合族丰8科大学 基因工程抗体之嵌合抗体 临床免疫学教研室王志勇 床免疫学教研
课程内容 合杀本科大半 1.人-鼠嵌合抗体的概念 2.嵌合抗体与鼠单抗的区别 3.嵌合抗体制备及矣键步骤 我们已经掌握的知识。。。 合族李”科大 抗体的结构 抗体的功能 抗体的制备
我们已经掌握的知识。。。 合杀主科上学 为什么要制备嵌合抗体？ 抗体的结构 抗体的功能 抗体的制备 。。。0。。 我们已经掌握的知识。。。 合杀束明科大学 抗体用于疾病治疗的限制 √ 动物来源的抗体具有免疫原性 √鼠源性单克隆抗体的Fc段不能有效活化FC受体 及补体 √半衰期较短 。00。。。 需要对鼠源的抗体进行改造
合族李科大 如何改造？ 遵循的原则 保持特异性与抗体的亲和力 降低抗体的免疫原性 兼顾抗体的免疫活化性质 。。。。。。 我们已经掌握的知识。。。 合亲求9科上学 如何改造？ 抗体的结构 抗体的功能 ● 抗体的制备
我们已经掌握的知识。。。 合杀主9科上学 人抗鼠抗体反应90% Fab 是由鼠抗体的恒定区引 起 ·亲本抗体的亲和力和 特异性主要由可变区决 Fc 定 单抗观 合杀李8科大￥ 改造的类型？ 全长改造。。。应用于？ 片段改造。。。应用于？
合族李科大 F 免疫球蛋白的水解片段 合亲求9科上学 。 改造的过程？ 最关键的步骤是准确的克隆鼠抗体的可变区基因 √从基因组中或cDNA库中克隆获得 √PCR技术
合杀主9科上学 PCR克隆可变区 小鼠抗体可变区基因5'及3’端相对保守 设计相应的引物通过逆转录PCR来克隆 √依据可变区基因骨架区FR1区序列设计 √抗体可变区基因的信号肽区序列设计 合杀求8科大￥ 在哪里表达？ 哺乳类动物细 昆虫细胞 酵母 大肠杆菌 转基因动植物
合族李科大 哪些哺乳动物细胞可用于表达？ 非洲绿猴细胞 中国仓鼠卵巢细胞 小鼠骨髓瘤细胞 0.0。。0 合族李”科大 。 如何构建表达载体？ 双载体系统 单载体系统
合族本9科人半 。 表达载体中的元件设置？ 启动子 增强子 终止信号 加尾信号 。。。。。。 合杀求科大半 嵌合抗体制备流程？ √获得轻、重链可变区基因(RT-PCR、质谱等) √将轻、重链可变区基因序列克隆至含人恒定区的 表达载体，并进行验证 √转染细胞，表达、分泌抗体，纯化并鉴定 优化表达条件，建立稳定表达的细胞株
扩展知识 合族本科大 ·扩展知识： 1. 其它人源化抗体 2.全人抗体 3.小分子抗体 ntip://jpkc.gdmc.edu.cn/ktjyy/ 扩展知识 合族李”科大 e 小鼠抗体 小嵌合抗体 人改型抗体 8 W Fab片段 Fv片段