循环免疫复合物的检测
循环免疫复合物的检测
前言 ■免疫复合物指抗原与其相应的抗体结合形成的复 合物，沉积于机体某一局部免疫复合物称为局部 免疫复合物，游离于体液中的免疫复合物称为可 溶性免疫复合物，血液中的免疫复合物称为循环 免疫复合物(circulating immune complex, CIC)
前言 ◼ 免疫复合物指抗原与其相应的抗体结合形成的复 合物，沉积于机体某一局部免疫复合物称为局部 免疫复合物，游离于体液中的免疫复合物称为可 溶性免疫复合物，血液中的免疫复合物称为循环 免疫复合物（circulating immune complex， CIC）
■根据形成免疫复合物的Ag-Ab的已知或未知的将 CIC分为两大类： ·特异性免疫复合物：如HBsAg抗HBsAg,甲状 腺球蛋白抗甲状腺球蛋白形成的免疫复合物； 。非特异性免疫复合物
◼ 根据形成免疫复合物的Ag-Ab的已知或未知的将 CIC分为两大类： ⚫ 特异性免疫复合物：如HBsAg-抗HBsAg，甲状 腺球蛋白-抗甲状腺球蛋白形成的免疫复合物； ⚫ 非特异性免疫复合物
■循环免疫复合物的检测技术分为抗原特异性和非 特异性两类。 ■前者多用于科研；后者检测的是血清中CC的总 量，不考虑形成CC的抗原特异性
◼ 循环免疫复合物的检测技术分为抗原特异性和非 特异性两类。 ◼ 前者多用于科研；后者检测的是血清中CIC的总 量，不考虑形成CIC的抗原特异性
实验原理一PEG比浊法 ■PEG(聚乙二醇)是非离子型水溶性聚合物，有很强的亲 水性，可以破坏溶液中蛋白质表面的水化层，使蛋白质沉 淀，即使浓度很高也不会引起蛋白质变性。 ■不同浓度的PEG能选择性沉淀不同的蛋白质。用终浓度为 30~40g/L的PEG6000能选择性沉淀CIC。 ■循环免疫复合物与聚乙二醇作用，以浊度变化表现出来， 可根据浊度的大小来反映免疫复合物的多少。浊度的大小 用分光光度计测定
实验原理－PEG比浊法 ◼ PEG（聚乙二醇）是非离子型水溶性聚合物，有很强的亲 水性，可以破坏溶液中蛋白质表面的水化层，使蛋白质沉 淀，即使浓度很高也不会引起蛋白质变性。 ◼ 不同浓度的PEG能选择性沉淀不同的蛋白质。用终浓度为 30～40g/L的PEG 6000能选择性沉淀CIC。 ◼ 循环免疫复合物与聚乙二醇作用，以浊度变化表现出来， 可根据浊度的大小来反映免疫复合物的多少。浊度的大小 用分光光度计测定
主要试剂与器材 ■待测血清（已1：3稀释) ■0.1 mol/L pH8.4硼酸缓冲液(BBS)、41g/L PEG溶液 ■分光光度计、0.5cm比色杯、试管
主要试剂与器材 ◼ 待测血清（已1：3稀释） ◼ 0.1mol/L pH8.4硼酸缓冲液（BBS）、41g/L PEG溶液 ◼ 分光光度计、0.5cm比色杯、试管
实验步骤 按照表格加样，此时PEG最终浓度为37.3gL。 加入物 测定管 对照管 1:3稀释血清(ml) 0.2 0.2 41 gLPEG溶液(ml) 2.0 pH8.4 BBS (ml) 2.0
实验步骤 ◼ 按照表格加样，此时PEG最终浓度为37.3g/L
■加样后，充分混匀，置4℃1h,置室温10min。 ■用分光光度计在波长495nm下测两管的A值，以 BBS调零
◼ 加样后，充分混匀，置4℃ 1h，置室温10min。 ◼ 用分光光度计在波长495nm下测两管的A值，以 BBS调零
结果记录和判断 ■记录对照管和测定管的A值 ■待测血清A值=测定管A值-对照管A值 ■正常血清CIC的A值为0.043±0.02(X±SD)。 ■大于正常人A值两个标准差或更高者为CIC阳性
结果记录和判断 ◼ 记录对照管和测定管的A值 ◼ 待测血清A值＝测定管A值－对照管A值 ◼ 正常血清CIC的A值为0.043±0.02（X±SD）。 ◼ 大于正常人A值两个标准差或更高者为CIC阳性
注意事项 ■不同浓度的PEG可沉淀不同分子量的免疫复合物。 20 g/L PEG可沉淀较大的CIC,40 g/L PEG则沉 淀较小的CIC,但浓度大于50 g/L PEG选择性沉 淀C1C的特性即消失，可能导致假阳性。 ■温度变化对结果影响较大。4C时C1C沉淀最佳， 室温每升高1℃，A值下降0.2
注意事项 ◼ 不同浓度的PEG可沉淀不同分子量的免疫复合物。 20g/L PEG 可沉淀较大的CIC，40g/L PEG 则沉 淀较小的CIC，但浓度大于50g/L PEG选择性沉 淀CIC的特性即消失，可能导致假阳性。 ◼ 温度变化对结果影响较大。4℃时CIC沉淀最佳， 室温每升高1℃，A值下降0.2