溶菌酶测定
溶菌酶测定
原理 溶菌酶是一种不耐热的小分子碱性蛋白质，广泛 存在于机体各种体液、外分泌液和吞噬细胞溶酶 体中。 ·它能与细菌牢固结合，并通过水解革兰阳性菌细 胞壁中的肽聚糖成分，而导致细菌溶解。革兰阴 性菌的细胞壁肽聚糖的外面还有脂多糖和脂蛋白 包裹，故在一般情况下对溶菌酶不敏感
原理 • 溶菌酶是一种不耐热的小分子碱性蛋白质，广泛 存在于机体各种体液、外分泌液和吞噬细胞溶酶 体中。 • 它能与细菌牢固结合，并通过水解革兰阳性菌细 胞壁中的肽聚糖成分，而导致细菌溶解。革兰阴 性菌的细胞壁肽聚糖的外面还有脂多糖和脂蛋白 包裹，故在一般情况下对溶菌酶不敏感
原理 ·体液或外分泌液中溶菌酶的含量，可以通过检测 其对指定敏感菌株的裂解作用来进行测定。 ·测定方法有平板打孔测定法和光学测定法两种。 ·本实验采用平板打孔测定法
原理 • 体液或外分泌液中溶菌酶的含量，可以通过检测 其对指定敏感菌株的裂解作用来进行测定。 • 测定方法有平板打孔测定法和光学测定法两种。 • 本实验采用平板打孔测定法
主要器材 ·菌液（溶壁微球菌） ·1.5%琼脂 ·溶菌酶标准品 ·待测血清 ·玻璃板 ·打孔器 ·微量进样器
主要器材 • 菌液（溶壁微球菌） • 1.5%琼脂 • 溶菌酶标准品 • 待测血清 • 玻璃板 • 打孔器 • 微量进样器
实验步骤 溶菌酶标准品的倍比稀释（溶菌酶原浓度 100mg/儿)） 编号 2 3 5 生理盐水(l) 0、 100入0 50八，50八50 溶菌酶标准(ul) 入450450 450 溶菌酶的稀释度 1:11:2 1:41:81:16
实验步骤 • 溶菌酶标准品的倍比稀释（溶菌酶原浓度 100mg/L） 生理盐水
取50-60℃已溶化的1.5%琼脂9.0ml,加到已配 制好的菌液1.0ml中，大拇指按住管口颠倒混匀 5次，倾注平板，待冷凝。 用打孔器的圆端在凝固的平板上打孔，孔间距 18-20mm,用打孔器的尖端挑去孔中的琼脂。 用微量进样器加样，每孔9ul。（待加物为待测 血清和5种浓度的溶菌酶标准液。) 置室温18-24h,观察结果
• 取50-60℃已溶化的1.5％琼脂9.0ml，加到已配 制好的菌液1.0ml中，大拇指按住管口颠倒混匀 5次，倾注平板，待冷凝。 • 用打孔器的圆端在凝固的平板上打孔，孔间距 18-20mm，用打孔器的尖端挑去孔中的琼脂。 • 用微量进样器加样，每孔9ul。（待加物为待测 血清和5种浓度的溶菌酶标准液。） • 置室温18-24h，观察结果
实验现象 ● 加了血清和溶菌酶标准液的孔周围由于溶壁微球 菌被裂解，可见圆形透亮区，即溶菌环。 ·溶菌环直径与样品中溶菌酶浓度的对数呈直线关 系
实验现象 • 加了血清和溶菌酶标准液的孔周围由于溶壁微球 菌被裂解，可见圆形透亮区，即溶菌环。 • 溶菌环直径与样品中溶菌酶浓度的对数呈直线关 系
实验结果 。 量出每一个溶菌环的直径，以溶菌酶浓度的对数 为横坐标，溶菌环直径为纵坐标，绘制标准曲线。 ·根据待测血清的溶菌环直径，从标准曲线上查出 其溶菌酶浓度。 编马 1 2 3 4 5 生理盐水() 50 50 50 50 裕菌标准(ul) 100 50 50 50 50 溶菌酶的稀释度 1:11:2 1:4 1:8 1:16 溶菌酶浓度 溶菌酶浓度对数值 溶菌环直径
实验结果 • 量出每一个溶菌环的直径，以溶菌酶浓度的对数 为横坐标，溶菌环直径为纵坐标，绘制标准曲线。 • 根据待测血清的溶菌环直径，从标准曲线上查出 其溶菌酶浓度。 生理盐水
注意事项 ·每做一批样品的同时要作标准品，最好能在一块 板上，便于比较。 ·打孔时，孔的边缘要圆，没有破损。 ·加样时，不要加到孔的外面
注意事项 • 每做一批样品的同时要作标准品，最好能在一块 板上，便于比较。 • 打孔时，孔的边缘要圆，没有破损。 • 加样时，不要加到孔的外面
应用与评价 溶菌酶是一种固有体液免疫分子，测定体液和外分泌液中 溶菌酶的含量及其动态变化，可以作为了解机体防御功能 的一个侧面指标。 ·正常人血清溶菌酶的含量5-10mg/儿。 。通常尿液中查不出溶菌酶(0-1mgL),若增加多见于肾小 管损伤或功能障碍、肾小球肾炎、肾移植术后的排异反应 和尿路感染等。 ·各种类型白血病，特别是单核细胞白血病时，血清溶菌酶 含量会明显升高
应用与评价 • 溶菌酶是一种固有体液免疫分子，测定体液和外分泌液中 溶菌酶的含量及其动态变化，可以作为了解机体防御功能 的一个侧面指标。 • 正常人血清溶菌酶的含量5-10mg/L。 • 通常尿液中查不出溶菌酶（0-1mg/L）,若增加多见于肾小 管损伤或功能障碍、肾小球肾炎、肾移植术后的排异反应 和尿路感染等。 • 各种类型白血病，特别是单核细胞白血病时，血清溶菌酶 含量会明显升高