双向免疫扩散
双向免疫扩散
实验原理 ·指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相 互扩散，彼此相遇，在比例适当处形成沉 淀线。根据沉淀线的有无、形态和位置对 抗原或抗体进行定性分析。 ·本次实验利用此原理进行抗体效价的测定
• 指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相 互扩散，彼此相遇，在比例适当处形成沉 淀线。根据沉淀线的有无、形态和位置对 抗原或抗体进行定性分析。 • 本次实验利用此原理进行抗体效价的测定。 实验原理
主要的试剂和器材 ·抗体：抗IgG ·抗原：IgG ·巴比妥缓冲液 ·1.5%琼脂（巴比妥缓冲液配制) ·载玻片、打孔器、微量进样器 ·37℃水浴箱
• 抗体：抗IgG • 抗原：IgG • 巴比妥缓冲液 • 1.5％琼脂（巴比妥缓冲液配制） • 载玻片、打孔器、微量进样器 • 37℃水浴箱 主要的试剂和器材
实验步骤 制板用移液管吸取4ml的琼脂，将其放到 水平放置的载玻片上，待冷凝。 。 打孔打梅花孔，各孔间的距离为0.7- 0.8cm
• 制板 用移液管吸取4ml的琼脂，将其放到 水平放置的载玻片上，待冷凝。 • 打孔 打梅花孔，各孔间的距离为0.7- 0.8cm。 实验步骤 1
倍比稀释抗体（见下表) 加样用微量进样器将各孔加各样品10u； 中央孔加抗原，周围6孔分别加不同稀释 度的抗体。 将玻片放在湿盒中，37℃18-24h。 2 3 4 5 6 巴比妥缓冲液 25 25 25 25 25 抗lgG 50 25 25 25 >25 25
• 倍比稀释抗体 （见下表） • 加样 用微量进样器将各孔加各样品10ul； 中央孔加抗原，周围6孔分别加不同稀释 度的抗体。 • 将玻片放在湿盒中，37℃ 18-24h。 1 2 3 4 5 6 巴比妥缓冲液 25 25 25 25 25 抗IgG 50 25 25 25 25 25
实验现象 在两孔间会看到白色的沉淀线
• 在两孔间会看到白色的沉淀线。 实验现象
结果判断的方法 ·将出现白色沉淀线的最高抗体稀释度作为 该抗体的效价。 例：该血清中抗1gG的效价为1：4
• 将出现白色沉淀线的最高抗体稀释度作为 该抗体的效价。 例：该血清中抗IgG的效价为1：4。 结果判断的方法
实验结果的记录和判断 ·画出实验结果图并判断效价
• 画出实验结果图并判断效价。 实验结果的记录和判断
注意事项 玻片要清洁，边缘无破损。 ·浇制琼脂板时要均匀、无气泡。 ·孔要打得圆整光滑，边缘不要破裂。 ·加样时应尽量避免气泡或加到孔外，以保 证结果的准确性。 注意微量进样器每加一个样品之后，就得 清洗
• 玻片要清洁，边缘无破损。 • 浇制琼脂板时要均匀、无气泡。 • 孔要打得圆整光滑，边缘不要破裂。 • 加样时应尽量避免气泡或加到孔外，以保 证结果的准确性。 • 注意微量进样器每加一个样品之后，就得 清洗。 注意事项
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