实验九 小白鼠减数分裂标本的制备及观察
小白鼠减数分裂标本的制备及观察 实验九
一、实验目的 本实验是掌握动物精巢染色体标本制 作方，观蔡细胞减数分裂过程中不同时 期的染色体，了解性细胞形成过程中的染 色体状态
一、实验目的 本实验是掌握动物精巢染色体标本制 作方法，观察细胞减数分裂过程中不同时 期的染色体，了解性细胞形成过程中的染 色体状态
二、 实验原理 减数分裂，是性细胞形成过程中的特殊 分裂方式。哺乳动物在性成熟后，精巢内的 性细胞总是在分批分期相继不断地成熟，因 此，对哺乳动物的精巢进行一定的技术处理， 随时都可获得减数分裂过程中各期染色体的 标本
二、实验原理 减数分裂，是性细胞形成过程中的特殊 分裂方式。哺乳动物在性成熟后，精巢内的 性细胞总是在分批分期相继不断地成熟，因 此，对哺乳动物的精巢进行一定的技术处理， 随时都可获得减数分裂过程中各期染色体的 标本
三、器材、试剂和实验材料 1.器材：显微镜、离心机、解剖器材、注射 器、10ml刻度离心管、试管架、吸管、培 养皿、（预冷）载玻片。 2.试剂：0.01%秋水仙素，2%柠檬酸钠溶液， 0.075mol/LKCl,甲醇，冰醋酸，Giemsa)原 液，1/15mo1/几磷酸缓冲液（pH=6.8) 。 3.实验材料：性成熟的雄性小白鼠
三、器材、试剂和实验材料 1.器材：显微镜、离心机、解剖器材、注射 器、10ml刻度离心管、试管架、吸管、培 养皿、（预冷）载玻片。 2.试剂：0.01%秋水仙素，2%柠檬酸钠溶液， 0.075mol/L KCl，甲醇，冰醋酸， Giemsa原 液，1/15mol/L磷酸缓冲液（pH=6.8）。 3.实验材料：性成熟的雄性小白鼠
四、实验步骤 1、前处理： ·为提高减数分裂的指数，增多 细胞的分裂相。提前3-4小时向 小鼠腹腔内注射0.01%秋水仙素 溶液。（每10g体重注入0.1ml) 2、取精巢： ·拖颈椎法处死小鼠，剖出精巢， 将精巢膜用剪刀剪开放入2%柠 檬酸钠溶液的离心管中。 3、研磨： ·用玻璃棒研磨精巢。 4、离心： ·将得到的精巢细胞液1000r/min离 心10min,弃上清
四、实验步骤 1、前处理： • 为提高减数分裂的指数，增多 细胞的分裂相。提前3-4小时向 小鼠腹腔内注射0.01%秋水仙素 溶液。（每10g体重注入0.1ml ） 2、取精巢： • 拖颈椎法处死小鼠，剖出精巢, 将精巢膜用剪刀剪开放入2％柠 檬酸钠溶液的离心管中。 3、研磨： • 用玻璃棒研磨精巢。 4、离心： • 将得到的精巢细胞液1000r/min离 心 10min，弃上清
5、低渗：加入0.075mo/LKCl58ml吸管打匀，室温下净置 30min。 6、离心：1000rmin离心10min,弃上清。 7、预固定：加入1ml左右的Carnoy's固定液轻轻混匀，静置 30min 8、离心：1000r/min离心10min,弃上清。 9、固定：沿管壁加入5~8 ml Carnoy's固定液，吹散打匀，净置 30min。 10、制细胞悬浮液：弃上清，留约0.10.2l的沉淀细胞和上清 液，用吸管反复轻吸混匀，制成细胞悬液。 11、滴片：取冰箱中预冷的洁净载玻片，30°倾斜，用吸管吸 取一滴上述细胞悬液，于载玻片上适当高度滴在载玻片上， 立即吹散吹匀细胞，扩散平铺于玻片上，空气中自然干燥。 12、染色、水洗：载玻片充分干燥后，用pH6.8的磷酸缓冲液按 1份Giemsa原液9份磷酸缓冲液混匀后染色。材料面向上， 用染液覆盖载玻片，染色10~15mim,用流水洗去多余染液， 再用吸水纸吸干多余水分。 13、镜检：干燥后即可镜检
5、低渗：加入0.075mol/LKCl5～8ml吸管打匀，室温下净置 30 min 。 6、离心：1000r/min离心10min，弃上清。 7、预固定：加入1ml左右的Carnoy’s固定液轻轻混匀，静置 30min 8、离心： 1000r/min离心10min，弃上清。 9、固定：沿管壁加入5～8ml Carnoy’s固定液，吹散打匀，净置 30min。 10、制细胞悬浮液：弃上清，留约0.1～0.2ml的沉淀细胞和上清 液，用吸管反复轻吸混匀，制成细胞悬液。 11、滴片：取冰箱中预冷的洁净载玻片，30°倾斜，用吸管吸 取一滴上述细胞悬液，于载玻片上适当高度滴在载玻片上， 立即吹散吹匀细胞，扩散平铺于玻片上，空气中自然干燥。 12、染色、水洗：载玻片充分干燥后，用pH6.8的磷酸缓冲液按 1份Giemsa 原液9份磷酸缓冲液混匀后染色。材料面向上， 用染液覆盖载玻片，染色10～15min，用流水洗去多余染液, 再用吸水纸吸干多余水分。 13、镜检：干燥后即可镜检
五、实验观察结果 ·在低倍镜找到有分裂相的细胞，再用高倍镜仔细观察染色体的 形态特征 ·减数第一次分裂时间相对较长、且复杂，前期中就有五个期： 1:前期：细线期；偶线期（姊妹染色单体、联会）；粗线期； 双线期（交换）；终变期。 中；后；末 ‖：前；中；后；末。 二分体：每一条染色体含有两条染色单体，故称为二分体。 四分体：配对的同源染色体称为双价体，也叫四分体
五、实验观察结果 • 在低倍镜找到有分裂相的细胞，再用高倍镜仔细观察染色体的 形态特征 • 减数第一次分裂时间相对较长、且复杂，前期I中就有五个期： Ⅰ：前期:细线期; 偶线期(姊妹染色单体、联会);粗线期； 双线期(交换)；终变期。 中；后；末 Ⅱ: 前；中；后；末。 二分体：每一条染色体含有两条染色单体，故称为二分体。 四分体：配对的同源染色体称为双价体，也叫四分体
小白鼠睾丸细胞分裂10倍物镜下 中期肛I 分裂相 中期肛 分裂相 」间期核 精子
小白鼠睾丸细胞分裂10倍物镜下
间期 中期 前期 后期
前期 后期 间期 中期
Interphase间期 Prophase 前期 taphase 中期 Anaphase后期 Anaphase后期 early telophase早末期
间期 前期 中期 后期 后期 早末期