十、常用蛋白质分子量标准参照物 高分子量标准参照 中分子量标准参物 低分子量标准参照 蛋白质 蛋白质 蛋白质 肌球蛋白 212000磷酸化酶B 97400碳酸酐酶 31000 B一半乳糖苷酶116000牛血清清蛋白 大豆胰蛋白酶制剂|21500 磷酸化酶B 谷氨酸脱氢酶 55000马心肌球蛋白 16900 牛血清清蛋白 66200卵清蛋白 溶菌酶 14400 过氧化氢酶 57000醛缩酶 40000肌球蛋白(F1) 8100 醛缩酶 40000碳酸酐酶 31000肌球蛋白(F2) 6200 大豆胰蛋白酶抑制剂21500肌球蛋白(F3) 2500 L溶菌酶 14400 十一、层析法常用数据表及性质 (一)离子交换纤维素 目前常用的离子交换纤维素列于下表 蛋白吸附容量(毫克克)床体积(毫升克) DEAE- 长度 交换当量 形状 胰岛素牛血清清蛋白 纤维素 (微米)(毫克当量克) l60pH7.5 (pH8.5) (pH8.5) DE22改良纤维性*12-4001.0±01 750 DE23同上(除细粒)18-4001.0±01 750 DE32微粒性(干粉)24-631.0±0.1 DE52同上(溶胀)24631.0±01 CM-纤维素 溶菌酶7S-y球蛋白pH50pH75 (pH5.0) (pH5.0) CM-22 改良纤维性 12-4000.6±0.06 150 7.7 CM-23 同上(除细粒)18-400 0.6±0.06 CM32微粒性(干粉)24-631.0±0.1 CM-52 同上(溶胀 24~-63 *:英国 Whatman厂的型号,原来有旧型号如DE-1,为长纤维性,长度1000微米。还有DE-1l, 纤维性,50~250微米,对牛血清清蛋白的吸附容量仅为130毫克/克
十、常用蛋白质分子量标准参照物 高分子量标准参照 中分子量标准参物 低分子量标准参照 蛋白质 Mr 蛋白质 Mr 蛋白质 Mr 肌球蛋白 β－半乳糖苷酶 磷酸化酶 B 牛血清清蛋白 过氧化氢酶 醛缩酶 212 000 116 000 97 400 66 200 57 000 40 000 磷酸化酶 B 牛血清清蛋白 谷氨酸脱氢酶 卵清蛋白 醛缩酶 碳酸酐酶 大豆胰蛋白酶抑制剂 溶菌酶 97 400 66 200 55 000 42 700 40 000 31 000 21 500 14 400 碳酸酐酶 大豆胰蛋白酶制剂 马心肌球蛋白 溶菌酶 肌球蛋白（F1） 肌球蛋白（F2） 肌球蛋白（F3） 31 000 21 500 16 900 14 400 8 100 6 200 2 500 十一、层析法常用数据表及性质 （一） 离子交换纤维素 目前常用的离子交换纤维素列于下表 DEAE－ 纤维素 形状 长度 （微米） 交换当量 （毫克当量/克） 蛋白吸附容量 （毫克/克） 床体积（毫升/克） 胰岛素 （pH8.5） 牛血清清蛋白 （pH8.5） pH6.0 pH7.5 DE-22 DE-23 DE-32 DE-52 CM-纤维素 CM-22 CM-23 CM-32 CM-52 改良纤维性 * 同上（除细粒） 微粒性（干粉） 同上（溶胀） 改良纤维性 同上（除细粒） 微粒性（干粉） 同上（溶胀） 12~400 18~400 24~63 24~63 12~400 18~400 24~63 24~63 1.0±0.1 1.0±0.1 1.0±0.1 1.0±0.1 0.6±0.06 0.6±0.06 1.0±0.1 1.0±0.1 750 750 850 850 溶菌酶 (pH5.0) 600 600 1,260 1,260 450 450 660 660 7S －γ球蛋白 （pH5.0） 150 150 400 400 7.7 8.3 6.0 6.0 pH5.0 7.7 9.1 6.8 6.8 7.7 9.1 6.3 6.3 pH7.5 7.7 9.1 6.7 6.7 *：英国 Whatman 厂的型号，原来有旧型号如 DE-1，为长纤维性，长度 1000 微米。还有 DE-11， 纤维性，50～250 微米，对牛血清清蛋白的吸附容量仅为 130 毫克/克
(二)丙烯酰胺凝胶的技术数据 膨胀所需最少时间 排阻的下限分级分离的范围膨胀后的床体积 型号 (室温,小时) (Mr) (Mr (mL/g干凝胶) Bio-geI-P-2 1600 200~2000 Bio-gel-P-4 500~4000 Bio-gel-P-10 10000 5000~17000 Bio-geI-P-30 30000 20000~50000 14 Bio-gel-P-60 60000 30000~70000 19.0 Bio-gel-P-100 100000 40000~100000 19.0 Bio-gel-P-150 50000~150000 4.0 Bio-gel-P-200200000 80000~300000 34.0 300000 00000~400000 40.0 注:上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒,在水和缓冲溶液中很容易膨胀,生产厂为 Bio-Rad Laboratories. Rich-mond. California S.a (三)琼脂糖凝胶的技术数据 琼脂糖是琼脂内非离子型的组分,它在0~4℃,pH4-9范围内是稳定的。) 