第十八章荧光免疫技术 Fluoroimmunoassay 温州医学院检验医学院 临床免疫学检验教研室 杨建荣
第十八章 荧光免疫技术 Fluoroimmunoassay 温州医学院检验医学院 临床免疫学检验教研室 杨建荣
荧光免疫技术 将抗原抗体反应的特异性和荧光物质 检测的直观性和敏感性结合起来的一种 免疫分析技术
荧光免疫技术 将抗原抗体反应的特异性和荧光物质 检测的直观性和敏感性结合起来的一种 免疫分析技术
技术分类 (1)荧光抗体染色技术（荧光显微镜技术） 抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判 定结果的检测方法。 (2)免疫荧光测定技术： 抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定 荧光强度而推算被测物浓度的检测方法
技术分类 ⑴荧光抗体染色技术(荧光显微镜技术) 抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判 定结果的检测方法。 ⑵ 免疫荧光测定技术： 抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定 荧光强度而推算被测物浓度的检测方法
第一节荧光标记物的制备
第一节 荧光标记物的制备
一、 荧光和荧光物质 1荧光的产生： 物质吸收外界能量而进入激发状态，在回复 基态时多余的能量以电磁辐射的形式释放，即发 光，这种光称为荧光。 由光激发所引起的荧光，为光致荧光 -荧光免疫技术 由化学反应所引起的荧光，为化学荧光 -化学发光技术
一、荧光和荧光物质 1.荧光的产生： 物质吸收外界能量而进入激发状态，在回复 基态时多余的能量以电磁辐射的形式释放，即发 光，这种光称为荧光。 由光激发所引起的荧光，为光致荧光 ------荧光免疫技术 由化学反应所引起的荧光，为化学荧光 ------化学发光技术
释放能量 激发态电子一。 一可见光（荧光） (400~800nm) 三紫外光 (250~400nm) 一激发光 -电子 紫外光激发荧光物质放射荧光示意图
2.荧光素的荧光特性： (1)停止供能，荧光现象随即终止 (2)对光的吸收和荧光的发射具高度选择性 入射光波长<发射光波长 (3)荧光效率： 发射荧光的光量子数 荧光效率= 吸收光的光量子数 (④)荧光猝灭现象：荧光素的辐射能力减弱
2.荧光素的荧光特性： ⑴ 停止供能，荧光现象随即终止 ⑵ 对光的吸收和荧光的发射具高度选择性 入射光波长<发射光波长 ⑶ 荧光效率： 发射荧光的光量子数 荧光效率= 吸收光的光量子数 ⑷ 荧光猝灭现象：荧光素的辐射能力减弱
(5)影响因素 ·PH:光谱、强度改变 ·温度：20℃ 。其他
(5)影响因素 • PH：光谱、强度改变 • 温度：20℃ • 其他
3.常见荧光素 (1)FITC (2)RB200 (3)TRITC (4)镧系：Eu、Tb (5)PE (6)其它
3.常见荧光素： ⑴ FITC ⑵ RB200 ⑶ TRITC ⑷ 镧系：Eu、Tb ⑸ PE ⑹ 其它
常见荧光素的特性： (1)FTC:黄色结晶粉末，吸收光：490~495nm, 发射光：520~530nm,明亮的黄绿色荧光。 (2)RB200:橘红色粉末，吸收光570nm,发射光 595~600nm,橘红色荧光。 (3)TRITC: 紫红色粉末，吸收550nm,发射光 620nm,橙红色荧光。 (4)镧系：Eu、Tb (5)PE:吸收光490~560nm,发射光595nm,红色 荧光。 (6)其它：酶作用后产生荧光物质
常见荧光素的特性： ⑴ FITC：黄色结晶粉末，吸收光：490~495nm， 发射光：520~530nm，明亮的黄绿色荧光。 ⑵ RB200： 橘红色粉末, 吸收光570nm，发射光 595~600nm，橘红色荧光。 ⑶ TRITC： 紫红色粉末，吸收550nm，发射光 620nm，橙红色荧光。 ⑷ 镧系：Eu、Tb ⑸ PE：吸收光490~560nm，发射光595nm，红色 荧光。 ⑹ 其它：酶作用后产生荧光物质