L-2定量测定 -ELISA法
IL-2定量测定 --ELISA法
实验原理 ◆双抗体夹心法（一步法） ◆在一定范围内，显色深浅与引L-2的含量成正相关
实验原理 ◆ 双抗体夹心法（一步法） ◆ 在一定范围内，显色深浅与IL-2的含量成正相关
主要试剂和器材 ◆待测标本1和2、生理盐水（NS) ◆ELISA试剂盒： IL-2标准品(2.0、4.0、10.0、20.0、 40.0ng/ml)、包被孔、酶结合物、底物、 显色剂、终止液、洗液
主要试剂和器材 ◆ 待测标本1和2 、生理盐水（NS） ◆ ELISA试剂盒： IL-2标准品（2.0、4.0、10.0、20.0、 40.0ng/ml）、包被孔、酶结合物、底物、 显色剂、终止液、洗液
实验步骤 +加样：将微量反应板编号，按下表加样 孔号 1 2345 67 8 9 10 11 加入物 (ng/ml) 空白 生理 盐水 24 102040待测1待测1待测2待测2 加入量 (u1) 无 5050505050505050 5050 加酶结合物：除空白对照外，每孔50u,轻轻摇动几下， 37℃×30min。 洗涤：弃孔中液体，各孔加满洗涤液静置20s,弃之，反复5次，拍干。 显色：加入底物50ul,随即加入显色剂50ul,轻轻摇动几下，室温反 应15min. X 加终止液：每孔加50ul。 比色：用酶标仪读取0D值，波长为450nm
加样：将微量反应板编号，按下表加样 加酶结合物：除空白对照外，每孔50ul，轻轻摇动几下， 37℃×30min。 洗涤：弃孔中液体，各孔加满洗涤液静置20s，弃之，反复5次，拍干。 显色：加入底物50ul，随即加入显色剂50ul，轻轻摇动几下，室温反 应15min。 加终止液：每孔加50ul。 比色：用酶标仪读取OD值，波长为450nm。 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 加入物 (ng/ml) 空白 生理 盐水 2 4 10 20 40 待测1 待测1 待测2 待测2 加入量 (ul) 无 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 实验步骤
实验结果 *结果记录：按下表记录结果 孔号 1 2 3456 7 8 9 10 11 加入物 (ng/m1) 空白盐水 生理 24102040待测1待测1待测2待测2 0D450 2 ? *绘制标准曲线：以IL-2标准品浓度为横坐标，OD450值为 纵坐标，绘制标准曲线。 *求出待测标本1和2中L-2的浓度
实验结果 结果记录：按下表记录结果 绘制标准曲线：以IL-2标准品浓度为横坐标，OD450值为 纵坐标，绘制标准曲线。 求出待测标本1和2中IL-2的浓度。 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 加入物 (ng/ml) 空白 生理 盐水 2 4 10 20 40 待测1 待测1 待测2 待测2 OD450 ？ ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
注意事项 ◆试剂盒从冰箱中取出后，室温平衡30min左右再开 启使用。 ◆加样时每一步要一个人完成，要加到微孔的底部， 加样量要准确。 ◆标准品从低到高的顺序加，加完之后切勿盖错盖子。 洗涤要严格按照要求，彻底洗涤，防止假阳性，但 不可冲洗过猛过急导致假阴性。 ◆严格控制反应时间和显色时间
注意事项 ◆ 试剂盒从冰箱中取出后，室温平衡30min左右再开 启使用 。 ◆ 加样时每一步要一个人完成，要加到微孔的底部， 加样量要准确。 ◆ 标准品从低到高的顺序加，加完之后切勿盖错盖子 。 ◆ 洗涤要严格按照要求，彻底洗涤，防止假阳性，但 不可冲洗过猛过急导致假阴性。 ◆ 严格控制反应时间和显色时间
应用与评价 ◆L-2的测定对机体的免疫功能有一定的监测作用。 ◆用试剂盒检测1L-2的优缺点 。优点 一特异性强，这是标记免疫技术的共同特点。 一使用简便，省时。 ~ 重复性好，影响因素少，实验结果稳定。 ·缺点 一测定的是蛋白含量而不是生物学活性。 - 检测的灵敏度不如生物学活性法
应用与评价 ◆ IL-2的测定对机体的免疫功能有一定的监测作用。 ◆ 用试剂盒检测IL-2的优缺点 ⚫ 优点 – 特异性强，这是标记免疫技术的共同特点。 – 使用简便，省时。 – 重复性好，影响因素少，实验结果稳定。 ⚫ 缺点 – 测定的是蛋白含量而不是生物学活性。 – 检测的灵敏度不如生物学活性法