名称、型号凝胶内琼脂糖百分排阻的下限(M)分级分离的范围(M) 生产厂商 含量(W/w) Sagavac 10 2.5×10 1×104~2.5×105 Seravac laboratories Sagavac6 2×10° 5×104~2×10° Sagavac4 15×10° 2×105~15×10° 50×10° Bio-GelA-0.5M10 0.5×10 <1×104~2.5×10° Bio-Rad Laboratories Bio-GelA-1.5M8 1.5×106 <1×104~1.5×10° California U.S.A Bio-GelA-15M4 15×105 4×104~15×10° Bio-GelA-50M2 50×106 1×105~50×106 Bio-GelA-150M 1 50×10° 1×10°~150×106
（二）聚丙烯酰胺凝胶的技术数据 型号 排阻的下限 （Mr） 分级分离的范围 （Mr） 膨胀后的床体积 （mL/g 干凝胶） 膨胀所需最少时间 （室温，小时） Bio-gel-P-2 Bio-gel-P-4 Bio-gel-P-6 Bio-gel-P-10 Bio-gel-P-30 Bio-gel-P-60 Bio-gel-P-100 Bio-gel-P-150 Bio-gel-P-200 Bio-gel-P-300 1 600 3 600 4 600 10 000 30 000 60 000 100 000 150 000 200 000 300 000 200~2 000 500~4 000 1 000~5 000 5 000~17 000 20 000~50 000 30 000~70 000 40 000~100 000 50 000~150 000 80 000~300 000 100 000~400 000 3.8 5.8 8.8 12.4 14.9 19.0 19.0 24.0 34.0 40.0 2~4 2~4 2~4 2~4 10~12 10~12 24 24 48 48 注：上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒，在水和缓冲溶液中很容易膨胀，生产厂为 Bio-Rad Laboratories,Rich-mond, California, U. S. A. （三）琼脂糖凝胶的技术数据 （琼脂糖是琼脂内非离子型的组分，它在 0 ~ 4℃，pH 4~9 范围内是稳定的。） 名称、型号 凝胶内琼脂糖百分 含量（W/W） 排阻的下限（Mr） 分级分离的范围（Mr） 生产厂商 Sagavac 10 Sagavac 8 Sagavac6 Sagavac4 Sagavac2 10 8 6 4 2 2.5×105 7×105 2×106 15×106 150×106 1×104~2.5×105 2.5×104~7×105 5×104~2×106 2×105~15×106 5×105~15×107 Seravac Laboratories, Maidenhead, England Bio-GelA-0.5M Bio-GelA-1.5M Bio-GelA-5M Bio-GelA-15M Bio-GelA-50M Bio-GelA-150M 10 8 6 4 2 1 0.5×105 1.5×106 5×106 15×105 50×106 150×106 <1×104~2.5×106 <1×104~1.5×106 1×104~5×106 4×104~15×106 1×105~50×106 1×106~150×106 Bio-Rad Laboratories, California,U.S.A
(四)凝胶过滤层析介质的技术数据 凝胶过滤介质 颗粒 pH稳定耐压最快 分离范围 大小 特性应用 性工作(Mpa)流速 Superdex 30 1000024肽类、寡糖、小蛋白等 3~12 100 3000~70000 重组蛋白、细胞色素 3~12 Superdex001000600004单抗、大蛋白 3~12 5000-5×10 0~40蛋白、肽类、多糖、核酸3-12 Superose 12 1000~300000 蛋白、肽类、寡糖、多糖3~2 100100005-75肽类、小蛋白 3~11 0~39 S-100 HR 50000042-75蛋白,如清蛋白 3~ 0~39 S-200 HR 100015×10625-75蛋白、抗体 3~11 S-300 HR 20008×0625~75多糖、具延伸结构的大分3-1102 S-400 HR 子如蛋白多糖、脂质体 Sepharose61000410平均90巨大分子 2~12 0.1 300 Fast Flow Sepharose 4 6002020290巨大分子如重组乙型肝 2~12 0.1 Fast Flow 炎表面抗原 Sepharose 2B|0004×1060-200蛋白、大分子复合物、病490004 每、不对称分子如核酸和 多糖(蛋白多糖) 600020×10545-165蛋白、多糖 90.008 11.5 Sepharose 6B 10000-4x10 45-165蛋白、多糖 70040060蛋白、大分子复合物、病49005 CL-2B 毒、不对称分子如核酸和 多糖(蛋白多糖) Sepharose 6000020×10545-165蛋白、多糖 0.012 CL-4B 10004×10645-165蛋白、多糖 CL-6B
