免疫浊度测定
免疫浊度测定
实验原理1 免疫浊度测定属于液相沉淀试验，指可溶性抗原与相应抗 体在含一定浓度电解质的液体介质中发生特异性结合，形 成不溶性的免疫复合物，使反应液出现浊度。 当反应液中保持抗体过量时，形成的免疫复合物随抗原量 增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的抗原 标准品对照，即可计算出标本中待测抗原的含量。 免疫浊度测定法按照测量方式的不同可以分为两种，即透 射免疫比浊法和散射免疫比浊法。 本实验采用透射免疫比浊法
• 免疫浊度测定属于液相沉淀试验，指可溶性抗原与相应抗 体在含一定浓度电解质的液体介质中发生特异性结合，形 成不溶性的免疫复合物，使反应液出现浊度。 • 当反应液中保持抗体过量时，形成的免疫复合物随抗原量 增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的抗原 标准品对照，即可计算出标本中待测抗原的含量。 • 免疫浊度测定法按照测量方式的不同可以分为两种，即透 射免疫比浊法和散射免疫比浊法。 • 本实验采用透射免疫比浊法。 实验原理1
Ag=Ab-网格 ③⊙ ③C⑧ A -Ab-(A-ALABAb- ③b⑤ 沉淀物形成录 抗体过剩带 等价邪 抗原过剩节 抗体量佰定，抗原量递增 沉淀反应中沉淀量与抗原抗体的比例关系
沉淀反应中沉淀量与抗原抗体的比例关系
混浊样品 光源 检测器A(透射浊度法) 检测器 &(散射浊度法) 透射浊度法和散射浊度法的光路图
实验原理2
实验原理2 当抗原抗体相遇后立即结合成小的免疫复合物(19S)。作为 快速比浊测定，这种速度太慢，加入促聚剂（或增浊剂）可 加速大的免疫复合物形成，并且增加反应浊度。目前促聚剂 多用聚乙二醇(PEG,MW6000~8000),浓度约为4%。 。 PEG是非离子型水溶性聚合物，有很强的亲水性，可以破坏 溶液中蛋白质周围的电子云和水化层，促进特异性的抗原和 抗体分子靠近并结合形成大分子复合物。该物质即使浓度很 高也不会引起蛋白质变性
• 当抗原抗体相遇后立即结合成小的免疫复合物（＜19S）， 数分钟到数小时才形成可见的免疫复合物（＞19S）。作为 快速比浊测定，这种速度太慢，加入促聚剂（或增浊剂）可 加速大的免疫复合物形成，并且增加反应浊度。目前促聚剂 多用聚乙二醇（PEG，MW6000～8000），浓度约为4％。 • PEG是非离子型水溶性聚合物，有很强的亲水性，可以破坏 溶液中蛋白质周围的电子云和水化层，促进特异性的抗原和 抗体分子靠近并结合形成大分子复合物。该物质即使浓度很 高也不会引起蛋白质变性。 实验原理2
主要试剂与器材 待测血清（已经用生理盐水1：50倍稀释) 抗人IgG血清（已经用4.3%PEG1:20稀释，用 之前要充分混匀) IgG标准（原浓度1.143mg/ml) 生理盐水 加样枪、一次性枪头 ● 分光光度计、37℃水浴箱 注：2人/组；一次性的物品请适量取材，实 验结束时，多余的请放回原处
• 待测血清（已经用生理盐水1:50倍稀释） • 抗人IgG血清（已经用4.3％PEG1:20稀释，用 之前要充分混匀） • IgG标准（原浓度1.143mg/ml） • 生理盐水 • 加样枪、一次性枪头 • 分光光度计、37℃水浴箱 主要试剂与器材 注：2人/组；一次性的物品请适量取材，实 验结束时，多余的请放回原处
实验步骤 取6只试管分别编号1-6 ·IgG标准稀释（加样单位μu) 试管号 1 2 3 4 5 生理盐水 257257 25725 弃去25 LgG标准 0 J35 待测血清 25 每管中加入1.5ml抗人IgG（用4.3%PEG已经1：20稀 释)，充分混匀，37℃水浴30min。 。 各管混匀后用分光光度计测吸光度值（入=492nm,用 4.3%PEG稀释的抗人IgG调零)
• 取6只试管分别编号1-6 • IgG标准稀释（加样单位μι） • 每管中加入1.5ml抗人IgG （用4.3％PEG已经1：20稀 释） ，充分混匀， 37℃ 水浴30min。 • 各管混匀后用分光光度计测吸光度值（λ＝492nm，用 4.3％PEG稀释的抗人IgG调零）。 实验步骤
实验结果 ·记录各管的吸光度值。 用1gG浓度为横坐标，相应吸光度值为纵坐标， 制作标准曲线，求出待测血清中的1gG含量。 试管号 1 5 IgG浓度(g/1)1.143 吸光度值
• 记录各管的吸光度值。 • 用IgG浓度为横坐标，相应吸光度值为纵坐标， 制作标准曲线，求出待测血清中的IgG含量。 实验结果
注意事项 ·测吸光度前，要将试管中的液体充分混匀。 ·抗人IgG血清要求效价高（双扩效价1：32）而且 特异性强。 ·标准曲线必须与待检样品同时制备，不可一次做 成，反复使用
• 测吸光度前，要将试管中的液体充分混匀 。 • 抗人IgG血清要求效价高（双扩效价1：32）而且 特异性强 。 • 标准曲线必须与待检样品同时制备，不可一次做 成，反复使用。 注意事项
应用与评价 本法是测定IgG的一种免疫比浊法，由于加入了 促聚剂聚乙二醇，提高了复合物的形成速度和检 测敏感性，除应用于血清gG测定之外，还可以 用于其它体液如脑脊液中IgG含量的测定
• 本法是测定IgG的一种免疫比浊法，由于加入了 促聚剂聚乙二醇，提高了复合物的形成速度和检 测敏感性，除应用于血清IgG测定之外，还可以 用于其它体液如脑脊液中IgG含量的测定。 应用与评价