第二十二章金免疫技术 温州医学院检验医学院 临床免疫学检验教研室 张文辉
第二十二章 金免疫技术 温州医学院检验医学院 临床免疫学检验教研室 张文辉
金免疫技术 (colloidal gold immunoassay technique) ·以胶体金作为标记物的免疫标记技术 ·金免疫组织化学染色技术 金（银）免疫光镜染色技术 金免疫电镜染色技术 ·金免疫测定技术后者 斑点金免疫渗滤试验 斑点金免疫层析试验
金免疫技术 （colloidal gold immunoassay technique） • 以胶体金作为标记物的免疫标记技术 • 金免疫组织化学染色技术 金（银）免疫光镜染色技术 金免疫电镜染色技术 • 金免疫测定技术后者 斑点金免疫渗滤试验 斑点金免疫层析试验
第一节胶体金与免疫金制备(preparations of colloidal gold and immunogold) ·一、胶体金特性及其制备 ·二、免疫金的制备 ·三、免疫金的保存
第一节 胶体金与免疫金制备(preparations of colloidal gold and immunogold) • 一、胶体金特性及其制备 • 二、免疫金的制备 • 三、免疫金的保存
(一)胶体金的结构 胶体金(colloidal gold)也称金溶胶 (gold solution),是金盐被还原成金原 子后形成的金颗粒悬液。 ·胶体金颗粒由一个基础金核（金原子Au) 及包围在外的双离子层构成，紧连在金 核表面的是内层负离子(AuC12一)， 外层离子层H+则分散在胶体间溶液中， 以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态
（一）胶体金的结构 • 胶体金（colloidal gold）也称金溶胶 （gold solution），是金盐被还原成金原 子后形成的金颗粒悬液。 • 胶体金颗粒由一个基础金核（金原子Au） 及包围在外的双离子层构成，紧连在金 核表面的是内层负离子（AuC12－）， 外层离子层H+则分散在胶体间溶液中， 以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态
(二)胶体金性状 ● 胶体金一般性质：胶体的多种特性，特 别是对电解质的敏感性 ·胶体金的颜色和光吸收性 胶体金颗粒大小不同，颜色不同， 光吸收性也不同
（二）胶体金性状 • 胶体金一般性质 ：胶体的多种特性，特 别是对电解质的敏感性 • 胶体金的颜色和光吸收性 胶体金颗粒大小不同，颜色不同， 光吸收性也不同
胶体金的制备 。原理向一定浓度的金溶液内加入一定 量的还原剂使金离子变成金原子，形成 金颗粒悬液。 ·目前常用的还原剂有：白磷、乙醇、过 氧化氢、硼氢化钠、抗坏血酸、枸橼酸 钠、鞣酸等。 ● 最常用的制备方法为柠檬酸盐还原法
胶体金的制备 • 原理 向一定浓度的金溶液内加入一定 量的还原剂使金离子变成金原子，形成 金颗粒悬液。 • 目前常用的还原剂有：白磷、乙醇、过 氧化氢、硼氢化钠、抗坏血酸、枸橼酸 钠、鞣酸等。 • 最常用的制备方法为柠檬酸盐还原法
●胶体金的鉴定 主要鉴定指标有颗粒大小、粒径的均 程度及有无凝集颗粒等 。胶体金的保存 胶体金在洁净的玻璃器皿中可较长时 间保存，加入少许防腐剂（如0.02%NaN3 更有利于保存
• 胶体金的鉴定 主要鉴定指标有颗粒大小、粒径的均 一程度及有无凝集颗粒等 • 胶体金的保存 胶体金在洁净的玻璃器皿中可较长时 间保存，加入少许防腐剂（如0.02％NaN3） 更有利于保存
注意事项 ·(1)氯金酸易潮解，应于干燥处避光保存。 。(2)氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在 配制氯金酸溶液时，不应使用金属药匙称量氯 金酸。 ·(3)用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水 或三蒸馏水，或者是高质量的去离子水。 ·(4)用以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对 清洁的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最 好是经硅化处理，硅化方法为用5%二氯甲硅 烷的氯仿溶液浸泡数分钟，蒸馏水冲净，干燥 后备用
注意事项 • （1）氯金酸易潮解，应于干燥处避光保存。 • （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在 配制氯金酸溶液时，不应使用金属药匙称量氯 金酸。 • （3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水 或三蒸馏水，或者是高质量的去离子水。 • （4）用以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对 清洁的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最 好是经硅化处理，硅化方法为用5％二氯甲硅 烷的氯仿溶液浸泡数分钟，蒸馏水冲净，干燥 后备用
免疫金的制备 ·免疫金(immunogold)是指胶体金与抗原 (抗体)的结合物，在免疫组织化学染色技 术中，习惯上称之为金探针
免疫金的制备 • 免疫金（immunogold）是指胶体金与抗原 （抗体）的结合物,在免疫组织化学染色技 术中，习惯上称之为金探针
制备原理 ·胶体金颗粒表面带负电荷，与蛋白质表 面带正电荷的基团间靠静电力相互吸引， 达到范德华引力作用范围内即形成牢固 的结合，同时胶体金颗粒的粗糙表面也是 形成吸附的重要条件。因此，环境H和 离子强度是影响吸附的主要因素，其他 如胶体金颗粒的大小、蛋白质的分子量 及蛋白质浓度等也会影响胶体金与蛋白 质的吸附
制备原理 • 胶体金颗粒表面带负电荷，与蛋白质表 面带正电荷的基团间靠静电力相互吸引， 达到范德华引力作用范围内即形成牢固 的结合,同时胶体金颗粒的粗糙表面也是 形成吸附的重要条件。因此，环境pH和 离子强度是影响吸附的主要因素，其他 如胶体金颗粒的大小、蛋白质的分子量 及蛋白质浓度等也会影响胶体金与蛋白 质的吸附