（四）凝胶过滤层析介质的技术数据 凝胶过滤介质 名称 分离范围 颗粒 大小 （μm） 特性/应用 pH 稳定 性工作 耐 压 （Mpa） 最 快 流 速 （cm/h） Superdex 30 Superdex 75 Superdex200 Superose 6 Superose 12 Sephacryl S-100 HR Sephacryl S-200 HR Sephacryl S-300 HR Sephacryl S-400 HR Sepharose 6 Fast Flow Sepharose 4 Fast Flow Sepharose 2B Sepharose 4B Sepharose 6B Sepharose CL-2B Sepharose CL-4B Sepharose CL-6B <10000 3000~70000 3 000 10000~600000 5000~5×106 1000~300000 1000~ 100000 5000~250000 10000~1.5×106 20000~8×106 10000~4×106 60000~20×106 70000~40×106 60000~20×106 10000~4×106 70000~40×106 60000~20×105 10000~4×106 24~44 24~44 24~44 20~40 20~40 25~75 25~75 25~75 25~75 平均 90 平均 90 60~200 45~165 45~165 60~200 45~165 45~165 肽类、寡糖、小蛋白等 重组蛋白、细胞色素 单抗、大蛋白 蛋白、肽类、多糖、核酸 蛋白、肽类、寡糖、多糖 肽类、小蛋白 蛋白，如清蛋白 蛋白、抗体 多糖、具延伸结构的大分 子如蛋白多糖、脂质体 巨大分子 巨大分子如重组乙型肝 炎表面抗原 蛋白、大分子复合物、病 毒、不对称分子如核酸和 多糖（蛋白多糖） 蛋白、多糖 蛋白、多糖 蛋白、大分子复合物、病 毒、不对称分子如核酸和 多糖（蛋白多糖） 蛋白、多糖 蛋白、多糖 3~12 3~12 3~12 3~12 3~12 3~11 3~11 3~11 3~11 2~12 2~12 4~9 4~9 4~9 3~13 3~13 0.3 0.3 0.3 0.4 0.7 0.2 0.2 0.2 0.2 0.1 0.1 0.004 0.008 0.02 0.005 0.012 0.02 100 100 100 30 30 20~39 20~39 20~39 20~39 300 250 10 11.5 14 15 26 30
颗粒 干凝胶 溶胀最少最快 凝胶过滤介质 分离 大小 特性/应用 稳定性溶胀体积平衡时间(h)流速 (um) 工作(mg) 室温沸水|(cmh) SephadexG-10<700 干粉40~120 SephadexG-15<1500 干粉40-120 2-1325-35 Sephad2510008100脱盐及交换缓冲液2134-6 Coarse Sephadex25100500千粉50-150脱盐及交换缓冲液 Sephadex25100000千粉20-80脱盐及交换缓冲液2-134-6 Fine 用 Sephadex25000千粉10-40脱盐及交换缓冲液2-1346 Sephadex501500-3000千粉100-300小分子蛋白质分离 2~10 Coarse Sephadex50150000千粉50-150|小分子蛋白质分离 2~10 SephadexG-50 1500-3000 干粉20-80 小分子蛋白质分离 2-109~11 Sephadex-01500-3000千粉10-40小分子蛋白质分离 2-109-11 Sephadex-75300000千粉40-120中等蛋自质分离 2~1012~15 233 Sephadex75|300700千粉10-40中等蛋白质分离2-10 Sephadex-10040015105千粉40-120中等蛋白质分离 2~10 15~20 SephadexG-1004000-1x10 干粉10~40中等蛋白质分离2-1015-2048511 Sephadex1505003105千粉40-120稍大蛋白质分离 21020-3072 Sephadex150500415×105千粉10-40稍大蛋白质分离 2~10 5.6 Sephadex2005006×105千粉40-120较大蛋白质分离 0~40 Sephad200100050千粉10-40较大蛋白质分离 2-1020-25 2.8 SephadexLH20100- 干粉 特别为使用有机溶剂而设计。适合分离脂类、胆固醇、脂肪酸、激素、 嗜脂性 4000 维生素及其他小生物分子。此分离范围指以酒精为溶剂的分离
