第十章天然药物化学实验 第十章天然药物化学实验 第一节天然药物化学实验引言 一、天然药物化学实验一般要求 天然药物化学是运用现代科学理论与技术研究天然药物中化学成分的一门学 科，是药学、药剂、中药学等相关专业本科学生必修的专业课，也是国家执业药师（中 药学)资格考试必考课程。本课程是在学生完成有机化学、分析化学、有机化合物波 谱学、中药学、生药学、药理学等课程学习的基础上，重点讲授天然药物中化学成 分的化学结构、理化性质、提取分离、结构鉴定、天然药物新药开发等方面的基本 原理与实验技能，培养学生具有从事天然药物方面的研究、开发和生产能力，为我 国药学事业的发展输送人才。 天然药物化学实验是天然药物化学课的重要组成部分。学习的主要目的是通过 实验操作检验和巩固课堂上所学的理论知识，使学生对理论知识的理解更加深入， 握得更加牢固：通过实验训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题、解决问 题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练：同时使学生养成严 谨的科学态度和良好的科学作风。为使学生更好地了解专业英语，轻松地阅读专业 英文文献，本版实验指导编辑了2个中英文对照实验题目。 实验教学的重点是加强学生基本操作技能的训练，学生在学习天然药物化学实 验后，应基本掌握以下技能： (一)提取分离 1.掌握浸渍法、渗漉法、回流提取法、索氏提取法、重结品法等提取或纯化技 术的原理和操作。 2.掌握纸色谱、薄层色谱、硅胶柱色谱、离子交换柱色谱的原理和操作。 (二)结构鉴定 1.掌握各类化学成分的一般定性反应在成分鉴定中的应用。 2。掌握紫外光谱在黄酮类结构测定中的基本应用
第十章 天然药物化学实验 1 第十章 天然药物化学实验 第一节 天然药物化学实验引言 一、天然药物化学实验一般要求 天然药物化学是运用现代科学理论与技术研究天然药物中化学成分的一门学 科，是药学、药剂、中药学等相关专业本科学生必修的专业课，也是国家执业药师(中 药学)资格考试必考课程。本课程是在学生完成有机化学、分析化学、有机化合物波 谱学、中药学、生药学、药理学等课程学习的基础上，重点讲授天然药物中化学成 分的化学结构、理化性质、提取分离、结构鉴定、天然药物新药开发等方面的基本 原理与实验技能，培养学生具有从事天然药物方面的研究、开发和生产能力，为我 国药学事业的发展输送人才。 天然药物化学实验是天然药物化学课的重要组成部分。学习的主要目的是通过 实验操作检验和巩固课堂上所学的理论知识，使学生对理论知识的理解更加深入， 掌握得更加牢固；通过实验训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题、解决问 题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练；同时使学生养成严 谨的科学态度和良好的科学作风。为使学生更好地了解专业英语，轻松地阅读专业 英文文献，本版实验指导编辑了 2 个中英文对照实验题目。 实验教学的重点是加强学生基本操作技能的训练，学生在学习天然药物化学实 验后，应基本掌握以下技能： (一)提取分离 1. 掌握浸渍法、渗漉法、回流提取法、索氏提取法、重结晶法等提取或纯化技 术的原理和操作。 2. 掌握纸色谱、薄层色谱、硅胶柱色谱、离子交换柱色谱的原理和操作。 (二)结构鉴定 1. 掌握各类化学成分的一般定性反应在成分鉴定中的应用。 2. 掌握紫外光谱在黄酮类结构测定中的基本应用
