抗核抗体的检测 (间接免疫荧光法)
抗核抗体的检测 （间接免疫荧光法）
抗核抗体 (antinuclear antibody,ANA) ·针对各种细胞核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。 ·ANA的性质主要是IgG类的抗体 ·ANA无器官特异性和种属特异性，可以与不同来源的细胞核 反应。 ·ANA阳性的自身免疫病很多，最多见于SLE(≥95%)
抗核抗体 （antinuclear antibody，ANA） • 针对各种细胞核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。 • ANA的性质主要是IgG类的抗体 • ANA无器官特异性和种属特异性，可以与不同来源的细胞核 反应。 • ANA阳性的自身免疫病很多，最多见于SLE（≥95%）
ANA检测方法 ·间接免疫荧光法(IIF)一一初筛 细胞核基质：HEP-2细胞、小（大）鼠肝切 片或印片、猴肝冷冻组织 ·区分ANA的靶抗原：ELISA、斑点-ELISA 法和免疫印迹法
ANA检测方法 • 间接免疫荧光法（IIF)－－初筛 细胞核基质：HEP-2细胞、小(大)鼠肝切 片或印片、猴肝冷冻组织 • 区分ANA的靶抗原：ELISA、斑点-ELISA 法和免疫印迹法
实验原理：间接免疫荧光法 下ITG )打C标记的抗人抗体 FITC 人特异性抗体 载片 抗原
抗原 人特异性抗体 FITC标记的抗人抗体 FITC FITC 载片 实验原理：间接免疫荧光法
主要的试剂和器材 ·生物载片：有3个反应区，每个反应区均有两种生物薄 片：HEP-2细胞和大鼠肝 ●荧光抗体：FITC标记的羊抗人IgG ●阳性对照 ●阴性对照 ●PBS-吐温缓冲液 ●封片介质：甘油 ●盖玻片
主要的试剂和器材 ⚫ 生物载片：有3个反应区，每个反应区均有两种生物薄 片：HEP-2细胞和大鼠肝 ⚫ 荧光抗体： FITC标记的羊抗人IgG ⚫ 阳性对照 ⚫ 阴性对照 ⚫ PBS-吐温缓冲液 ⚫ 封片介质：甘油 ⚫ 盖玻片
实验步骤：滴定平板M技术 载片 滴定平板技术 生协薄片 加样板 加样每一反应丞25山 MV 稀释后的标本 色色色6色 Oの∽ 温育：30nin ☐☐ 冲洗：流水充1s, PBS- 小杯中浸5mn Tween 加样：每一反应丞20ul VVV 66666
实验步骤：滴定平板TM技术 滴定平板技术
滴定平板T技术 温育：30mm ☐ee☐eee☐ 冲洗：流水充1s, PBS. 小杯中浸5min Tween 封片：每一反丞10ul 甘油PBS 00000 盖玻片 结果判断：荧光湿微镜下观察
滴定平板TM技术 EUROIMMUN
荧光显微镜 目镜 目镜 阻拦滤色器 阻拦滤色器 物镜 标本 激发滤色器 聚光镜 分光镜 激发滤色器 光源 简单折光镜 物镜（聚光镜） 标本 b 透射荧光显微镜光路 落射荧光显微镜光路
透射荧光显微镜光路 落射荧光显微镜光路 荧光显微镜
实验现象： ANA荧光核型 均质型 核仁型 记录各反 应区不同 生物薄片 上看到的 荧光核型 颗粒型 核膜型 ● Ae
均质型 颗粒型 核膜型 核仁型 实验现象： ANA荧光核型 记录各反 应区不同 生物薄片 上看到的 荧光核型
实验结果 ·如果在生物薄片上看到特异性荧光核 型，则判断该患者血清中抗核抗体阳 性
实验结果 • 如果在生物薄片上看到特异性荧光核 型，则判断该患者血清中抗核抗体阳 性