实验八 小鼠骨髓细胞染色体制片与观察
实验八 小鼠骨髓细胞染色体制片与观察
一、实验目的 1、了解动物细胞染色体制片的原理； 2、学习小鼠骨髓细胞染色体的制片方法； 3、观察小扇细胞染色体的数目和形态
1、了解动物细胞染色体制片的原理； 2、学习小鼠骨髓细胞染色体的制片方法； 3、观察小鼠细胞染色体的数目和形态。 一、实验目的
二、实验原理 骨髓细胞具有高度的分裂活性，不需体外 培养就可直接观察到分裂细胞。经秋水仙素处 理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经 低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作 较好的骨髓细胞的染色体标本
二、实验原理 骨髓细胞具有高度的分裂活性，不需体外 培养就可直接观察到分裂细胞。经秋水仙素处 理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经 低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作 较好的骨髓细胞的染色体标本
三、实验材料 小白鼠（2n=40) 四、实验仪器、试剂 器材：解剖器具、注射器及针头、离心机、离心 管、载玻片等； 试剂：0.01%秋水仙素溶液，Carnoy's固定液 (甲醇：冰醋酸=3：1)、0.075mol/L的KC溶液， Giemsa原液，1/15mol/L磷酸缓冲液（pH=6.8)
四、实验仪器、试剂 器材：解剖器具、注射器及针头、离心机、离心 管、载玻片等； 试剂：0.01%秋水仙素溶液，Carnoy’s固定液 （甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075mol/L的KCl溶液, Giemsa 原液，1/15mol/L磷酸缓冲液（pH=6.8 ）。 三、实验材料 小白鼠（2n=40）
五、方法与步骤 1、前处理 ·为提高有丝分裂的指 数，增多细胞中期分裂 相。提前3-4小时向小 鼠腹腔内注射0.01%秋 水仙素溶液。（每10g 体重注入0.1ml） (正在进行有丝分裂和减 数分裂的细胞，用秋水 仙素处理后，所有细胞 均停止分裂)
1、前处理 • 为提高有丝分裂的指 数，增多细胞中期分裂 相。提前3-4小时向小 鼠腹腔内注射0.01%秋 水仙素溶液。（每10g 体重注入0.1ml ） • （正在进行有丝分裂和减 数分裂的细胞，用秋水 仙素处理后，所有细胞 均停止分裂）。 五、方法与步骤
2、取股骨 ·腹腔内注射秋水仙素34小时后，拖颈椎法处死 小鼠，剖出股骨，剔净股骨上的肌肉用2%柠檬 酸钠溶液洗净
• 腹腔内注射秋水仙素3~4小时后，拖颈椎法处死 小鼠，剖出股骨，剔净股骨上的肌肉用2％柠檬 酸钠溶液洗净。 2、取股骨
●●● 。 注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细： 胞的流失
• 注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细 胞的流失
3、取骨髓细胞 ·剪去股骨两端，加入适量2%柠檬酸钠溶液，用剪刀将 骨充分剪碎，并用吸管吹打，使骨髓细胞液全部释放 出来
• 剪去股骨两端，加入适量2％柠檬酸钠溶液,用剪刀将 骨充分剪碎，并用吸管吹打，使骨髓细胞液全部释放 出来。 3、取骨髓细胞
4、离心 ·将获得的骨髓细胞液过滤到离心管中，再加入适量的 2%柠檬酸钠溶液，1000 r/min离心10min,弃上清
4、离心 • 将获得的骨髓细胞液过滤到离心管中，再加入适量的 2％柠檬酸钠溶液，1000r/min离心10 min，弃上清
5、低渗 ·加入0.075mol/LKC18ml,用吸管打匀，室温下净置低 渗25mim
5、低渗 • 加入0.075mol/LKCl 8ml，用吸管打匀，室温下净置低 渗25 min