实验七 植物细胞微核检测技术 全部遗传与遗传学的基础
植物细胞微核检测技术 实 验 七 ——全部遗传与遗传学的基础
一、实验目的 1、了解细胞微核形成机理及形态特点 2、学习植物根尖细胞的微核检测技术
一、实验目的 1、了解细胞微核形成机理及形态特点 2、学习植物根尖细胞的微核检测技术
二、实验原理 ·微核(micronuclei)简称MCN,是真核类生物细胞中的一种异 常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在 细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应 在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核 一样，也具合成DNA的能力。 ·一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产 生的，在有丝分裂后期不能向两极移动，所以游离于细胞质 中，在间期细胞核形成时，即可在它附近看到一到几个很小 的圆形结构，直径大约是细胞直径的1/20~1/5，这就是微 核
二、实验原理 • 微核(micronuclei)简称MCN，是真核类生物细胞中的一种异 常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在 细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应 在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核 一样，也具合成DNA的能力。 • 一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产 生的，在有丝分裂后期不能向两极移动，所以游离于细胞质 中，在间期细胞核形成时，即可在它附近看到一到几个很小 的圆形结构，直径大约是细胞直径的1/20～1/5，这就是微 核
·微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈 正相关，因此，微核是常用的遗传毒理学指标之 一，指示染色体或纺锤体的损伤。微核测试已用 于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、 染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面
• 微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈 正相关，因此，微核是常用的遗传毒理学指标之 一，指示染色体或纺锤体的损伤。微核测试已用 于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、 染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面
三、实验材料 大蒜 四、实验仪器及试剂 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、镊子、载玻 片及盖玻片。 盐酸，固定液，Cr03,NaN3,EMS
三、实验材料 大蒜 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、镊子、载玻 片及盖玻片。 盐酸，固定液，CrO3，NaN3，EMS。 四、实验仪器及试剂
五、实验步骤 1、大蒜幼根的培养：提前3~5天进行培养，将大蒜瓣剥去外 边膜质枯皮，下端可见许多微微凸起的根原体，将蒜瓣架在 烧杯（大小与蒜瓣适宜)口上，杯中盛满清水，使蒜瓣的下 部浸入水中，置培养箱中，注意每天换水，经3~5天后，即 可长出1-2cm的嫩根。 2、处理根尖：阳性检测采用1.0~2.5MCr03,0.5~1.5M NaN3,150250 mM EMS,对照用自来水处理，处理时间24h。 3、恢复培养：处理后的根尖用自来水浸洗3次，每次2-3min, 洗净后在水中恢复培养24h
五、实验步骤 1、大蒜幼根的培养：提前3～5天进行培养，将大蒜瓣剥去外 边膜质枯皮，下端可见许多微微凸起的根原体，将蒜瓣架在 烧杯（大小与蒜瓣适宜）口上，杯中盛满清水，使蒜瓣的下 部浸入水中，置培养箱中，注意每天换水，经3～5天后，即 可长出1-2cm的嫩根。 2、处理根尖：阳性检测采用 1.0～2.5M CrO3，0.5～1.5M NaN3，150250mM EMS，对照用自来水处理，处理时间24h。 3、恢复培养：处理后的根尖用自来水浸洗3次，每次2-3min， 洗净后在水中恢复培养24h
4、固定：用甲醛：冰醋酸（3：1)固定液固定24h后弃去 固定液，或换入70%酒精中保存。 5、酸解：弃去固定液，用清水漂洗2-3次，吸净水，加入 6M盐酸，于室温解离10min,弃去盐酸，漂洗根尖2-3 次，彻底洗净盐酸。 6、染色：截下1-2mm长的根尖，滴加石炭酸品红染液，染 色10min,加盖玻片，压片观察
4、固定：用甲醛：冰醋酸（3：1）固定液固定24h后弃去 固定液，或换入70％酒精中保存。 5、酸解：弃去固定液，用清水漂洗2-3次，吸净水，加入 6M盐酸，于室温解离10min，弃去盐酸，漂洗根尖2-3 次，彻底洗净盐酸。 6、染色：截下1-2mm长的根尖，滴加石炭酸品红染液，染 色10min，加盖玻片，压片观察
·固定是借助于物理方法或化学药剂的作用，迅速透入组 织和细胞将之杀死，并且使其结构和内含物如：蛋白质， 脂肪，糖类以及核物质与细胞器等，在形态结构上尽可能 保持生活时的完整和真实状态，同时更易于染色，可以较 清楚的显现细胞在生活时不易看清的结构。 •酸解的作用是去除未固定的蛋白质，同时使胞间层的果胶 类物质解体，细胞分散而易于观察
• 固定是借助于物理方法或化学药剂的作用，迅速透入组 织和细胞将之杀死，并且使其结构和内含物如：蛋白质， 脂肪，糖类以及核物质与细胞器等，在形态结构上尽可能 保持生活时的完整和真实状态，同时更易于染色，可以较 清楚的显现细胞在生活时不易看清的结构。 • 酸解的作用是去除未固定的蛋白质, 同时使胞间层的果胶 类物质解体，细胞分散而易于观察
六、实验结果 1、首先在低倍镜中找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较 多的部位，再转高倍镜观察，找到微核。 2、微核识别标准： (1)在主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。 (2)小核着色与主核相当或稍浅。 (3)小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。 3、每一处理观察3个根尖，每个根尖计数100个细胞，统计其 中含微核的细胞数，计算平均数，即为该处理的MCN%o,即 微核千分率。 样品实测MCN%。平均值 污染指标（PI)= 对照组（标准水）MCN%平均值
1、首先在低倍镜中找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较 多的部位，再转高倍镜观察，找到微核。 2、微核识别标准： （1）在主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。 （2）小核着色与主核相当或稍浅。 （3）小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。 3、每一处理观察3个根尖，每个根尖计数100个细胞，统计其 中含微核的细胞数，计算平均数，即为该处理的MCN‰，即 微核千分率。 样品实测MCN‰平均值 对照组（标准水）MCN‰平均值 污染指标（PI）= 六、实验结果
微核 微核
微核 微核