实验五植物有丝分裂压片技术 全部遗传与遗传学的基础
实验五 植物有丝分裂压片技术 ——全部遗传与遗传学的基础
实验目的 学习植物根尖压片方法的基本技术。 熟悉细胞有丝分裂各个时期的形态特征及 染色体的变化，并学会染色体简易永久片 的制片技术
实 验 目 的 学习植物根尖压片方法的基本技术。 熟悉细胞有丝分裂各个时期的形态特征及 染色体的变化，并学会染色体简易永久片 的制片技术
实验原理 有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物根尖 或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大 的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规律 地进行。各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并 随科属种的不同而具有一定的特征。大蒜体细胞中有6对共12 条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份，然后 分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体 在数目、形态和性质上都是相同的。在细胞遗传学研究中，人 们常常需要了解某一物种的染色体数目，而最有效的方法就是 观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果
实验原理 有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物根尖 或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大 的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规律 地进行。各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并 随科属种的不同而具有一定的特征。大蒜体细胞中有6对共12 条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份，然后 分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体 在数目、形态和性质上都是相同的。在细胞遗传学研究中，人 们常常需要了解某一物种的染色体数目，而最有效的方法就是 观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果
实验村材料、器具与试剂 (一)实验材料 大蒜(Aillum sativum)根尖 (二)实验器具 显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、刀片、载玻片、 盖玻片、烧杯、1.5ml离心管、滴瓶、切片架、切片盒、玻片、大 培养皿、吸水纸、铅笔、吸管。 (三)药品试剂 卡诺氏固定液（甲醇或95%乙醇3份，冰醋酸1份）、改良苯酚品 红染色液（见附绿：实验试剂的配制）、1NHCL、95%乙醇、正 丁醇、加拿大树胶
（一）实验材料 大蒜（Aillum sativum）根尖 （二）实验器具 显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、刀片、载玻片、 盖玻片、烧杯、 1.5ml离心管、滴瓶、切片架、切片盒、玻片、大 培养皿、吸水纸、铅笔、吸管。 （三）药品试剂 卡诺氏固定液（甲醇或95%乙醇3份，冰醋酸1份）、改良苯酚品 红染色液（见附录：实验试剂的配制）、1N HCl、95%乙醇、正 丁醇、加拿大树胶。 实验材料、器具与试剂
实验方法 一) 材料准备 选取大蒜瓣去皮，用透明 在4腾 是根部 天左石。 得根长到1~2cm时，即可以进行 预处理。剪取粮尖的时间以上车10时左右为 且。 (二)预处理为利于有丝分裂中染色体的观 察和计数，固定之前进行预秘理：这样可改 变细胞质的粘度抑制域被坏纺锤丝的形成 促使染色体缩短和分散等。方法如下： 低温处理将材料浸入蒸馏水内，放置到1~ ℃冰箱中处理20~24小时
实验方法 （一）材料准备 选取大蒜瓣去皮，用透明 胶带固定放在盛有清水的培养皿中，是根部 与清水接触，在 20～25℃光照条件下培养2 天左右。待根尖长到1～2cm时，即可以进行 预处理。剪取根尖的时间以上午10时左右为 宜。 （二）预处理 为利于有丝分裂中染色体的观 察和计数，固定之前进行预处理，这样可改 变细胞质的粘度，抑制或破坏纺锤丝的形成， 促使染色体缩短和分散等。方法如下： 低温处理 将材料浸入蒸馏水内，放置到1～ 4℃冰箱中处理20～24小时
实央验方法 (三)固定通常采用的是卡诺氏固定液。 目的是用化 学的方法把细胞迅速杀死，使蛋白质变性，并尽量保持 原来的分裂状态，同时更易于着色。固定时，将根尖投 入固定液中室温处理3~24小时。 (四)解离目的是使分生组织细胞之间的果胶质层f 分解掉，并使细胞壁软化，便于压片。解离的时间视根 尖的粗细老嫩不同而有差异。方法是：将固定后（或保 存后)的根尖用清水洗几次，吸干水，加入1NHC溶 液，在60℃下水解不超过5min(解离成功的根尖，分 生组织发白，伸长区已呈半透明，似烂状。解离后的根 尖用水轻洗2~3次，以利于着色
实验方法 （三）固定 通常采用的是卡诺氏固定液。目的是用化 学的方法把细胞迅速杀死，使蛋白质变性，并尽量保持 原来的分裂状态，同时更易于着色。固定时，将根尖投 入固定液中室温处理3～24小时。 （四）解离 目的是使分生组织细胞之间的果胶质层f 分解掉，并使细胞壁软化，便于压片。解离的时间视根 尖的粗细老嫩不同而有差异。方法是：将固定后（或保 存后）的根尖用清水洗几次，吸干水，加入1N HCl溶 液，在60℃下水解不超过5min（解离成功的根尖，分 生组织发白，伸长区已呈半透明，似烂状。解离后的根 尖用水轻洗2～3次，以利于着色
实验方法 五)染色、压片将解离后的根尖用蒸馏水冲洗后，放入 45%醋酸中软化5min左右，制片时，取一根尖放在洁净 的载玻片上，用刀片切取1mm左右的生长区，其余部分 弃掉，滴加改良苯酚品红染色液染色15分钟左右。用镊 子在材料的地方轻压几下，使生长区的细胞分散开来，再 将多余的染料用吸水纸吸走，加盖玻片。用铅笔上的橡皮 头敲击根尖部位，重复几次，力一次比一次大，以盖玻片 不破裂为准。 六)观察将制好的标本片，置于显微镜下先作低倍观察，选 取不同分裂时期的典型细胞，换高倍镜观察，注意核及染 色体的动态变化
（五）染色、压片 将解离后的根尖用蒸馏水冲洗后，放入 45%醋酸中软化5min左右，制片时，取一根尖放在洁净 的载玻片上，用刀片切取1mm左右的生长区，其余部分 弃掉，滴加改良苯酚品红染色液染色15分钟左右。用镊 子在材料的地方轻压几下，使生长区的细胞分散开来，再 将多余的染料用吸水纸吸走，加盖玻片。用铅笔上的橡皮 头敲击根尖部位，重复几次，力一次比一次大，以盖玻片 不破裂为准。 六）观察 将制好的标本片，置于显微镜下先作低倍观察，选 取不同分裂时期的典型细胞，换高倍镜观察，注意核及染 色体的动态变化。 实验方法
前期 中期 后期
中 期 前 期 后 期
作业 1.绘有丝分裂中期、后期细胞图像。 2.减数分裂的细胞与有丝分裂的细胞有何 不同？
作 业 1. 绘有丝分裂中期、后期细胞图像。 2. 减数分裂的细胞与有丝分裂的细胞有何 不同？
www.bbioo.com 预处理：切取长约5mm的植物根尖，浸入0.1%秋水仙素中， 室温下处理36小时
预处理：切取长约5mm的植物根尖，浸入0.1%秋水仙素中， 室温下处理3~6小时