凝胶过滤介质 名称 分离 范围 颗粒 大小 （μm） 特性/应用 pH 稳定性 工作 干凝胶 溶胀体积 （mL/g） 溶胀最少 平衡时间（h） 最快 流速 (cm/h) 室温 沸水 SephadexG-10 SephadexG-15 SephadexG-25 Coarse SephadexG-25 Medium SephadexG-25 Fine SephadexG-25 Superfine SephadexG-50 Coarse SephadexG-50 Medium SephadexG-50 Fine SephadexG-50 Superfine SephadexG-75 SephadexG-75 Superfine SephadexG-100 SephadexG-100 Superfine SephadexG-150 SephadexG-150 Superfine SephadexG-200 SephadexG-200 Superfine <700 <1500 1000~5000 1000~5 000 1000~5000 1000~5000 1500~30000 1500~30000 1500~30000 1500~30000 3000~80000 3000~70000 4000~1.5×105 4000~1×105 5000~3×105 5000~1.5×105 5000~6×105 5000~2.5×105 干粉 40~120 干粉 40~120 干粉 100~300 干粉 50~150 干粉 20~80 干粉 10~40 干粉 100~300 干粉 50~150 干粉 20~80 干粉 10~40 干粉 40~120 干粉 10~40 干粉 40~120 干粉 10~40 干粉 40~120 干粉 10~40 干粉 40~120 干粉 10~40 脱盐及 交换 缓冲液 用 脱盐及 交换 缓冲液 用 脱盐及 交换 缓冲液 用 脱盐及 交换 缓冲液 用 小分子蛋白质分离 小分子蛋白质分离 小分子蛋白质分离 小分子蛋白质分离 中等蛋白质分离 中等蛋白质分离 中等蛋白质分离 中等蛋白质分离 稍大蛋白质分离 稍大蛋白质分离 较大蛋白质分离 较大蛋白质分离 2~13 2~13 2~13 2~13 2~13 2~13 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~3 2.5~3.5 4~6 4~6 4~6 4~6 9~11 9~11 9~11 9~11 12~15 12~15 15~20 15~20 20~30 18~22 30~40 20~25 3 3 6 6 6 6 6 6 6 6 24 24 48 48 72 72 72 72 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 5 5 5 5 5 5 2~5 2~5 2~5 2~5 2~5 2~5 2~5 2~5 2~5 2~5 72 16 47 11 21 5.6 11 2.8 SephadexLH20 ( 嗜脂性 ) 100~ 4 000 干粉 25~106 特别为使用有机溶剂而设计。适合分离脂类、胆固醇、脂肪酸、激素、 维生素及其他小生物分子。此分离范围指以酒精为溶剂的分离
(五)高子交换层析介质的技术数据 离子交换介质名称最高载量颗粒大小 特性/应用 pH稳定性耐压 最快 (um) 作 (MPa) 流速 (cm/h) 蛋白 SOURCE 15 S 2~12 Q Sepharose SP Sepharose 3~12 核糖核酸酶 arose 120mg 45~165 2~12 SP Sepharose 75mg 45~165 DEAE Sepharose 110mg 45~165 2~9 0.2 300 CM Sepharose 100~300 6~13 核糖核酸酶 Q Sepharo 100~300 2~12 Big beads SP Sepharose 干粉 40~120
（五）离子交换层析介质的技术数据 离子交换介质名称 最高载量 颗粒大小 （μm） 特性/应用 pH 稳定性 工作 耐压 （MPa） 最快 流速 (cm/h) SOURCE 15 Q 25mg 蛋白 15 2～12 4 1800 SOURCE 15 S 25mg 蛋白 15 2～12 4 1800 Q Sepharose H.P. 70mg BSA 24～44 2～12 0.3 150 SP Sepharose H.P. 55mg 核糖核酸酶 24～44 3～12 0.3 150 Q Sepharose F.F. 120mg HSA 45～165 2～12 0.2 400 SP Sepharose F.F. 75mg BSA 45～165 4～13 0.2 400 DEAE Sepharose F.F. 110mg HSA 45～165 2～9 0.2 300 CM Sepharose F.F. 50mg 核糖核酸酶 100～300 6～13 0.2 300 Q Sepharose Big Beads 100～300 2～12 0.3 1200 ～ 1800 SP Sepharose Big Beads 60mg BSA 干粉 40～120 4～12 0.3 1200 ～ 1800
