实验内容 1、血清免疫球蛋白的纯化 2、补体结合试验 3、溶菌酶测定 4、CH50测定 5、凝集试验（四项) 6、单扩，免疫电泳 7、 双向扩散，对流免疫电泳 8、免疫浊度测定 9、实验考试
1、血清免疫球蛋白的纯化 2、补体结合试验 3、溶菌酶测定 4、CH50测定 5、凝集试验（四项） 6、单扩，免疫电泳 7、双向扩散，对流免疫电泳 8、免疫浊度测定 9、实验考试 实验内容
实验课要求 预习 。 不迟到、早退、不旷课、有事请假 。 穿白大褂、注意自我防护 不能喧哗，不做与实验无关的事 不要急于开始做实验 不要急于写实验报告 实验完成后，自己把桌面收拾干净 。 值日要求：擦桌子，拖地、擦黑板、倒垃圾、关灯和门窗 (劳动委员负责安排和监督) 认真完成实验报告
实验课要求 • 预习 • 不迟到、早退、不旷课、有事请假 • 穿白大褂、注意自我防护 • 不能喧哗，不做与实验无关的事 • 不要急于开始做实验 • 不要急于写实验报告 • 实验完成后，自己把桌面收拾干净 • 值日要求：擦桌子，拖地、擦黑板、倒垃圾、关灯和门窗 （劳动委员负责安排和监督） • 认真完成实验报告
实验报告的要求 ·题目、原理、主要试剂与器材、步骤、结果、注意事项， (心得体会) ·班级、姓名、学号 ·由学习委员统一收齐，按学号从小到大顺序放好，在下一 周上课时交 ·自己写、书写整齐 ·订成一本或每次分开
实验报告的要求 • 题目、原理、主要试剂与器材、步骤、结果、注意事项、 （心得体会） • 班级、姓名、学号 • 由学习委员统一收齐，按学号从小到大顺序放好，在下一 周上课时交 • 自己写、书写整齐 • 订成一本或每次分开
血清免渡球蛋白的纯北 2009.3.26
血清免疫球蛋白的纯化 2009.3.26
实验原理-盐析 ·蛋白质在水中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团 与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电 荷的情况决定的。 ·当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的 亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化 膜减弱乃至消失；同时，中性盐加入蛋白质溶液后， 由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被 中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子 之间聚集而沉淀，这个过程叫做盐析
实验原理－盐析 • 蛋白质在水中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团 与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电 荷的情况决定的。 • 当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的 亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化 膜减弱乃至消失;同时，中性盐加入蛋白质溶液后， 由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被 中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子 之间聚集而沉淀,这个过程叫做盐析
实验原理-盐析 ·不同性质的蛋白质可通过加入不同浓度的中性盐 而分阶段从溶液中沉淀出来。 ·分离纯化1g最常用的中性盐是硫酸铵。 ·30~50%的硫酸铵可以沉淀1gG
实验原理－盐析 • 不同性质的蛋白质可通过加入不同浓度的中性盐 而分阶段从溶液中沉淀出来。 • 分离纯化Ig最常用的中性盐是硫酸铵。 • 30～50%的硫酸铵可以沉淀IgG
实验原理-分子筛层析 ·凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利 用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分 离物质的分子大小不同来进行分离。它的突出优 点是层析所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷， 吸附力弱，操作条件比较温和，可在相当广的温 度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成 分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质 有很好的分离效果
实验原理－分子筛层析 • 凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利 用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分 离物质的分子大小不同来进行分离。它的突出优 点是层析所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷， 吸附力弱，操作条件比较温和，可在相当广的温 度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成 分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质 有很好的分离效果
(1) (2) (3) (4) (5) 00 0 ⊙ G 00 000 00 凝 ● 00 颗 分 孔板 凝胶层析的原理
主要试剂和器材 ·抗血清 ·Sephadex G-25、饱和硫酸铵溶液、0.2mol/L PBS (pH7.0) ·层析柱、核酸蛋白检测仪、紫外分光光度计、铁 架台 ·一次性滴管、烧杯 注：6人/组；一次性的物品请适量取材，试验结束 时，请将多余的放回原处
主要试剂和器材 • 抗血清 • Sephadex G-25、饱和硫酸铵溶液、0.2mol/L PBS （pH7.0） • 层析柱、核酸蛋白检测仪、紫外分光光度计、铁 架台 • 一次性滴管、烧杯 注：6人/组；一次性的物品请适量取材，试验结束 时，请将多余的放回原处
实验步骤 ·取2ml抗血清于15ml离心管中，加入2 mIPBS。 ·室温下，边摇动离心管边滴加2l饱和硫酸铵溶 液。置室温15min,离心3500rpm×10min,弃 上清。 ·沉淀物用2 nIPBS重悬
实验步骤 • 取2ml抗血清于15ml离心管中，加入2mlPBS。 • 室温下，边摇动离心管边滴加2ml饱和硫酸铵溶 液。置室温15min，离心3500rpm×10min，弃 上清。 • 沉淀物用2mlPBS重悬