量 不超过 0.04 ml。 2．家兔和豚鼠 脑内接种法基本和小白鼠相同，唯其颅骨较硬，最好事先用短锥先钻 孔，然后用注射器接种，深度宜浅，否则易伤脑组织。注射量为 0.1～0.2ml。 凡作脑内接种后一小时内出现神经症状的动物作废，认为是接种创伤所致。 三、实验动物采血法
如欲取得清晰透明的血清，宜于早晨没有饲喂之前抽取血液，采集的血液放37℃温箱 或室温中让其凝固后，分离出血清。如利用全血，可直接接于含有抗凝剂的瓶内，或含玻珠 的三角瓶内振荡脱纤防凝。采血的方法往往根据用血的不同目的，用血量的多少，而采用不 同方法。 (一)家兔采血法家兔采血可采自耳静脉或心脏，耳边缘静脉采血保定和术式略同于 静脉内接种，不过采时系以针尖与耳尖同向抽吸其血，这样一次可采取血液1~2ml。 如果用大量血液，则应采取心脏采血法：动物应仰卧或由助手保定，或以绳索将四肢固 定，术者在动物左前肢敲下处剪毛及局部消毒，在胸部心脏跳动最明显处下针。用一寸半长 人用)号针头直刺深入至心脏，感到针头跳动或有血液向针管内流入时，即可抽血， 一次日 采血115≈20ml。 如为全取血，可自其颈动歌放血。先将动物仰保定，在其须部制毛消毒，动物稍加麻 醉，用刀片在颈静脉沟内切一长口，露出颈动脉，结颈动脉，于近心端插入一玻璃导管 使血液自行流至无菌容器内 鼠买 鼠采血一般皆来自心脏，其保定和术式同家兔心脏采血法。豚鼠 采血，多用其血清作为补体，故采出血液后立即置于消毒过的干燥容器中，凝后析出血清。 (三)小白鼠采血法小白鼠一般用简易的断尾采血法。方法是将尾端消毒，用剪刀断 尾少许，使血液流出，可得血液数滴，以供检验用。 (四)绵羊采血法绵羊用颈静脉采血。采用时，由一助手半坐骑在羊背上，两手各持 其一耳（或角）或，令后退在两墙的夹角，尾靠住墙根，因为羊的习惯好后退。术者在其 颈部上三分之一处剪毛消毒，一手压在静脉沟下部使静脉努张，右手持针头猛力刺入皮肤 熟练时即可同时刺入血管，此时血液流出，直接接纳于容器内，一切操作应尽量保持无菌和 不被污染，以便获得无菌血液。每头成年绵羊每次可采200~400ml,休息两周后可再采。 (五)鸡采血法采少量血，可用鸡冠或翼下静脉采血。鸡冠采血，即剪破鸡冠一突起 尖端，若需较大量血，还以采心血为好。助手将鸡固定于桌上，左胸朝上露出，用2寸长的 号针头连接上注射器 从胸骨脊的前端至背部下凹处连线的中点垂直刺入，约 寸深 可采得心血。鸡血极易凝固，采血用注射器事前应加有4%枸移酸钠1份，采血4份即可防 凝。 四、实验动物尸体剖检法 实验动物经接种后而死去或予以扑杀后，应对其尸体进行剖检，以观察其病变情况，并 可取材保存或进一步作微生物学 病理学 ,寄生虫学、毒物学等的检查 (一)先用肉眼观察动物体表情况，并留心观察接种部位有无变化。 二)将动物尸体仰卧姿势放在铺有纸张的解剖板上，用钉将其四肢钉住，再放于一塘 瓷盘中。 (三)用浸有3%来苏儿或碘酒、酒精棉球消毒颈、胸、腹部皮毛， (四)以无菌剪刀自其颈部至耻骨部剪开皮肤，并将四肢腋窝处皮肤剪开，剥离胸腹部 皮肤使其尽量翻向外侧，注意皮下组织有无出血、水肿等病变，观察腋下、腹股沟淋巴结有 无病变。 (五)另换一套灭菌剪刀剪开腹肌和腹膜，但须注意不可损伤肠管和胃。观察腹腔内有 无渗出液及其性状，观察腹腔内器官等有无变化，根据需要无菌采集材料进行培养和涂片检 (六)最后再换一套无菌剪刀剪开胸腔，观察心、肺有无病变。若作心血培养时，可将 烙铁烧红在心包膜烧烙，再从此处用无菌毛细吸管或注射器抽吸心血直接培养或作涂片。 (七)必要时破颅取脑组织作检查。 （八)如欲作组织切片检查，则取各种组织小块置于10%福尔马林液中使之固定