第十章天然药物化学实验 2 二、学生实验成绩评定 学生实验总成绩由实验指导教师根据以下七项要求综合评定： (一)学生课前预习情况(5%)： (二)实验过程中的合理安排(5%)： (三)实验中的科学素票(10%)： (四)仪器的操作规范与熟练程度(30%)： (五)实验记录、结果及实验报告(30%)： (六)实验理论笔试(10%)： (七)实验专项技能/技术考核(10%) 第二节天然药物化学常用实验技能 一、圆形（径向）纸色谱检识技术(Paper chromatography) 0仁燥作技术及程序。010000100000010口 1,准备仅器及试剂：培养血一对直径相等色谱滤纸、毛细管、相关试剂等。 取斯名食 直径约为1.5~2.0cm的圆，做为点样起始线。在此圆的中心打一小孔，将一个长方 形的滤纸条搓成一个滤纸芯，插在色谱滤纸的小孔中，纸芯与色谱滤纸垂直，纸芯 的高度要比培养皿上下合盖后的内部高度稍低。 3.点样：用毛细管将样品及对照品溶液点在色谱滤纸上所画的圆形起始线上， 做好标记，晾（吹）干。 4.选择及配制展开剂。 5.展开：将展开剂适量倒入培养皿中，上下盖好，平衡放置，保持5分钟左右， 使其内部达液~气饱和。然后将色谱滤纸小心“扣盖”在培养皿的下皿中，色谱纸保持 水平，纸芯保持直立并插入展开剂中，扣好培养皿上盖。展开剂将沿小纸芯向上浸 湿，到达色谱滤纸后以一个圆形的湿斑慢慢向四周扩展。当展开剂浸湿色谱纸一定 距离（一般接近培养皿边沿）后即可结束展开。将色谱滤纸取出，做好前沿标记，自 然晾干或吹干（图10-1）
第十章 天然药物化学实验 2 二、学生实验成绩评定 学生实验总成绩由实验指导教师根据以下七项要求综合评定： (一)学生课前预习情况(5%)； (二)实验过程中的合理安排(5%)； (三)实验中的科学素养(10%)； (四)仪器的操作规范与熟练程度(30%)； (五)实验记录、结果及实验报告(30%)； (六)实验理论笔试(10%)； (七)实验专项技能/技术考核(10%)。 第二节 天然药物化学常用实验技能 一、圆形(径向)纸色谱检识技术(Paper chromatography) (一)操作技术及程序 1. 准备仪器及试剂：培养皿一对(直径相等)、色谱滤纸、毛细管、相关试剂等。 2. 准备色谱滤纸：取直径 12.5 cm 的圆形色谱滤纸，将滤纸划分出数个区间(根 据所点样品的数目划分区间，滤纸不得有折痕或划痕)，在滤纸中心处用铅笔轻轻画 直径约为 1.5~2.0 cm 的圆，做为点样起始线。在此圆的中心打一小孔，将一个长方 形的滤纸条搓成一个滤纸芯，插在色谱滤纸的小孔中，纸芯与色谱滤纸垂直，纸芯 的高度要比培养皿上下合盖后的内部高度稍低。 3. 点样：用毛细管将样品及对照品溶液点在色谱滤纸上所画的圆形起始线上， 做好标记，晾(吹)干。 4. 选择及配制展开剂。 5. 展开：将展开剂适量倒入培养皿中，上下盖好，平衡放置，保持 5 分钟左右， 使其内部达液~气饱和。然后将色谱滤纸小心“扣盖”在培养皿的下皿中，色谱纸保持 水平，纸芯保持直立并插入展开剂中，扣好培养皿上盖。展开剂将沿小纸芯向上浸 湿，到达色谱滤纸后以一个圆形的湿斑慢慢向四周扩展。当展开剂浸湿色谱纸一定 距离(一般接近培养皿边沿)后即可结束展开。将色谱滤纸取出，做好前沿标记，自 然晾干或吹干(图 10-1)
第十章天然药物化学实验 3 一色谱滤纸 起始线 样品样点 滤纸 图10-1径向纸色谱装置示意图 6.显色：根据所测样品性质选择合适的显色方法，观察色斑的位置。 7.观察实验结果：确定出化合物斑点位置后，用尺子测量距离，计算比移值( 或与标准品对照。 (二)注意事项 1.色谱纸小心取放，不得折叠、污染。 2.选择适宜展开剂，否则样品展开效果差。 3.点样量要合适，浓度小则展开后观察不清楚，浓度太大则有拖尾现象。 二、硅胶薄层色谱检识技术(Thin Layer e●●。。。●Chromatography,TLC)●●●●。●●●e 一燥作技术及程序。。 1.准备仪器及试剂：色谱缸、TLC专用玻璃板(5cm×20cm)、研钵、薄层用 硅胶、0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)水溶液、其他相关试剂等。 2.