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《生物化学》课程PPT教学课件:第7章 蛋白质的分离、纯化和表征

一、蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质分子的大小与形状 三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 四、蛋白质分离纯化的一般原则 五、蛋白质的分离纯化方法 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 表征:事物显露在外的征象
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第7章蛋白质的分离 纯化和表征 (solation, purification and characteristics of proteins) 蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质分子的大小与形状 蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 四、蛋白质分离纯化的一般原则 五、蛋白质的分离纯化方法 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 表征:事物显露在外的征象

第7章 蛋白质的分离、 纯化和表征 一、蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质分子的大小与形状 三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 四、蛋白质分离纯化的一般原则 五、蛋白质的分离纯化方法 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 (Isolation,purification and characteristics of proteins) 表征:事物显露在外的征象

、蛋白质的酸碱性质

一、蛋白质的酸碱性质

蛋白质的等电点和等离子点 对某一种蛋白质来说,在某一pH下,它所 带的正电荷与负电荷刚好相等,这个pH叫该蛋 白质的等电点,蛋白质的等电点受介质中盐浓 度的影响。在没有其它盐类干扰时,蛋白质质 子供体解离出的质子数与质子受体接受的质子 数相等时的p叫该蛋白质的等离子点。等离子 点是蛋白质的一个特征常数

蛋白质的等电点和等离子点 对某一种蛋白质来说,在某一pH下,它所 带的正电荷与负电荷刚好相等,这个pH叫该蛋 白质的等电点,蛋白质的等电点受介质中盐浓 度的影响。在没有其它盐类干扰时,蛋白质质 子供体解离出的质子数与质子受体接受的质子 数相等时的pH叫该蛋白质的等离子点。等离子 点是蛋白质的一个特征常数

二、蛩白质分子的 大小与形状

二、蛋白质分子的 大小与形状

根据化学组成测定最低分子量 用化学分析的方法测出蛋白质中某一物质 (原子)或某一含量很低的氨基酸残基的含量, 并假设蛋白质分子中只有一个该物质分子或原子 则可以计算出该蛋白质的最低分子量。例如,肌 红蛋白含铁量为0.335%,其最低分子量可按下式 算出: 蛋白质的分子量铁的原子量 100 0.335% 蛋白质的分子量=铁的原子量×100558×0600 0.335 0.335

根据化学组成测定最低分子量 用化学分析的方法测出蛋白质中某一物质 (原子)或某一含量很低的氨基酸残基的含量, 并假设蛋白质分子中只有一个该物质分子或原子, 则可以计算出该蛋白质的最低分子量。例如,肌 红蛋白含铁量为0.335%,其最低分子量可按下式 算出: 100 16700 0.335 55.8 100 0.335 =  =  = 铁的原子量 蛋白质的分子量 100 % 0.335% 蛋白质的分子量 铁的原子量 =

根据化学组成测定最低分子量 若蛋白质中含有n个被测原子,则分子量 等于最低分子量×n 若某蛋白质中某种氨基酸的含量特别低, 通过测定这种氨基酸的含量,也可用此法计 算出蛋白质的分子量

根据化学组成测定最低分子量 若蛋白质中含有n个被测原子,则分子量 等于最低分子量×n. 若某蛋白质中某种氨基酸的含量特别低, 通过测定这种氨基酸的含量,也可用此法计 算出蛋白质的分子量

渗 透 渗透压h 定 的 溶剂 蛋白质 溶液 半透膜

渗透压测定的示意图

Van't hot公式 在理想溶液中,溶液的渗透压与溶质浓度的 关系可用Van’ t Hoff公式表示: z÷团AY 8 RT =8 RT CRT Mr v VMr M 式中π是渗透压(N/m2,即Pa),V是溶液 的体积(m3),m是溶液中溶质的摩尔数,g是溶 质的质量(g),C是溶质的浓度(g/m3),T是 绝对温度(K),R是气体常数 (8314J/(Kmo),Mr为溶质的分子量或摩尔 质量(g/mol)

Van’t Hoff 公式 在理想溶液中,溶液的渗透压与溶质浓度的 关系可用Van’t Hoff公式表示: V RT M g V nRT r  = =  r Mr cRT M RT V g  =  = 式中π是渗透压(N/m2 ,即Pa),V是溶液 的体积(m3),n是溶液中溶质的摩尔数,g是溶 质的质量(g),C是溶质的浓度(g /m3),T是 绝 对 温 度 ( K ) , R 是 气 体 常 数 (8.314J/(K·mol)),Mr为溶质的分子量或摩尔 质量(g /mol)

渗透压法测定蛋白质 的分子量 蛋白质溶液与理想溶液有较大的偏差。在 溶质浓度不大时,它们的关系可用下式表示: 丌=R1/c 丌RT +Kc t rTRc M RT RT M 元 RTRc C 当c趋向于0时,RTKc趋向于0,但π/c不趋向于0, 而是趋向于一定值

渗透压法测定蛋白质 的分子量 蛋白质溶液与理想溶液有较大的偏差。在 溶质浓度不大时,它们的关系可用下式表示:       = + 2 Kc M c RT r  RTKc M RT c r = +  c RT M c r  0 lim → = RTKc c RT Mr − =  当c 趋向于0时,RTKc 趋向于0,但π/c 不趋向于0, 而是趋向于一定值

渗透压法测定蛋白质 的分子量 测定几个不同浓度下的渗透压,以π/c对c作 图,并外推至c为0时的π/c,再代入上式求得Mr。 为了避免溶液中其它无机离子的影响,在溶 解度许可的范围内,尽量采用等电点或接近于等 电点的缓冲液作膜内外的溶剂,并增加缓冲液中 无机盐的浓度

渗透压法测定蛋白质 的分子量 测定几个不同浓度下的渗透压,以π/c对c作 图,并外推至c为0时的π/c,再代入上式求得Mr。 为了避免溶液中其它无机离子的影响,在溶 解度许可的范围内,尽量采用等电点或接近于等 电点的缓冲液作膜内外的溶剂,并增加缓冲液中 无机盐的浓度

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