如欲取得清晰透明的血清，宜于早晨没有饲喂之前抽取血液，采集的血液放 37℃温箱 或室温中让其凝固后，分离出血清。如利用全血，可直接接于含有抗凝剂的瓶内，或含玻珠 的三角瓶内振荡脱纤防凝。采血的方法往往根据用血的不同目的，用血量的多少，而采用不 同方法。 （一）家兔采血法 家兔采血可采自耳静脉或心脏，耳边缘静脉采血保定和术式略同于 静脉内接种，不过采时系以针尖与耳尖同向抽吸其血，这样一次可采取血液 1～2ml。 如果用大量血液，则应采取心脏采血法：动物应仰卧或由助手保定，或以绳索将四肢固 定，术者在动物左前肢腋下处剪毛及局部消毒，在胸部心脏跳动最明显处下针。用一寸半长 人用 9 号针头直刺深入至心脏，感到针头跳动或有血液向针管内流入时，即可抽血，一次可 采血 15～20ml。 如为全取血，可自其颈动脉放血。先将动物仰卧保定，在其颈部剃毛消毒，动物稍加麻 醉，用刀片在颈静脉沟内切一长口，露出颈动脉，结扎颈动脉，于近心端插入一玻璃导管， 使血液自行流至无菌容器内。 （二）豚鼠采血法 豚鼠采血一般皆来自心脏，其保定和术式同家兔心脏采血法。豚鼠 采血，多用其血清作为补体，故采出血液后立即置于消毒过的干燥容器中，凝后析出血清。 （三）小白鼠采血法 小白鼠一般用简易的断尾采血法。方法是将尾端消毒，用剪刀断 尾少许，使血液流出，可得血液数滴，以供检验用。 （四）绵羊采血法 绵羊用颈静脉采血。采用时，由一助手半坐骑在羊背上，两手各持 其一耳（或角）或颚，令后退在两墙的夹角，尾靠住墙根，因为羊的习惯好后退。术者在其 颈部上三分之一处剪毛消毒，一手压在静脉沟下部使静脉努张，右手持针头猛力刺入皮肤， 熟练时即可同时刺入血管，此时血液流出，直接接纳于容器内，一切操作应尽量保持无菌和 不被污染，以便获得无菌血液。每头成年绵羊每次可采 200～400ml，休息两周后可再采。 （五）鸡采血法 采少量血，可用鸡冠或翼下静脉采血。鸡冠采血，即剪破鸡冠一突起 尖端，若需较大量血，还以采心血为好。助手将鸡固定于桌上，左胸朝上露出，用 2 寸长的 20 号针头连接上注射器，从胸骨脊的前端至背部下凹处连线的中点垂直刺入，约一寸深即 可采得心血。鸡血极易凝固，采血用注射器事前应加有 4％枸橼酸钠 1 份，采血 4 份即可防 凝。 四、实验动物尸体剖检法 实验动物经接种后而死去或予以扑杀后，应对其尸体进行剖检，以观察其病变情况，并 可取材保存或进一步作微生物学、病理学、寄生虫学、毒物学等的检查。 （一）先用肉眼观察动物体表情况，并留心观察接种部位有无变化。 （二）将动物尸体仰卧姿势放在铺有纸张的解剖板上，用钉将其四肢钉住，再放于一搪 瓷盘中。 （三）用浸有 3％来苏儿或碘酒、酒精棉球消毒颈、胸、腹部皮毛。 （四）以无菌剪刀自其颈部至耻骨部剪开皮肤，并将四肢腋窝处皮肤剪开，剥离胸腹部 皮肤使其尽量翻向外侧，注意皮下组织有无出血、水肿等病变，观察腋下、腹股沟淋巴结有 无病变。 （五）另换一套灭菌剪刀剪开腹肌和腹膜，但须注意不可损伤肠管和胃。观察腹腔内有 无渗出液及其性状，观察腹腔内器官等有无变化，根据需要无菌采集材料进行培养和涂片检 查。 （六）最后再换一套无菌剪刀剪开胸腔，观察心、肺有无病变。若作心血培养时，可将 烙铁烧红在心包膜烧烙，再从此处用无菌毛细吸管或注射器抽吸心血直接培养或作涂片。 （七）必要时破颅取脑组织作检查。 （八）如欲作组织切片检查，则取各种组织小块置于 10％福尔马林液中使之固定
(九)副检完毕，将动物尸体，用垫在解剖板上的纸张包好，予以焚烧或高压灭菌，亦 可浸入消毒药水中过夜，而后埋于深坑中，所用器械，均应煮沸消毒，实验台用3%来苏尔 进行擦洗
（九）剖检完毕，将动物尸体，用垫在解剖板上的纸张包好，予以焚烧或高压灭菌，亦 可浸入消毒药水中过夜，而后埋于深坑中，所用器械，均应煮沸消毒，实验台用 3％来苏尔 进行擦洗