血清总补体溶血活性测定
血清总补体溶血活性测定
概述 ●补体是存在于血清中的一组不耐热的具有酶活性 的球蛋白。 ●补体是抗体发挥溶细胞或溶菌作用的补充条件。 ● 在正常情况下，补体含量相对稳定，但在某些疾 病时可发生变化。 ●动态监测血清总补体的活性，对一些疾病有辅助 诊断的意义
⚫ 补体是存在于血清中的一组不耐热的具有酶活性 的球蛋白。 ⚫ 补体是抗体发挥溶细胞或溶菌作用的补充条件。 ⚫ 在正常情况下，补体含量相对稳定，但在某些疾 病时可发生变化。 ⚫ 动态监测血清总补体的活性，对一些疾病有辅助 诊断的意义。 概述
实验原理 绵羊红细胞(SRBC)与相应抗体结合形 ● 成的致敏红细胞可激活补体，从而导致 SRBC溶解。 ●当致敏红细胞的浓度一定时，在规定的反 应时间内，溶血程度与补体的活性成正相 关，但不是直线关系，为典型的$形曲线
实验原理 ⚫绵羊红细胞（ SRBC）与相应抗体结合形 成的致敏红细胞可激活补体，从而导致 SRBC溶解。 ⚫当致敏红细胞的浓度一定时，在规定的反 应时间内，溶血程度与补体的活性成正相 关，但不是直线关系，为典型的S形曲线
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●在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的 变化不能使溶血程度有显著改变，即溶血 对补体量的变化不敏感。 ●在半溶血(50%溶血)上下时曲线最陡， 即使补体含量仅有较小变动时，溶血程度 也会发生较大的改变，也就是说对补体量 的变化非常敏感
⚫在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的 变化不能使溶血程度有显著改变，即溶血 对补体量的变化不敏感。 ⚫在半溶血（50％溶血）上下时曲线最陡， 即使补体含量仅有较小变动时，溶血程度 也会发生较大的改变，也就是说对补体量 的变化非常敏感
●故采用50%溶血作为终点指标要比100% 溶血敏感的多，这一方法称为补体50%溶 血试验（complement hemolysis50% assay),简称为CH50。 ●以引起50%溶血所需的最小补体量为一个 CH50单位，由此可以计算出待测血清中总 的补体溶血活性，以U/ml表示
⚫故采用50％溶血作为终点指标要比100％ 溶血敏感的多，这一方法称为补体50％溶 血试验（complement hemolysis 50％ assay），简称为CH50。 ⚫以引起50%溶血所需的最小补体量为一个 CH50单位，由此可以计算出待测血清中总 的补体溶血活性，以U/ml表示
主要试剂与器材 ●溶血素 ●2%SRBC ●pH7.4巴比妥缓冲液(BBS) ●待测血清、蒸馏水 ●离心机、试管、吸管、恒温水浴箱、分光 光度计、比色杯等
主要试剂与器材 ⚫溶血素 ⚫2％SRBC ⚫pH7.4 巴比妥缓冲液（BBS） ⚫待测血清、蒸馏水 ⚫离心机、试管、吸管、恒温水浴箱、分光 光度计、比色杯等
实验步骤 ●1.稀释待测血清：吸取待测血清0.2ml,加 BBS3.8ml,将血清1：20稀释（已完成）
实验步骤 ⚫1.稀释待测血清：吸取待测血清0.2ml，加 BBS3.8ml，将血清1：20稀释（已完成）
●2.正式实验 取10只试管，分别编号，按照下表加入各试剂 试管号BBS1:20稀释血清2%SRBC2U溶血素 补体溶血活性 1 1.40 0.10 0.5 0.5 200 1.35 0.15 0.5 0.5 133 置 1.30 0.20 0.5 0.5 100 37℃ 4 1.25 0.25 0.5 0.5 80 水浴 1.20 0.30 0.5 0.5 66.6 30min 6 1.15 0.35 0.5 0.5 57.1 > 1.10 0.40 0.5 0.5 50 1.05 0.45 0.5 0.5 44.4 9 1.00 0.50 0.5 0.5 40 101.50 0.00 0.5 0.5
⚫2.正式实验 取10只试管，分别编号，按照下表加入各试剂 试管号 BBS 1：20稀释血清 2％SRBC 2U溶血素 补体溶血活性 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1.40 1.35 1.30 1.25 1.20 1.15 1.10 1.05 1.00 1.50 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.00 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 置 37℃ 水浴 30min 200 133 100 80 66.6 57.1 50 44.4 40 -
●3.制备50%溶血标准管 理论方法 代替方法 2%SRBC 0.5ml 4.5mlH20 + 蒸馏水2ml一使红细胞全部溶血 2 %SRBC 0.5ml + 17g/L高渗盐水2ml一形成等渗 2%SRBC0.5ml一50%溶血管 以上两种方法效果相同，所以实验中采用后者
⚫3.制备50％溶血标准管 理论方法 代替方法 2％SRBC 0.5ml 4.5ml H2O + + 蒸馏水2ml 2 ％SRBC 0.5ml + 17g/L高渗盐水 2ml + 2 ％SRBC 0.5ml 以上两种方法效果相同，所以实验中采用后者。 使红细胞全部溶血 形成等滲 50％溶血管