制板 (1)硅胶G板：称取2.5~3g硅胶G放入研钵中，加入约7~9ml0.5%的CMC 水溶液（硅胶：CMC=1:2~3)混合成均匀的粘稠状溶液，再将其倒在TLC玻璃板上 并涂布均匀，然后轻轻颠荡使硅胶均匀地分布，形成均匀厚度的硅胶层。水平放置， 自然晾干。 (2)荧光薄板：称取硅胶GF2s42.5~3g,同硅胶G法制备。 (3)AgNO,-硅胶G板：在硅胶G中加入10%硝酸银水溶液调成均匀的糊状溶液， 其余同硅胶G法制备。 3.活化：将自然晾干的硅胶板放于烤箱中，在105110℃烘烤0.5、10小时 拿出自然降温并保存在干燥器中备用。 4.点样：在距硅胶玻璃板下端1.5~2cm处用铅笔轻轻划一直线，勿破坏硅胶 平面，作为点样起始线。分别用毛细管将样品及对照品溶液点在起始线上，晾（吹） 干并做好标记。样品点的直径应在2~3mm以内，样品点之间的间隔应不少于1cm。 5.选择及配制展开剂
第十章 天然药物化学实验 3 展开剂 样品样点 起始线 滤纸捻 色谱滤纸 培养皿上盖 培养皿下盖 图 10-1 径向纸色谱装置示意图 6. 显色：根据所测样品性质选择合适的显色方法，观察色斑的位置。 7. 观察实验结果：确定出化合物斑点位置后，用尺子测量距离，计算比移值(Rf) 或与标准品对照。 (二)注意事项 1. 色谱纸小心取放，不得折叠、污染。 2. 选择适宜展开剂，否则样品展开效果差。 3. 点样量要合适，浓度小则展开后观察不清楚，浓度太大则有拖尾现象。 二、硅胶薄层色谱检识技术(Thin Layer Chromatography，TLC) (一)操作技术及程序 1. 准备仪器及试剂：色谱缸、TLC 专用玻璃板(5 cm × 20 cm)、研钵、薄层用 硅胶、0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)水溶液、其他相关试剂等。 2. 制板 (1) 硅胶 G 板：称取 2.5~3 g 硅胶 G 放入研钵中，加入约 7 ~ 9 ml 0.5%的 CMC 水溶液(硅胶 : CMC =1 : 2~3)混合成均匀的粘稠状溶液，再将其倒在 TLC 玻璃板上 并涂布均匀，然后轻轻颠荡使硅胶均匀地分布，形成均匀厚度的硅胶层。水平放置， 自然晾干。 (2) 荧光薄板：称取硅胶 GF254 2.5~3 g，同硅胶 G 法制备。 (3) AgNO3-硅胶 G 板：在硅胶 G 中加入 10％硝酸银水溶液调成均匀的糊状溶液， 其余同硅胶 G 法制备。 3. 活化：将自然晾干的硅胶板放于烤箱中，在 105~110 ℃烘烤 0.5~1.0 小时， 拿出自然降温并保存在干燥器中备用。 4. 点样：在距硅胶玻璃板下端 1.5~2 cm 处用铅笔轻轻划一直线，勿破坏硅胶 平面，作为点样起始线。分别用毛细管将样品及对照品溶液点在起始线上，晾(吹) 干并做好标记。样品点的直径应在 2~3 mm 以内，样品点之间的间隔应不少于 1 cm。 5. 选择及配制展开剂
第十章天然药物化学实验 4 6.展开：先将展开剂适量置于色谱缸中，再将薄层板放于色谱缸中（不得浸入 展开剂中)，盖好上盖，保持15分钟左右，使其内部达液-气饱和。然后将硅胶板下 端小心慢慢地浸入到展开剂中，勿使展开剂浸没点样起始线，加盖使色谱缸密闭。 此时将会观察到展开剂沿硅胶板逐渐向上浸湿（即展开），展开距离一般为12cm以 上。将硅胶板取出，在前沿处作出标记，自然晾干或吹干（图10-2） ,色谱杠、 展开起始阀 一“展开剂 色谐缸正面 色谱缸侧面 TLC板 图10-2TLC色诺操作示意图 7.显色：根据样品性质选择合适的显色方法进行样品的显色观察。 8。计算比移值R及与标准品对照。 (二)注意事项 。1.硅胶板小心取放，不要受污染、刮蹭。。。。。。。。。。。。。 2.样品的点样量要合适，如果浓度小则展开后观察不清楚：如果浓度太大或 样直径过大可能有拖尾现象。如果样品溶液的浓度较低，可用毛细管反复在点样处 3.展开剂一定要选择合适，否则样品展开分离效果差。 