对流免疫扩散
对流免疫扩散
前言 ·一种将双向免疫扩散与电泳相结合的定向 加速的免疫扩散技术。 ·优点：1)加快了沉淀反应的速度；2)提高 了检测的灵敏度，比双向免疫扩散法高8~ 16倍
• 一种将双向免疫扩散与电泳相结合的定向 加速的免疫扩散技术。 • 优点：1)加快了沉淀反应的速度；2)提高 了检测的灵敏度，比双向免疫扩散法高8～ 16倍。 前言
实验原理 在pH8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白因等电点高，带微弱 的负电荷，且分子量较大，因此电泳力小，小于电渗力， 泳向负极；而一般抗原蛋白常带较强的负电荷，且分子较 小，电泳力大，泳向正极电泳。 ·将抗原放负极侧孔，抗体放正极侧孔，抗原抗体相对泳动， 在两孔间相遇，比例合适时形成肉眼可见的沉淀线。 ·抗原浓度越高，沉淀线越靠近抗体孔，甚至超越抗体孔
• 在pH8.6的琼脂凝胶中，抗体球蛋白因等电点高，带微弱 的负电荷，且分子量较大，因此电泳力小，小于电渗力， 泳向负极；而一般抗原蛋白常带较强的负电荷，且分子较 小，电泳力大，泳向正极电泳。 • 将抗原放负极侧孔，抗体放正极侧孔，抗原抗体相对泳动， 在两孔间相遇，比例合适时形成肉眼可见的沉淀线。 • 抗原浓度越高，沉淀线越靠近抗体孔，甚至超越抗体孔。 实验原理
主要的试剂和器材 抗原：AFP ·待测抗体：抗AFP? ·巴比妥缓冲液 ·1.5%琼脂（巴比妥缓冲液配制) 载玻片、打孔器、微量进样器 ·37℃水浴箱
• 抗原：AFP • 待测抗体：抗AFP？ • 巴比妥缓冲液 • 1.5％琼脂（巴比妥缓冲液配制） • 载玻片、打孔器、微量进样器 • 37℃水浴箱 主要的试剂和器材
实验步骤 浇板用10ml的移液管取4ml1.5%琼脂 巴比妥缓冲液，浇于洁净的载玻片上，待 其冷凝。 ·打孔用打孔器打孔，如图。孔间距 10mm。挖取孔中的琼脂。 中央偏左
• 浇板 用10ml的移液管取4ml 1.5％琼脂 巴比妥缓冲液，浇于洁净的载玻片上，待 其冷凝。 • 打孔 用打孔器打孔，如图。孔间距 10mm。挖取孔中的琼脂。 实验步骤 中央偏左
·加样（如图)每孔加样10μ。 ·电泳接通电源，调节电压80V,1h。 加抗原加抗体
• 加样 （如图）每孔加样10μι。 • 电泳 接通电源，调节电压80V，1h。 加抗原 加抗体
实验现象 ·抗原与抗体两孔之间形成沉淀线。 ·画出实验现象
• 抗原与抗体两孔之间形成沉淀线。 • 画出实验现象。 实验现象
结果判断 ·如果有沉淀线，则说明待测标本中含有与 抗原相对应的抗体（即抗AFP)
• 如果有沉淀线，则说明待测标本中含有与 抗原相对应的抗体（即抗AFP）。 结果判断
注意事项 浇制琼脂板时，要均匀、平整、薄厚一致，无气泡，布满 整张玻片，孔要打得圆整光滑，边缘不要破裂。 打孔时，注意孔间距离为小于等于10mm,不能太大， 否则在本实验规定的电压和时间内电泳不会出现沉淀线， 需要加大电压和/或加长电泳时间。 。 搭桥时，应注意纱布与凝胶接触紧密，否则会是电流不均 匀，导致沉淀线歪斜、不均匀。 电泳完毕，应先断开电源，在取出电泳板，以防止积蓄电 压触电。 微量进样器每加一个样品之后，就得清洗
• 浇制琼脂板时，要均匀、平整、薄厚一致，无气泡，布满 整张玻片，孔要打得圆整光滑，边缘不要破裂。 • 打孔时，注意孔间距离为小于等于10mm，不能太大， 否则在本实验规定的电压和时间内电泳不会出现沉淀线， 需要加大电压和/或加长电泳时间。 • 搭桥时，应注意纱布与凝胶接触紧密，否则会是电流不均 匀，导致沉淀线歪斜、不均匀。 • 电泳完毕，应先断开电源，在取出电泳板，以防止积蓄电 压触电。 • 微量进样器每加一个样品之后，就得清洗。 注意事项