第二十四章 免疫细胞的分离与检测 温州医学院检验医学院 临床免疫学检验教研室 林向阳
第二十四章 免疫细胞的分离与检测 温州医学院检验医学院 临床免疫学检验教研室 林向阳
内容提要 ■免疫细胞的分离及纯化 ■淋巴细胞的数量检测 ■淋巴细胞的功能检测 ■吞噬细胞的功能检测
内容提要 ◼ 免疫细胞的分离及纯化 ◼ 淋巴细胞的数量检测 ◼ 淋巴细胞的功能检测 ◼ 吞噬细胞的功能检测
第一节免疫细胞的分离与纯化
第一节 免疫细胞的分离与纯化
概述 1免疫细胞即参与免疫应答的细胞 免疫活性细胞：淋巴细胞 免疫细胞 辅佐作用细胞：单核-巨噬细胞等 参与细胞：N、E、B等
1.免疫细胞即参与免疫应答的细胞 免疫活性细胞：淋巴细胞 免疫细胞 辅佐作用细胞：单核-巨噬细胞等 参与细胞：N、E、B等 一、概述
2.分离的方法 自然沉降 细胞的特性高分子聚合物 密度梯度离心技术 细胞表面标志：流式细胞仪 免疫磁性微珠分离法
2. 分离的方法: 自然沉降 细胞的特性：高分子聚合物 密度梯度离心技术 细胞表面标志：流式细胞仪 免疫磁性微珠分离法
白细胞的分离 方法：自然沉降法 聚合物加速沉淀法 评价：以上方法分离到白细胞含有较多粒细 胞、单个核细胞和血小板，而淋巴细 胞纯度约为60%70%
二.白细胞的分离 方法：自然沉降法 聚合物加速沉淀法 评价：以上方法分离到白细胞含有较多粒细 胞、单个核细胞和血小板，而淋巴细 胞纯度约为60％～70%
三、外周血单个核细胞的分离 单个核细胞：林巴细胞+单核细胞 红细胞、粒细胞1.090 密度差异单个核细胞 1.075-1.090 血小板 1.030-1.035 ■分离液的要求：等渗、密度1.075-1.092 ·常用的分层液有Ficoll和Percoll两种
三、外周血单个核细胞的分离 ◼ 单个核细胞: 淋巴细胞+单核细胞 红细胞、粒细胞 1.090 ◼ 密度差异 单个核细胞 1.075-1.090 血小板 1.030-1.035 ◼ 分离液的要求：等渗、密度 1.075-1.092 ◼ 常用的分层液有Ficoll和Percoll两种
(一)聚蔗糖-泛影葡胺分层液 密度梯度离心法（Ficolls分层液法)
(一)聚蔗糖－泛影葡胺分层液 密度梯度离心法（Ficoll分层液法）
原理 ■} 聚蔗糖-泛影葡胺分层液 (Ficoll-一Hupaque:分层液) 聚蔗糖（商品名F引col川）：高密度、低渗透压、无毒性 常用浓度60g/L,密度为1.020 泛影葡胺(urografin商品名 Hupaque/Isopaque ) 增加密度 ■分离人单个核细胞：1.077±0.001
原理 ◼ 聚蔗糖－泛影葡胺分层液 （ Ficoll－Hupaque分层液） 聚蔗糖(商品名Ficoll）:高密度、低渗透压、无毒性 常用浓度60g／L,密度为1.020 泛 影 葡 胺 （ urografin 商 品 名 Hupaque/Isopaque）： 增加密度 ◼ 分离人单个核细胞：1.077±0.001
操作步骤 稀释 加样 稀释的血液 ■离心 稀释的血浆 水平离心 ■吸取 -单个核细胞 分离液 -粒细胞 洗涤 一红细胞 计数 图24-1 Ficol1分层液分离单个核细胞示意图
操作步骤 ◼稀释 ◼加样 ◼离心 ◼吸取 ◼洗涤 ◼计数