4.荧光硅胶（硅胶-GF254)与硅胶-G的使用方法相同，但不用显色剂，可在紫外 灯(254nm)下观察样品展开情况 三、硅胶柱色谱分离技术(Column Chromatography,CC) (一)操作技术及程序 1.准备仪器及试剂：玻璃色谱柱、铁架台、接收瓶、相关试剂等。 2.装硅胶色谱柱 (1)干法装柱：打开色谱柱下端活塞，放入适当干燥脱脂棉垫入底部，取200-300 目的柱色谱用硅胶适量加入到色谱柱中，加完后不断轻轻敲打色谱柱壁，使硅胶紧 密均实。 (2)湿法装柱：在色谐柱底部垫入适当干燥脱脂棉，打开色谱柱下端活塞。取 200~300目的柱色谱用硅胶适量，置于烧杯中，加入适量的有机溶剂，搅拌使硅胶 完全湿润并无气泡，然后将硅胶加入到色谱柱中。注意加硅胶时要打开活塞，让硅
第十章 天然药物化学实验 4 6. 展开：先将展开剂适量置于色谱缸中，再将薄层板放于色谱缸中(不得浸入 展开剂中)，盖好上盖，保持 15 分钟左右，使其内部达液-气饱和。然后将硅胶板下 端小心慢慢地浸入到展开剂中，勿使展开剂浸没点样起始线，加盖使色谱缸密闭。 此时将会观察到展开剂沿硅胶板逐渐向上浸湿(即展开)，展开距离一般为 12 cm 以 上。将硅胶板取出，在前沿处作出标记，自然晾干或吹干(图 10-2)。 o 色谱板 展开剂 色谱缸 o A B a b h 展开剂前沿 展开起始线 色谱缸正面 色谱缸侧面 TLC板 图 10-2 TLC 色谱操作示意图 7. 显色：根据样品性质选择合适的显色方法进行样品的显色观察。 8. 计算比移值 Rf 及与标准品对照。 (二)注意事项 1. 硅胶板小心取放，不要受污染、刮蹭。 2. 样品的点样量要合适，如果浓度小则展开后观察不清楚；如果浓度太大或点 样直径过大可能有拖尾现象。如果样品溶液的浓度较低，可用毛细管反复在点样处 多点几次。 3. 展开剂一定要选择合适，否则样品展开分离效果差。. 4. 荧光硅胶(硅胶-GF254)与硅胶-G 的使用方法相同，但不用显色剂，可在紫外 灯(254 nm)下观察样品展开情况。 三、硅胶柱色谱分离技术(Column Chromatography, CC) (一)操作技术及程序 1. 准备仪器及试剂：玻璃色谱柱、铁架台、接收瓶、相关试剂等。 2. 装硅胶色谱柱 (1) 干法装柱：打开色谱柱下端活塞，放入适当干燥脱脂棉垫入底部。取 200~300 目的柱色谱用硅胶适量加入到色谱柱中，加完后不断轻轻敲打色谱柱壁，使硅胶紧 密均实。 (2) 湿法装柱：在色谱柱底部垫入适当干燥脱脂棉，打开色谱柱下端活塞。取 200~300 目的柱色谱用硅胶适量，置于烧杯中，加入适量的有机溶剂，搅拌使硅胶 完全湿润并无气泡，然后将硅胶加入到色谱柱中。注意加硅胶时要打开活塞，让硅
第十章天然药物化学实验 5 胶自然下沉，液面保持在硅胶之上，硅胶柱中不得有气泡。加样前，液面高度要保 持在10-20mm左右。 3.加入待分离样品 (1)方法1：一般将样品溶液溶于少量初始的洗脱剂中，制成样品溶液，轻轻注 入已准各好的硅胶柱上面，勿使柱面受到扰动，否则影响色谱效果 (2)方法山：如样品不溶于初始的洗脱剂，则将样品溶于挥发性的溶剂（如甲醇、 丙酮等)中，然后取少量吸附剂与其拌匀，除尽溶剂，再将含有样品的吸附剂均匀地 加入到色谱柱的顶端，再覆盖上少量保护硅胶或脱脂棉、小玻璃球将其压住，以防 洗脱时神乱顶部的拌样硅胶。 4.选择及配制洗脱剂。 5.洗脱与接收：将洗脱剂置于色谱柱最上面安装好的分液漏斗中。打开色谱柱 下端活塞，然后打开分液漏斗活塞滴加洗脱剂开始洗脱并接收，洗脱时要始终保持 洗脱剂液面在样品层之上，洗脱剂流速保持在1~2滴/秒左右。等份收集洗脱液， 一般先选用洗脱能力弱的溶剂，然后逐步增加洗脱能力（图103）。 6.配合TLC或其他方法即时检查洗脱液（即：接收液）。 滴液漏斗 e●000●000●0●0。●Z ●●●●●●少量硅胶或脂棉一 玻璃色谐柱 一色谱硅胶 脱脂棉 洗脱液 图10-3硅胶色谱分离装置示意图 (二)注意事项 1.硅胶吸附拌样的比例约为：样品：硅胶=1：1或1：2。 2.吸附剂硅胶的使用量比例约为：样品：硅胶=1：30-60或1：100（难分离物）。 3.洗脱剂的极性选择要合适，否则得不到很好的分离。 4.洗脱的速度要合适，一般保持在2~5ml/min 四、离子交换柱色谱分离技术(Ion Exchange
