第三章 细胞生物学研究方法 METHODS AND TECHNIQUES
第三章 细胞生物学研究方法 METHODS AND TECHNIQUES
本章内容提要 • 第一节 显微技术 • 一、光学显微镜 • 二、电子显微镜 • 三、显微操作技术 • 第二节 生物化学与分子生物学技术 • 第三节 细胞分离技术 • 第四节 细胞培养与细胞杂交
本章内容提要 • 第一节 显微技术 • 一、光学显微镜 • 二、电子显微镜 • 三、显微操作技术 • 第二节 生物化学与分子生物学技术 • 第三节 细胞分离技术 • 第四节 细胞培养与细胞杂交
第一节 显微技术 • 光学显微镜：以可见光（或紫外线）为光源。 • 电子显微镜：以电子束为光源
第一节 显微技术 • 光学显微镜：以可见光（或紫外线）为光源。 • 电子显微镜：以电子束为光源
—、光学显微镜
—、光学显微镜
• 1. 构成： • ①照明系统 • ②光学放大系统 • ③机械装置 • 2. 原理：经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成 像。 （一）普通光学显微镜
• 1. 构成： • ①照明系统 • ②光学放大系统 • ③机械装置 • 2. 原理：经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成 像。 （一）普通光学显微镜
胶片平面 照相机接口 取景器 光学传感器阵列 PL投影镜头 眼点位置V 物镜 载物台运动控制旋钮 同轴粗微调旋钮 聚光器 视场光阑调节环 灯室聚光镜 集光镜 漫射镜 卤素灯
250 、, 平行光路 人o 虚象 B B A Lo Le 标本 中间象 人眼 物镜 管镜 目镜 Mo ft/fo Mo:代表物镜放大倍数 :代表管镜焦距 fo:代表物镜焦距
• 3. 分辨力：指分辨物体最小间隔的能力。 • R=0.61λ/N．A． – 其中λ为入射光线波长；N．A．为镜口率 ＝ｎsinα/2， n=介质折射率；α=镜口角（样品对物镜镜口的张角） 。 • 思考：如何提高显微镜的分辨能力？
• 3. 分辨力：指分辨物体最小间隔的能力。 • R=0.61λ/N．A． – 其中λ为入射光线波长；N．A．为镜口率 ＝ｎsinα/2， n=介质折射率；α=镜口角（样品对物镜镜口的张角） 。 • 思考：如何提高显微镜的分辨能力？
表一、几种介质的折射率 介质 空气 水 香柏油 α 溴萘 折射率 1 1.33 1.515 1.66
表一、几种介质的折射率 介质 空气 水 香柏油 α 溴萘 折射率 1 1.33 1.515 1.66
• 显微镜的几个光学特点： – 制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介 质的折射率越接近玻璃的越好。 – sin α /2的最大值必然小于1；介质为空气，镜口率一般 为0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近 1.5。 – 普通光线的波长为400~700nm，分辨力数值不会小于 0.2μm，人眼的分辨力为0.2mm,因此显微镜的最大设 计倍数为1000X
• 显微镜的几个光学特点： – 制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介 质的折射率越接近玻璃的越好。 – sin α /2的最大值必然小于1；介质为空气，镜口率一般 为0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近 1.5。 – 普通光线的波长为400~700nm，分辨力数值不会小于 0.2μm，人眼的分辨力为0.2mm,因此显微镜的最大设 计倍数为1000X