离子交换最高 颗粒 pH稳定性 耐压 最快 介质名称载量 特性/应用 工作 流速 (cm/h) 纯化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 QAE Sephadex.2amg甲状腺球|干粉及巨大分子 2~10 0.11 蛋白 40~120(Mx>200000,在 80mgHSA 工业传统应用上具 有重要作用 批量生产和预处理 2mg甲状腺球干粉 分离中等大小 0.01 A-50 40~120的生物分子 80mgHSA (30~200000) 纯化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 SP Sephadex70mg牛羰合血干粉及巨大分子 C-25 红蛋白230mg40~120(M>20000在 核糖核酸酶 工业传统应用上具 有重要作用 8mg IgG 批量生产和预处理 SP Sephadex l10mg牛羰合 干粉用,分离中等大小 2~10 0.01 C-50 血红蛋白 40~120 的生物分子 (30~200000) lmg甲状 纯化低分子量蛋 腺球蛋 白、多肽、核苷以 DEAE Sephadex A-25 30mg hAS 干粉及巨大分子 40mga乳清/40-120(M>20000 在工业传统应用 具有重要作用 批量生产和预处理 DEAE Sephadex 2ng甲状 用,分离中等大小 干粉 的生物分子 A-50 腺球蛋 10g5|0-120|(M2000d 工作传统应用上具 有重要作用 纯化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 CM Sephadex70mg牛羰合血干粉及巨大分子 6~13 0.13 红蛋白190mg40~120(Mx>20000在 核糖核酸酶 工业传统应用上具 有重要作用 「批量生产和预处理 CM Sephadex|140mg牛羰合 干粉|用,分离中等大小 6~10 0.01 C-50 血红蛋白12mg40-120的生物分子 核糖核酸酶 (30~200000)
离子交换 介质名称 最高 载量 颗粒 大小 （μ m ） 特性 /应用 p H 稳定性 工作 耐压 (MPa) 最快 流速 （cm/h ） QAE Sephadex A-25 1.2mg 甲状腺球 蛋白 80mgHSA 干粉 40 ～120 纯化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 及巨大分子 （Mr>200000）,在 工业传统应用上具 有重要作用 2 ～10 0.11 475 QAE Sephadex A-50 1.2mg 甲状腺球 蛋白 80mgHSA 干粉 40 ～120 批量生产和预处理 用，分离中等大小 的生物分子 （30～200000 ） 2 ～11 0.01 45 SP Sephadex C-25 1.1mg IgG 70mg 牛羰合血 红蛋白 230mg 核糖核酸酶 干粉 40 ～120 纯化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 及巨大分子 （Mr>200000）,在 工业传统应用上具 有重要作用 2 ～10 0.13 475 SP Sephadex C-50 8mg IgG 110mg 牛羰合 血红蛋白 干粉 40 ～120 批量生产和预处理 用，分离中等大小 的生物分子 （30 ～200000 ） 2 ～10 0 .01 45 DEAE Sephadex A-25 1mg 甲状 腺球蛋白 30mg HAS 140mg a -乳清 蛋白 干粉 40 ～120 纯化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 及巨大分子 （Mr>200 000 ） , 在工业传统应用上 具有重要作用 2 ～ 9 0.11 475 DEAE Sephadex A-50 2mg 甲状 腺球蛋白 110mg HSA 干粉 40 ～120 批量生产和预处理 用，分离中等大小 的生物分子 （ Mr>200 000），在 工作传统应用上具 有重要作用 2 ～ 9 0.11 45 CM Sephadex C-25 1.6mg IgG 70mg 牛羰合血 红蛋白 190mg 核糖核酸酶 干粉 40 ～120 纯化低分子量蛋 白、多肽、核苷以 及巨大分子 （Mr>200 000），在 工业传统应用上具 有重要作用 6 ～13 0.13 475 CM Sephadex C-50 7mg IgG 140mg 牛羰合 血红蛋白 120mg 核糖核酸酶 干粉 40 ～120 批量生产和预处理 用，分离中等大小 的生物分子 （30 ～200000 ） 6 ～10 0.01 45
