第十七章补体参与的反 应及补体测定 温州医学院检验医学院 临床免疫学检验教研室 陈占国
第十七章 补体参与的反 应及补体测定 温州医学院检验医学院 临床免疫学检验教研室 陈占国
第一节概述 补体： 具酶样活性、不耐热的糖蛋白 其存在与抗原性异物的刺激无关 在正常人血清中含量相对稳定 某些疾病时，含量及其活性可发生改变
第一节 概 述 补体： 具酶样活性、不耐热的糖蛋白 其存在与抗原性异物的刺激无关 在正常人血清中含量相对稳定 某些疾病时，含量及其活性可发生改变
补体成分的含量与理化特性 分类 根据补体系统的生物学功能，可将其分为： 补体固有成分、补体调节蛋白、补体受体 (complement receptor,.CR)三大部分
分 类 一、 补体成分的含量与理化特性 根据补体系统的生物学功能，可将其分为： 补体固有成分、补体调节蛋白、补体受体 (complement receptor, CR)三大部分
补体理化性质 >由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细 胞产生均为多糖蛋白，大多数电泳迁移率属α、y球 蛋白 >含量约占血清球蛋白总量的10%，其中C3含量最高、 D因子含量最低 >固有成份间的分子量差异较大，其中C1q最大、D因 子最小。 >对热不稳定，56°C、30min即被灭活，0~10C条 件下活性只能保持3~4d。 >多种理化因素如射线、机械振荡、酒精、胆汁和某 些添加剂等均可破坏补体
补体理化性质 ➢ 由肝细胞、巨噬细胞以及肠粘膜上皮细胞等多种细 胞产生 均为多糖蛋白，大多数电泳迁移率属α、γ球 蛋白 ➢ 含量约占血清球蛋白总量的10%，其中C3含量最高、 D因子含量最低 ➢ 固有成份间的分子量差异较大，其中C1q最大、D因 子最小。 ➢ 对热不稳定，56°C、30min即被灭活，0～10 °C条 件下活性只能保持3～4d。 ➢ 多种理化因素如射线、机械振荡、酒精、胆汁和某 些添加剂等均可破坏补体
盐续 分子量 皮法 血清含量参考值 (μgml) 微芬 分子量 皮漆 血清 C1q 390 Y2 70 C9 79 a 240 C1r 95 35 B 95 B 210-240 C1s 85 a 35 25 C2 117 B1 20-30 P 220 Y2 25 C3 190 B1 1300 C1INH 150 180 C4 180 B2 430-600 C4bp 1100 250 C5 190 B2 75 因子 93 B 50 C6 128 B2 60 H因子 159 B 400-480 C7 120 B2 55 S因子 88 500 C8 163 y1 200
补体 成分 分子量 电泳 区带 血清含量参考值 （μg/ml） 补体 成分 分子量 电泳 区带 血清含量参考值 （μg/ml） C1q 390 γ2 70 C9 79 α 240 C1r 95 β 35 B 95 β 210~240 C1s 85 α 35 D 25 α 2 C2 117 β1 20~30 P 220 γ2 25 C3 190 β1 1300 C1INH 150 α 180 C4 180 β2 430~600 C4bp 1100 250 C5 190 β2 75 I因子 93 β 50 C6 128 β2 60 H因子 159 β 400~480 C7 120 β2 55 S因子 88 α 500 C8 163 γ1 200
二、 补体的活化途径 抗原抗体复合物 微生物表面 微生物表面 经典途径 MBP途径 旁路途径 Cla MBL C3 CIr-C1S MASP1-MASP2 B CA C4 C2 C2 调理片段 C3 趋化片段 C3b,iC3b C5 C3a,C4a,C5a C6 C7 C3d C9 免疫应答刺激片段 MAC
二、补体的活化途径
第二节补体总活性测定 >补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指示 以50%溶血为判断终点，称为CH50 >补体活化途径不同，应用不同的激活物可活化不同的 补体途径 >基于经典途径的CP-CH50(临床常规项目) 应用于C3旁路检测的AP-CH50(尚未列入检验常规) MBL途径活性测定的可靠方法暂未建立
第二节 补体总活性测定 ➢补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指示， 以50%溶血为判断终点，称为CH50 ➢ 补体活化途径不同，应用不同的激活物可活化不同的 补体途径 ➢ 基于经典途径的CP-CH50（临床常规项目） 应用于C3旁路检测的AP-CH50（尚未列入检验常规） MBL途径活性测定的可靠方法暂未建立
(一)CH50测定法的原理 应用绵羊红细胞(sheep red blood cell,,SRBC)和其 相应的抗体（溶血素），作为能诱导补体活化经典途径 的指示物和激活剂。补体能使溶血素特异性结合的绵羊 红细胞溶解，当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时，溶血 程度与补体含量和活性相关。将新鲜待检血清作不同稀 释后，加入反应体系，测定溶血程度，以50%溶血时的 最小血清用量作为判定终点，可测知补体总溶血活性
（一）CH50测定法的原理 应用绵羊红细胞（sheep red blood cell, SRBC）和其 相应的抗体（溶血素），作为能诱导补体活化经典途径 的指示物和激活剂。补体能使溶血素特异性结合的绵羊 红细胞溶解，当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时，溶血 程度与补体含量和活性相关。将新鲜待检血清作不同稀 释后，加入反应体系，测定溶血程度，以50%溶血时的 最小血清用量作为判定终点，可测知补体总溶血活性
>在适当、稳定的反应 系统中，溶血反应与补 体的剂量依赖关系呈现 100% “S”形曲线 90% 80% >在轻微溶血和接近完 全溶血时，补体量的变 溶血百 60% 化对溶血程度的影响不 大，即溶血对补体量的 30% 依赖不敏感。但在30 20% 10% %~70%溶血时，补体 含量仅出现较小的变动 溶血程度也会发生较大 溶血程度与补体含量的关系 的改变
溶血程度与补体含量的关系 ➢ 在适当、稳定的反应 系统中，溶血反应与补 体的剂量依赖关系呈现 “S”形曲线 ➢ 在轻微溶血和接近完 全溶血时，补体量的变 化对溶血程度的影响不 大，即溶血对补体量的 依赖不敏感。但在30 ％～70%溶血时，补体 含量仅出现较小的变动， 溶血程度也会发生较大 的改变
(二)CH50测定方法 1.红细胞浓度的调整 绵羊红细胞(SRBC)采自绵羊颈静脉，制备脱纤维 羊血或用阿氏(Alsever)血液保存液制成抗凝血，4℃ 保存备用。使用前，调制成2%~5%SRBC悬液。为使 红细胞浓度标准化，可吸取少量红细胞悬液，加入20~ 30倍的稀释液，在542nm波长处测定吸光值以调整红细 胞浓度
（二）CH50测定方法 1.红细胞浓度的调整 绵羊红细胞（SRBC）采自绵羊颈静脉，制备脱纤维 羊血或用阿氏（Alsever）血液保存液制成抗凝血，4℃ 保存备用。使用前，调制成2%～5% SRBC悬液。为使 红细胞浓度标准化，可吸取少量红细胞悬液，加入20～ 30倍的稀释液，在542nm波长处测定吸光值以调整红细 胞浓度