实验34 Carbachol pD2和atrop1nepA2计算 目的心和A是根据药物效应计算的激动药及相应洁抗剂的亲和力常数，在药物 受体分型、遗择性衡动药或林抗剂的研究中是一类最常川的指标， :着动药产生50%最大效应所需克分子浓度的负对数值即山，反陕激动药与受体的 亲和力，心越大，亲和力越高。 4:反晓竞争性拮抗剂与受体的柔和力。竟争性热抗剂无内在活性，不能在离体器官 实验中直接测定其效应，根据竞争性精抗剂对激动药量效由线的影响可以间接计算竞争性指 抗剂的亲和力。在一定浓度枯抗剂存在时，激动药增加一倍浓度才能产生与果米《未用拮抗 剂时)相同的效应，此时桔抗剂克分子浓度的负对数值就是山 本实验的目的是观察胆碱受体激动药氨甲酰粗碱(carbachol,.CCh)对离体豚鼠气管平 滑肌的作用，以及胆碱受体指抗剂atropine俱tr)对CO的竞争性林抗作用，并计算受体薰 动药及其拮抗药的亲和力常数。 材料 程鼠：小剪刀，小摄子，培养皿，麦氏浴棚，胶管，通气钩，气系，棉线，木 超，气泵，张力换能器，超级恒温器，PLab生物信号采集处理系统：rebs液。carbachol, atropine sulfate溶液。 方法和岁骤 1.制备离体豚眼气管条： 2,将气管条置于37℃含氧Ks液中，用换能器和PLab生物信号采集处理系统记录 收第，调节基础张力为1克。 3.Pcnb参数议置： 记录方式：连续记录：存盘方式：连续存盘：采样速率：5s:输入：C属合，放大倍 数200一500. 观表项目 1.稳定60分钟后，用累积法向浴栅中加入C0,溶槽内的浓度依次从10o1/L累如 至101/L,观察并描记离体脉展气管条收缩由线，然后连续冲洗3次，平衡30分钟
实验 34 Carbachol pD2 和 atropine pA2 计算 目的 pD2 和 pA2 是根据药物效应计算的激动药及相应拮抗剂的亲和力常数，在药物 受体分型、选择性激动药或拮抗剂的研究中是一类最常用的指标。 PD2：激动药产生 50%最大效应所需克分子浓度的负对数值即 pD2，反映激动药与受体的 亲和力，pD2 越大，亲和力越高。 pA2：反映竞争性拮抗剂与受体的亲和力。竞争性拮抗剂无内在活性，不能在离体器官 实验中直接测定其效应，根据竞争性拮抗剂对激动药量效曲线的影响可以间接计算竞争性拮 抗剂的亲和力。在一定浓度拮抗剂存在时，激动药增加一倍浓度才能产生与原来（未用拮抗 剂时）相同的效应，此时拮抗剂克分子浓度的负对数值就是 pA2。 本实验的目的是观察胆碱受体激动药氨甲酰胆碱(carbachol, CCh)对离体豚鼠气管平 滑肌的作用，以及胆碱受体拮抗剂 atropine(Atr)对 CCh 的竞争性拮抗作用，并计算受体激 动药及其拮抗药的亲和力常数。 材料 豚鼠；小剪刀，小镊子，培养皿，麦氏浴槽，胶管，通气钩，气泵，棉线，木 槌，气泵，张力换能器，超级恒温器，PcLab 生物信号采集处理系统；Krebs 液，carbachol， atropine sulfate 溶液。 方法和步骤 1．制备离体豚鼠气管条。 2．将气管条置于 37℃含氧 Krebs 液中，用换能器和 PcLab 生物信号采集处理系统记录 收缩，调节基础张力为 1 克。 3．PcLab 参数设置： 记录方式：连续记录；存盘方式：连续存盘；采样速率：5ms；输入：DC 耦合，放大倍 数 200～500。 观察项目 1．稳定 60 分钟后，用累积法向浴槽中加入 CCh，浴槽内的浓度依次从 10-9 mol/L 累加 至 10-3 mol/L，观察并描记离体豚鼠气管条收缩曲线，然后连续冲洗 3 次，平衡 30 分钟
2.向洛槽中加入4tr溶液，1015分钟后加入0溶液（方法月3所示，观察并描记在 不同浓度A1r存在时，C0的累加收缩曲线.所用的Atr浓度分别为10,10,10,10ol/L 结果（例） 不同浓度C的收缩效应以及Ar对其的影响见图11-34-1所示的典型实验由线。将实 验得到的数据，总结在表11-4.没有tr存在时0Ch的最大收馏条力()作为100%，计 算不同浓度的收缩张力的百分比，即为收缩百分率，计算不同浓度Ar存在时0的收缩素 力和百分比（见表11-4）。 图11-341 C0h黑积收缩反应()和Atr的影响（即 计算 1.2的计算 CCh的对数浓度一收缩效应由线为5形曲线，在效应的一90%的范围内曲线基本为一 直线，可以用直线目归法计算50%最大效应所香的对数浓度。将数缩百分率定为y,以Ch 浓度的负对数值(~1ogl/几)为x,取50%效应上下的三组数据，用直战回归方法（参见船 录)得到直线方程ya十x,2即为=底时的x值。输入3组数据，在作相应检查后，编 入50，按“SIFT”和“)]”健。即可显示2数值。不同浓度Atr存在时，C的2 定义为p2,计算方法月上.将2和2记入表11-5. 