十二、常用缓冲溶液的配制方法 1.甘氨酸-盐酸缓冲液(0.05moL) X毫升0.2mol/L甘氨酸+Y毫升02mol/LHCI,再加水稀释至200毫升 44.0 l14 8.2 16.8 5.0 甘氨酸分子量=7507,0.2mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升 2.邻苯二甲酸-盐酸缓冲液(0.05mol) Ⅹ毫升0.2mo/L邻苯二甲酸氢钾+0.2mol/LHCl,再加水稀释到20毫升 4.070 1.470 3.960 3.295 3.6 0.597 2.022 邻苯二甲酸氢钾分子量=20423,0.2mol/L邻苯二甲酸氢溶液含4085克/升 3.磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液 0.2mol/L 0.1mol/L 0.2mol/L 0.1mol/L NazHPO4柠檬酸 Na2HPO4 柠檬酸 (毫升) (毫升) 2.2 0.40 10.60 2.4 18.76 l1.15 2.6 2.18 1782 5.6 11.60 8.40 2.8 3.17 16.83 4.11 15.89 7.37 3.2 6.2 5.70 14.30 13.85 13.56 545 7.10 6.8
十二、常用缓冲溶液的配制方法 1． 甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） X 毫升 0.2 mol/L 甘氨酸+Y 毫升 0.2 mol/L HCI，再加水稀释至 200 毫升 pH X Y pH X Y 2.0 2.4 2.6 2.8 50 50 50 50 44.0 32.4 24.2 16.8 3.0 3.2 3.4 3.6 50 50 50 50 11.4 8.2 6.4 5.0 甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L 甘氨酸溶液含 15.01 克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） X 毫升 0.2 mol/L 邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到 20 毫升 pH(20℃) X Y pH(20℃) X Y 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 5 5 5 5 5 4.070 3.960 3.295 2.642 2.022 3.2 3.4 3.6 3.8 5 5 5 5 1.470 0.990 0.597 0.263 邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L 邻苯二甲酸氢溶液含 40.85 克/升 3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升） 0.1mol/L 柠檬酸 （毫升） 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53
4.2 l1.72 7.2 17.39 2.61 8.82 11.1 7.4 4.8 9.86 10.14 7.8 0.85 1945 NampO4分子量=1498,0.2molL溶液为2840克/升 Na,hPo4-2H2O分子量=17805,0.2mol/L溶液含35.01克/升。 C4H2O·H2O分子量=210.14,0.1mol/L溶液为21.01克/升。 4.柠酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液 pH|钠离子浓度柠檬酸(克)氢氧化钠(克)盐酸(毫升)最终体积 (mol/L) CHO· H20NaOH97%LHC1(浓) (升)① 0.20 0.20 210 0.20 210 0.20 210 0.35 0.45 285 105 ①使用时可以每升中加入1克克酚,若最后pH值有变化,再用少量50%氢氧化钠溶液 或浓盐酸调节,冰箱保存。 5.柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(0.1mol/L 0.1 mol/L 0.1 mol/L 0.1 mol/L 0.1 mol/L 柠檬酸柠檬酸钠 柠檬酸柠檬酸钠 (毫升) (毫升) (毫升) 3.0 18.6 14 5.0 8.2 3.2 172 5.2 5.4 13.6 14.0 6.0 5.8 4.7 16.2 7.7 172
