第十四章特异性抗体的制备技术 Preparation of Specific Antibody 温州医学院检验医学院 临床免疫学检验教研室 陶志华
第十四章 特异性抗体的制备技术 Preparation of Specific Antibody 温州医学院检验医学院 临床免疫学检验教研室 陶志华
内容提要 第一节 免疫原的制备 第二节免疫血清的制备 第三节单克隆抗体制备技术 第四节基因工程抗体技术
内容提要 第一节 免疫原的制备 第二节 免疫血清的制备 第三节 单克隆抗体制备技术 第四节 基因工程抗体技术
免疫原 抗血清（多克隆抗体） 抗体 单克隆抗体 基因工程抗体
抗体 基因工程抗体 免疫原 抗血清(多克隆抗体)) 单克隆抗体
Epitopes Isolate spleen cells Hybridize Select ① Isolate serum ① Plasma cells Myeloma cells Hybridomas $8a88 Clones Ab-1 Ab-1 Ab-2 Ab-3 Ab-4 Ab-2 Ab-3 Ab- Polyclonal antiserum Monoclonal antibodies
LIGHT-CHAIN GENES HEAVY-CHAIN GENES Mouse VL Human CL Mouse VH Human CH Promoter Plasmid DNA Ig Promoter Transfect Light-chain into Ab- Heavy-chain 基因工程抗体 chimeric myeloma cells chimeric vector vector Selection gene (amp) Transfected antibody-secreting myeloma cell Chimeric mouse-human antibody
基因工程抗体
第一节 免疫原制备 抗原 免疫原
第一节 免疫原制备 抗原 免疫原
免疫原基本要求： 纯，良好免疫原性
免疫原基本要求： 纯，良好免疫原性
颗粒性抗原 (一)绵羊红细胞的制备 (二)细菌免疫原的制备 1.细菌菌体 2.细菌鞭毛抗原 3.细菌毒素
（一）绵羊红细胞的制备 （二）细菌免疫原的制备 1. 细菌菌体 2. 细菌鞭毛抗原 3. 细菌毒素 一、 颗粒性抗原
绵羊红细胞的制备流程图 摇动 15 20min 周 可保存3 NS稀释至 NS洗涤3 2~5% 次 取适量 2000r/mi 10min
绵羊红细胞的制备流程图 摇动 15- 20min 4℃ 可 保 存 3 周 取适量 NS洗涤3 次 2000r/mi n 10min NS稀释至 2～5%
100℃水浴 22.5h 杀菌 无菌试验 液体培养或 斜面培养 NS稀释成8~10亿/ml 37°℃24h 细菌细胞抗原的制备流程 图 O菌体抗原 返回
细菌细胞抗原的制备流程 图 液体培养或 斜面培养 37℃24h 100℃水浴 2～2.5h 杀菌 无菌试验 O菌体抗原 返回