补体结合试验 (complement fixation test,CFT)
补体结合试验 （complement fixation test，CFT）
实验原理 ●利用抗原抗体复合物可结合补体，而游离的抗原 或抗体不能结合补体的特点，以溶血素和SBRC这 对抗原抗体系统作为指示系统，指示补体是否被 结合，从而判断抗原抗体是否相对应的试验。可 用已知抗原检测未知抗体，也可用已知抗体检测 未知抗原
实验原理 ⚫ 利用抗原抗体复合物可结合补体，而游离的抗原 或抗体不能结合补体的特点，以溶血素和SBRC这 对抗原抗体系统作为指示系统，指示补体是否被 结合，从而判断抗原抗体是否相对应的试验。可 用已知抗原检测未知抗体，也可用已知抗体检测 未知抗原
实验原理 ●该试验中有5种成分参与反应，分属于3个系统： ①反应系统：已知的Ag(或Ab)与待测的Ab (或Ag); ②补体系统： ③指示系统：SRBC与溶血素，试验时常将其预 先结合在一起，形成致敏红细胞。 ●反应系统与指示系统争夺补体系统，先加入反应 系统给其以优先结合补体的机会
⚫ 该试验中有5种成分参与反应，分属于3个系统： ①反应系统：已知的Ag（或Ab）与待测的Ab （或Ag）； ②补体系统； ③指示系统：SRBC与溶血素，试验时常将其预 先结合在一起，形成致敏红细胞。 ⚫ 反应系统与指示系统争夺补体系统，先加入反应 系统给其以优先结合补体的机会。 实验原理
是检系统 指乐系统 落血反应 孙袜华合试验 :.仅打记体 红细孢 性 性 补 浮血羚 护体 2.仪钉航别 九野 红细型 R性 性 溶血为 3、拉顷抗休反应 抗便 ￥二细 性 .性 补体 溶血潔 抗体
实验步骤 ●待测抗原倍比稀释1：1~1：128 ●按表格加样和操作 ●1000rpm离心2min ●制备半溶血管0.55mlH2O+0.05ml2%SRBC 补体结合实验（1) 血清 ⑥ 巴此馁 20 2刀 试管号 置 2XSRBC 置 (抗源) 抗琳 缓冲液 补体 溶血素 37心 37℃ 1-8待抗源 0.1 0.1 0.2 0.1 0.1 水浴 水浴 9溶血对照 0.2 0.2 0.1 0.1 30min 10抗体对烟 0.1 0.1 0.2 0.1 0.1
实验步骤 ⚫ 待测抗原倍比稀释 1：1～1：128 ⚫ 按表格加样和操作 ⚫ 1000rpm离心2min ⚫ 制备半溶血管 0.55ml H2O+0.05ml 2%SRBC
结果观察和判断 ●应该先观察对照管，溶血素对照管和抗体 对照管完全溶血方可证明实验结果可靠， 若有背离，说明实验试剂或操作有误。 ●在对照管结果与预期相符合的情况下，待 检管呈现溶血现象时为阴性反应，不出现 溶血现象为阳性反应
结果观察和判断 ⚫应该先观察对照管，溶血素对照管和抗体 对照管完全溶血方可证明实验结果可靠， 若有背离，说明实验试剂或操作有误。 ⚫在对照管结果与预期相符合的情况下，待 检管呈现溶血现象时为阴性反应，不出现 溶血现象为阳性反应
●将实验管与半溶血管对比，与半溶血管溶 血程度最相近的一管的抗原稀释度为抗原 效价
⚫将实验管与半溶血管对比，与半溶血管溶 血程度最相近的一管的抗原稀释度为抗原 效价
注意事项 ● 实验器材应清洁，残留的某些脂类、变性的球蛋 白和酸碱等化学物质均可非特异性结合补体或破 坏补体活性。 ●绵羊红细胞、抗原和诊断血清等试剂均不能被细 菌污染。 ●时间、温度、电解质、酸碱度以及各种成分的剂 量等因素均可影响实验结果，所以需对实验的条 件和各个环节加以严格控制
注意事项 ⚫ 实验器材应清洁，残留的某些脂类、变性的球蛋 白和酸碱等化学物质均可非特异性结合补体或破 坏补体活性。 ⚫ 绵羊红细胞、抗原和诊断血清等试剂均不能被细 菌污染。 ⚫ 时间、温度、电解质、酸碱度以及各种成分的剂 量等因素均可影响实验结果，所以需对实验的条 件和各个环节加以严格控制
应用与评价 ·补体结合试验是一项传统的免疫学技术。 ●优点：①灵敏度高：比沉淀反应和凝集反应的灵敏度高得 多，能测定0.05μg/m1的抗体，可与间接凝集法的灵敏度 相当。②特异性强：各种反应成分事先都经过滴定，选择 了最佳比例，出现交叉反应的机率较小，尤其用小量法或 微量法时。③应用面广：可用于定性或半定量检测多种类 型的抗原或抗体。④易于普及：试验条件要求低，不需要 特殊仪器或只用分光光度计即可，试验结果显而易见
应用与评价 ⚫ 补体结合试验是一项传统的免疫学技术。 ⚫ 优点：①灵敏度高：比沉淀反应和凝集反应的灵敏度高得 多，能测定0.05μg/ml的抗体，可与间接凝集法的灵敏度 相当。②特异性强：各种反应成分事先都经过滴定，选择 了最佳比例，出现交叉反应的机率较小，尤其用小量法或 微量法时。③应用面广：可用于定性或半定量检测多种类 型的抗原或抗体。④易于普及：试验条件要求低，不需要 特殊仪器或只用分光光度计即可，试验结果显而易见
●缺点：参与反应的成分多，影响因素复杂， 操作步骤繁锁并且要求十分严格，稍有疏 忽便会得出不正确的结果，而且补体等试 剂不稳定，所以在临床检验中已很少应用。 但对于免疫学技术的基本训练仍是一个很 好的试验
⚫缺点：参与反应的成分多，影响因素复杂， 操作步骤繁锁并且要求十分严格，稍有疏 忽便会得出不正确的结果，而且补体等试 剂不稳定，所以在临床检验中已很少应用。 但对于免疫学技术的基本训练仍是一个很 好的试验