4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 17.39 18.17 18.73 19.15 19.45 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55 Na2HPO4 分子量 = 14.98，0.2 mol/L 溶液为 28.40 克/升。 Na2HPO4-2H2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液含 35.01 克/升。 C4H2O7·H2O 分子量 = 210.14，0.1 mol/L 溶液为 21.01 克/升。 4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液 pH 钠离子浓度 （mol/L） 柠檬酸（克） C6H8O7·H2O 氢氧化钠(克) NaOH 97% 盐酸（毫升） HCl（浓） 最终体积 （升）① 2.2 3.1 3.3 4.3 5.3 5.8 6.5 0.20 0.20 0.20 0.20 0.35 0.45 0.38 210 210 210 210 245 285 266 84 83 83 83 144 186 156 160 116 106 45 68 105 126 10 10 10 10 10 10 10 ①使用时可以每升中加入 1 克克酚，若最后 pH 值有变化，再用少量 50% 氢氧化钠溶液 或浓盐酸调节，冰箱保存。 5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L） pH 0.1 mol/L 柠檬酸 （毫升） 0.1 mol/L 柠檬酸钠 （毫升） pH 0.1 mol/L 柠檬酸 （毫升） 0.1 mol/L 柠檬酸钠 （毫升） 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 18.6 17.2 16.0 14.9 14.0 13.1 12.3 11.4 1.4 2.8 4.0 5.1 6.0 6.9 7.7 8.6 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 8.2 7.3 6.4 5.5 4.7 3.8 2.8 2.0 11.8 12.7 13.6 14.5 15.3 16.2 17.2 18.0
10.3 9.7 6.6 14 18.6 4.8 9.2 10.8 柠檬酸C6HsO·H2O:分子量210.14,0.1moML溶液为21.01克/升 柠檬酸钠Na3C6H5O·2H2O:分子量294.12,0.1molL溶液为29.41克毫升。 6.乙酸-乙酸钠缓冲液(0.2mol/L) 0.2 mol/L 0.3 mol/L 0.2 mol/L 0.3 mol/L pH(18℃) HAc pH(18℃) HAc 亳升 毫升) 毫升 0.75 7. 4.0 1.80 5.2 7.90 2.10 7.35 9.10 4.6 4.90 NaAc3H2O分子量=13609,0.2mol/L溶液为27,22克/升 磷酸盐缓冲液 (1)磷酸氢二钠一磷酸二氢钠缓冲液(0.2) 0.2 mol/L 0.3 mol/L 0.2 mol/l 0.3 mol/L NazHPO4 NaH? PO4 NazHPO4 NaH PO4 8.0 7.0 61.0 39.0 5.9 10.0 6.0 7.2 28.0 6.1 15.0 85.0 7.3 23.0 6.2 18.5 74 81.0 19.0 6.3 77.5 16.0 6.4 26.5 7.6 87.0 13.0 31.5 6.6 375 7.8 6.7 43.5 7.9 7.0
4.6 4.8 10.3 9.2 9.7 10.8 6.6 1.4 18.6 柠檬酸 C6H8O7·H2O：分子量 210.14，0.1 mol/L 溶液为 21.01 克/升。 柠檬酸钠 Na3 C6H5O7·2H2O：分子量 294.12，0.1 mol/L 溶液为 29.41 克/毫升。 6．乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L） pH(18℃) 0.2 mol/L NaAc (毫升) 0.3 mol/L HAc (毫升) pH(18℃) 0.2 mol/L NaAc (毫升) 0.3 mol/L HAc (毫升) 2.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 0.75 1.20 1.80 2.65 3.70 4.90 9.25 8.80 8.20 7.35 6.30 5.10 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 5.90 7.00 7.90 8.60 9.10 9.40 4.10 3.00 2.10 1.40 0.90 0.60 Na2Ac·3H2O 分子量 = 136.09，0.2 mol/L 溶液为 27.22 克/升。 