仓亲求9科大4 多克隆抗体 polyclonal antibody 赵毅副教授 广东医科大学 合产求9科大学 一、基本概念 抗体(antibody,,Ab) 一一免疫系统在抗原刺激下，由B淋巴细胞或记忆B细胞增殖分化成 的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。 免疫球蛋白 (Immunoglobulin,Ig) 具有抗体活性或化学口构与抗体相似的球蛋白 (1968年W0及国际免疫学会联合会命名)
合亲求9科半 抗体是介导体液免疫应答的重要效应分子。 主要分布在血清、组织液、外分泌液及某些细胞膜表面。 分泌型lg(secreted Ig,Slg】 Ab=lgZ之 膜型lg(membrane Ig,mlg) 阻止病原体入侵 溶解细胞或细菌 联合调理作用 始 FCR CR 中和作用 活化补体 通过胎盐 被动免疫 结合Fc受体 魔 ADCC 调理作用 介导1型超敏反应
合族束8科大半 人工制备抗体 多克隆抗体(polyclonal antibody) 单克隆抗体(monoclonal antibody) 基因工程抗体(genetic engineering antibody) Milstein、Kohler 单克隆抗体制备技术 1984年获诺贝尔奖 合族本”科大等 多克隆抗体(Polyclonal Antibody) Emil Adolf von Behring 1890年，白喉抗毒素的研制
The mouse immunized with an antigen ntigen(with many epitopes) eg.X.YZ.… 抗原免疫小鼠 Miture of B cell clones. each clone is specific 多克隆激活 for an epitope Anti-Z Anti-Y Ant Polyclonal antibody 水 具 人 多克隆抗体 Anti-Z Anti-Y Anti-X 合族本科大半 Pnn初次应 onse> (S0c再次应 onse) 一、、总抗体量 总抗体量 IgG IgM 楼伏期 潜伏期 10 15 20 5 15 初抗原刺激 再次抗原刺激o 初次及再次免疫应答抗体产生的一般规律
合产束科大￥ 特性 初次应答 再次应答 抗原星递 Dc B细胞 抗原浓度 高 低 抗体产生潜伏期 5一10天 2一5天 高峰浓度 较低 较高 维持时间 短 长 1g类别 主要为IgM gG、gA 亲和力 低 高 无关抗体 品 初次免疫应答与再次免疫应答的特性比较 m 合族本”科大等 多克隆抗体 制备技术 1.抗原 2.免疫动物 3.免疫方法 4.抗体的储存
合亲求9科学 1.抗原获得方式： 天然抗原（不易获取、不安全、不可控） 原核表达（周期短、安全、低成本、易操作） 外源基因表达获取的首选系统 多肽合成（抗原性强、可靠、成本高、不易操作） 修成免应学教场室 仓产9科大生 2.所用动物的选择 基本原则：所选择的蛋白抗原供体与免疫动物种系不可太接近， 亲缘太近不易产生良好抗体，甚至不产生抗体。 家兔：最适合制备抗体的动物： 啮齿类，尤其小鼠，一般用于单克隆抗体制备： 大型家畜，如马、山羊、绵羊等，多用于大批量生产和制备抗血清
合族束8科大半 免疫动物的相关注意 一般选用雌性、青壮年、1只以上的个体： 患病或处于应激状态，如被感染、饥饿、疾病等，均会影响免 疫效果： 不同性质的抗原也需要谨慎选择免疫动物： 蛋白质抗原，大多数动物均可产生大量的高效价抗体： 但，当动物体内有类似物质时，抗体产生效果较差， 如：胰岛素对家兔，IgE对绵羊免疫后即不易产生抗体。 在床鱼度学教研 合族本”科大等 3.免疫方法 1)免疫佐剂 弗氏不完全佐剂：液体石蜡+羊毛脂 弗氏完全佐剂：弗氏不完全佐剂+BCG或死TB 2)免疫途径及间隔 应充分考虑动物品系、个体状态、抗原性质、分子大小及抗原性 区分对待： 首次注射后，每次注射间隔1周，4次注射后测效价，采血
合亲求9科半 4.抗体的保存 冻存：先分装，再低温储存，避免反复冻融。 抗体储存液放在4℃环境中1天或者几周内其活性不会受到明显影响。 抗体中可以加入终浓度为50%的甘油或乙二醇储存于-20℃。 抗体浓度应高于1毫克/毫升，因为低浓度容易使抗体失去活性且易造成物 理吸附导致的损失。 仓产9科大生 小结 多克隆抗体的概念 多克隆抗体的制备 抗原的制备 免疫动物的选择 免疫方法 抗体的储存 色床免学敏研家