第7章蛋白质的分离 纯化和表征 (solation, purification and characteristics of proteins) 蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质分子的大小与形状 蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 四、蛋白质分离纯化的一般原则 五、蛋白质的分离纯化方法 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 表征:事物显露在外的征象
第7章 蛋白质的分离、 纯化和表征 一、蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质分子的大小与形状 三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 四、蛋白质分离纯化的一般原则 五、蛋白质的分离纯化方法 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 (Isolation,purification and characteristics of proteins) 表征：事物显露在外的征象
、蛋白质的酸碱性质
一、蛋白质的酸碱性质
蛋白质的等电点和等离子点 对某一种蛋白质来说,在某一pH下,它所 带的正电荷与负电荷刚好相等,这个pH叫该蛋 白质的等电点,蛋白质的等电点受介质中盐浓 度的影响。在没有其它盐类干扰时,蛋白质质 子供体解离出的质子数与质子受体接受的质子 数相等时的p叫该蛋白质的等离子点。等离子 点是蛋白质的一个特征常数
蛋白质的等电点和等离子点 对某一种蛋白质来说，在某一pH下，它所 带的正电荷与负电荷刚好相等，这个pH叫该蛋 白质的等电点，蛋白质的等电点受介质中盐浓 度的影响。在没有其它盐类干扰时，蛋白质质 子供体解离出的质子数与质子受体接受的质子 数相等时的pH叫该蛋白质的等离子点。等离子 点是蛋白质的一个特征常数
二、蛩白质分子的 大小与形状
二、蛋白质分子的 大小与形状
根据化学组成测定最低分子量 用化学分析的方法测出蛋白质中某一物质 (原子)或某一含量很低的氨基酸残基的含量, 并假设蛋白质分子中只有一个该物质分子或原子 则可以计算出该蛋白质的最低分子量。例如,肌 红蛋白含铁量为0.335%,其最低分子量可按下式 算出: 蛋白质的分子量铁的原子量 100 0.335% 蛋白质的分子量=铁的原子量×100558×0600 0.335 0.335
根据化学组成测定最低分子量 用化学分析的方法测出蛋白质中某一物质 （原子）或某一含量很低的氨基酸残基的含量， 并假设蛋白质分子中只有一个该物质分子或原子， 则可以计算出该蛋白质的最低分子量。例如，肌 红蛋白含铁量为0.335%，其最低分子量可按下式 算出： 100 16700 0.335 55.8 100 0.335 = = = 铁的原子量 蛋白质的分子量 100 % 0.335% 蛋白质的分子量 铁的原子量 =
根据化学组成测定最低分子量 若蛋白质中含有n个被测原子,则分子量 等于最低分子量×n 若某蛋白质中某种氨基酸的含量特别低, 通过测定这种氨基酸的含量,也可用此法计 算出蛋白质的分子量
根据化学组成测定最低分子量 若蛋白质中含有n个被测原子，则分子量 等于最低分子量×n. 若某蛋白质中某种氨基酸的含量特别低， 通过测定这种氨基酸的含量，也可用此法计 算出蛋白质的分子量
渗 透 渗透压h 定 的 溶剂 蛋白质 溶液 半透膜
渗透压测定的示意图
Van't hot公式 在理想溶液中,溶液的渗透压与溶质浓度的 关系可用Van’ t Hoff公式表示: z÷团AY 8 RT =8 RT CRT Mr v VMr M 式中π是渗透压(N/m2,即Pa),V是溶液 的体积(m3),m是溶液中溶质的摩尔数,g是溶 质的质量(g),C是溶质的浓度(g/m3),T是 绝对温度(K),R是气体常数 (8314J/(Kmo),Mr为溶质的分子量或摩尔 质量(g/mol)
Van’t Hoff 公式 在理想溶液中，溶液的渗透压与溶质浓度的 关系可用Van’t Hoff公式表示： V RT M g V nRT r = = r Mr cRT M RT V g = = 式中π是渗透压（N/m2 ，即Pa），V是溶液 的体积（m3），n是溶液中溶质的摩尔数，g是溶 质的质量（g），C是溶质的浓度（g /m3），T是 绝 对 温 度 （ K ） ， R 是 气 体 常 数 （8.314J/(K·mol)），Mr为溶质的分子量或摩尔 质量（g /mol）
渗透压法测定蛋白质 的分子量 蛋白质溶液与理想溶液有较大的偏差。在 溶质浓度不大时,它们的关系可用下式表示: 丌=R1/c 丌RT +Kc t rTRc M RT RT M 元 RTRc C 当c趋向于0时,RTKc趋向于0,但π/c不趋向于0, 而是趋向于一定值
渗透压法测定蛋白质 的分子量 蛋白质溶液与理想溶液有较大的偏差。在 溶质浓度不大时，它们的关系可用下式表示： = + 2 Kc M c RT r RTKc M RT c r = + c RT M c r 0 lim → = RTKc c RT Mr − = 当c 趋向于0时，RTKc 趋向于0，但π/c 不趋向于0， 而是趋向于一定值
渗透压法测定蛋白质 的分子量 测定几个不同浓度下的渗透压,以π/c对c作 图,并外推至c为0时的π/c,再代入上式求得Mr。 为了避免溶液中其它无机离子的影响,在溶 解度许可的范围内,尽量采用等电点或接近于等 电点的缓冲液作膜内外的溶剂,并增加缓冲液中 无机盐的浓度
渗透压法测定蛋白质 的分子量 测定几个不同浓度下的渗透压，以π/c对c作 图，并外推至c为0时的π/c，再代入上式求得Mr。 为了避免溶液中其它无机离子的影响，在溶 解度许可的范围内，尽量采用等电点或接近于等 电点的缓冲液作膜内外的溶剂，并增加缓冲液中 无机盐的浓度