2.A2的计算 在2和02计算的基础上，进一步计算和记录1ogA2/A1-1),并填入表11-5， A】:表示无指抗剂存在时激动剂产生一定效应所需的克分子表度，在此指未如入A 前CCh产生50n最大效应所需的克分子浓度，1=lag1(2), A2:表示达抗剂存在时藏动剂产生相同效应所需的克分子浓度，在此A=10g1(-2*)。 (2-A1)/A1:表示达到原有效应所需增加激动药的浓度占单用激动药浓度的百分比： 2-A1)/A1=A2/A1-1=1og-1(01-pb2*)-1 42常用Sch11 d plot法计算，根据表11-5的数值可用两种方法计算。 (1》Pxce1直线回归法 参见“勇六章生理科学实验常用统计指标和方法
2．向浴槽中加入 Atr 溶液,10~15 分钟后加入 CCh 溶液(方法同 3 所示)，观察并描记在 不同浓度 Atr 存在时，CCh 的累加收缩曲线。所用的 Atr 浓度分别为 10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L。 结果（例） 不同浓度 CCh 的收缩效应以及 Atr 对其的影响见图 11-34-1 所示的典型实验曲线。将实 验得到的数据，总结在表 11-4。没有 Atr 存在时 CCh 的最大收缩张力(Emax)作为 100%，计 算不同浓度的收缩张力的百分比，即为收缩百分率。计算不同浓度 Atr 存在时 CCh 的收缩张 力和百分比(见表 11-4)。 图 11-34-1 CCh 累积收缩反应(A)和 Atr 的影响(B) 计算 1．pD2 的计算 CCh的对数浓度一收缩效应曲线为S形曲线,在效应的20%－80％的范围内曲线基本为一 直线，可以用直线回归法计算 50%最大效应所需的对数浓度。将收缩百分率定为 y，以 CCh 浓度的负对数值(-log mol/L)为 x，取 50％效应上下的三组数据，用直线回归方法(参见附 录)得到直线方程 y=a＋bx，pD2 即为 y=50%时的 x 值。输入 3 组数据，在作相应检查后，输 入 50，按“SHIFT”和“…)]”键，即可显示 pD2 数值。不同浓度 Atr 存在时,CCh 的 pD2 定义为 pD2* ,计算方法同上。将 pD2 和 pD2*记入表 11-5。 2．pA2 的计算 在 pD2 和 pD2*计算的基础上，进一步计算和记录 log(A2/A1-1)，并填入表 11-5。 A1 :表示无拮抗剂存在时激动剂产生一定效应所需的克分子浓度，在此指未加入 Atr 前 CCh 产生 50%最大效应所需的克分子浓度，A1=log-1(-pD2)。 A2：表示拮抗剂存在时激动剂产生相同效应所需的克分子浓度，在此 A2=log-1(-pD2*)。 (A2-A1)/A1：表示达到原有效应所需增加激动药的浓度占原用激动药浓度的百分比， (A2-A1)/A1=A2/A1-1＝log-1(pD1-pD2*)-1 pA2 常用 Schild plot 法计算，根据表 11-5 的数值可用两种方法计算。 (1)Excel 直线回归法 参见“第六章 生理科学实验常用统计指标和方法
(2)计算器直线回甘法 1©g(2/A1-1)与洁抗剂浓度负对数值之间存在线性相关关系。利用直线回归的方法，以 10g(A2/A1-1)为y,以Ar浓度的负对数值为x,得直线方程 log(A2/A1-1)=a+b(-log(Atr]) 根据2的定义，当A2=2A1时，则-10g[Atr]=p2-a/,可用计算器直接算出pM2 值（参见附录）。 (3)目测法 在Schi1 dplot座标上将各相数据标上，然后在距各点最近处画一直线，直线与X轴相 交处的数值即为2。 结果分析 I,根据表1结果，函出Atr不存在时和不同浓度Atr存在时的0Ch量效由线！报告CCh 的2值。 2报告不同浓度Atr时0Ch的2值及其1og2/AI-1)的数值，以及Atr的pA2值
（2）计算器直线回归法 log(A2/A1-1)与拮抗剂浓度负对数值之间存在线性相关关系，利用直线回归的方法，以 log(A2/A1-1)为 y，以 Atr 浓度的负对数值为 x，得直线方程： log(A2/A1-1)=a+b(-log[Atr]) 根据 pA2 的定义，当 A2＝2A1 时，则-log[Atr]=pA2=-a/b，可用计算器直接算出 pA2 值(参见附录)。 （3）目测法 在 Schild plot 座标上将各组数据标上，然后在距各点最近处画一直线，直线与 X 轴相 交处的数值即为 pA2。 结果分析 1.根据表 1 结果，画出 Atr 不存在时和不同浓度 Atr 存在时的 CCh 量效曲线；报告 CCh 的 pD2 值。 2.报告不同浓度 Atr 时 CCh 的 pD2 值及其 log(A2/A1-1)的数值，以及 Atr 的 pA2 值