7．磷酸盐缓冲液 （1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（0.2） pH 0.2 mol/L Na2HPO4 (毫升) 0.3 mol/L NaH2PO4 (毫升) pH 0.2 mol/L Na2HPO4 (毫升) 0.3 mol/L NaH2PO4 (毫升) 5.8 5.9 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 8.0 10.0 12.3 15.0 18.5 22.5 26.5 31.5 37.5 43.5 49.5 55.0 92.0 90.0 87.7 85.0 81.5 77.5 73.5 68.5 62.5 56.5 51.0 45.0 7.0 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 61.0 67.0 72.0 77.0 81.0 84.0 87.0 89.5 91.5 93.0 94.7 39.0 33.0 28.0 23.0 19.0 16.0 13.0 10.5 8.5 7.0 5.3
Na,HPo42H2O分子量=17805,0.2mol/L溶液为8561克/升。 Na2HPO42H2O分子量=35822,0.2mol/L溶液为71.64克/升 Na,HPo42H2O分子量=15603,0.2mol/L溶液为31.21克/升。 (2)磷酸氢二钠一磷酸二氢钾缓冲液(1/5mol/L) p mol/L/15NazHPO:mol/L/15KH2 PO p mol/L/5Na: mol/L/15KH2PO4 毫升) 毫升) 毫升 (毫升) 9.90 17 0.50 3.00 9.75 91 0.10 5.00 8 6.00 8 47 NachO42H2O分子量=17805,1/15M溶液为11876克/升。 KH2PO4分子量=13609,1/5M溶液为9.078克/升。 8.磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液(0.05M) X毫升02MK2PO4+Y毫升0.2 NAoh加水稀释至29毫升 (20℃ X(毫升) Y(毫升) 20℃ X(毫升 Y(毫升) 5555 0.860 3.950 6.4 1.260 4.280 1780
Na2HPO4·2H2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液为 85.61 克/升。 Na2HPO4·2H2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为 71.64 克/升。 Na2HPO4·2H2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为 31.21 克/升。 （2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L） p H mol/L/15Na2HPO4 (毫升) mol/L//15KH2PO4 (毫升) p H mol/L//15Na2HPO4 (毫升) mol/L//15KH2PO4 (毫升) 4 .92 5 .29 5 .91 6 .24 6 .47 6 .64 6 .81 6 .98 0.10 0.50 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 9.90 9.50 9.00 8.00 7.00 6.00 5.00 4.00 7 .17 7 .38 7 .73 8 .04 8 .34 8 .67 8 .18 7.00 8.00 9.00 9.50 9.75 9.90 10.00 3.00 2.00 1.00 0.50 0.25 0.10 0 Na2HPO4·2H2O 分子量 = 178.05，1/15M 溶液为 11.876 克/升。 KH2PO4 分子量 = 136.09，1/15M 溶液为 9.078 克/升。 8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M） X 毫升 0.2M K2PO4 + Y 毫升 0.2N NaOH 加水稀释至 29 毫升 pH(20℃) X (毫升) Y（毫升） pH(20℃) X (毫升) Y（毫升） 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 5 5 5 5 5 0.372 0.570 0.860 1.260 1.780 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 5 5 5 5 5 2.963 3.500 3.950 4.280 4.520