第十章 天然药物化学实验 5 胶自然下沉，液面保持在硅胶之上，硅胶柱中不得有气泡。加样前，液面高度要保 持在 10~20 mm 左右。 3. 加入待分离样品 (1) 方法 I：一般将样品溶液溶于少量初始的洗脱剂中，制成样品溶液，轻轻注 入已准备好的硅胶柱上面，勿使柱面受到扰动，否则影响色谱效果。 (2) 方法 II：如样品不溶于初始的洗脱剂，则将样品溶于挥发性的溶剂(如甲醇、 丙酮等)中，然后取少量吸附剂与其拌匀，除尽溶剂，再将含有样品的吸附剂均匀地 加入到色谱柱的顶端，再覆盖上少量保护硅胶或脱脂棉、小玻璃球将其压住，以防 洗脱时冲乱顶部的拌样硅胶。 4. 选择及配制洗脱剂。 5. 洗脱与接收：将洗脱剂置于色谱柱最上面安装好的分液漏斗中。打开色谱柱 下端活塞，然后打开分液漏斗活塞滴加洗脱剂开始洗脱并接收，洗脱时要始终保持 洗脱剂液面在样品层之上，洗脱剂流速保持在 1～2 滴/秒左右。等份收集洗脱液， 一般先选用洗脱能力弱的溶剂，然后逐步增加洗脱能力(图 10-3)。 6. 配合 TLC 或其他方法即时检查洗脱液(即：接收液)。 色谱硅胶 样品 洗脱剂液面 洗脱剂 少量硅胶或脱脂棉 脱脂棉 洗脱液 玻璃色谱柱 滴液漏斗 接收瓶 图 10-3 硅胶色谱分离装置示意图 (二)注意事项 1. 硅胶吸附拌样的比例约为：样品:硅胶=1:1 或 1:2。 2. 吸附剂硅胶的使用量比例约为：样品:硅胶=1:30~60 或 1:100(难分离物)。 3. 洗脱剂的极性选择要合适，否则得不到很好的分离。 4. 洗脱的速度要合适，一般保持在 2~5 ml/min。 四、离子交换柱色谱分离技术(Ion Exchange
第十章天然药物化学实验 6 Chromatography) (一)操作技术及程序 1.准备仪器及试剂：色谱柱、铁架台、接收瓶、相关试剂等（仪器装置可参考 图10-3) 2.活化树脂（以强酸型阳离子交换树脂为例）：按交换样品的性质选择树脂，根 据树脂的交换容量及样品的量，称取适量树脂。新树脂用无水乙醇浸泡12h以上除 去杂质，再用蒸馏水浸泡24小时溶胀。将色谱柱周定在铁架台上，调节合适高度以 便接收。在色谱柱底部垫入适当脱脂棉，将树脂装入色谱柱中，水溶液面始终浸没 树脂，避免树脂中产生气泡空洞。先用5倍量的2moL盐酸水溶液冲洗树脂使之 转为H型，再用蒸馏水冲洗为中性：然后用5倍量的5%氢氧化钠水溶液冲洗树脂 使之转为Na型，再用蒸馏水冲洗为中性：最后用5倍量的5%盐酸水溶液冲洗树 脂使之转为H型，用蒸馏水冲洗为中性，备用， 3.交换：将样品的水溶液从色谱柱上端加入，按流出液约2~4滴/秒的速度进 行交换。 草格无用合适的方法将交换到两上的越分交换下米井楼收 使用完后的树脂采用活化的方法可再生循环利用。。 1.离子交换树脂的交换容量一般在1~0 mmol/g,选择树脂时要看说明书的技 术指标。但实际的交换容量受溶液的pH值及离子交换树脂生产批次等的影响，都 比理论值要小。 2.始终保持液面高于树脂，以免发生树脂中溶液干涸，产生气泡空洞，影响交 换。 3.在树脂柱上部加盛有待交换样品溶液的滴液漏斗，方便加液 4.随时检查交换情况。 五、渗漉提取技术(Percolation) (一)操作技术及程序 1.准备仪器及试剂：渗漉筒、铁架台、霍夫曼夹、接收瓶、配制提取溶剂等 2.粉碎药材：将药材粉碎成50目左右，以利于提取溶剂进入药材内部。 3.渗漉及接收：将渗漉简固定在铁架台上，调节合适高度以方便接收，简内下 端放置纱布或滤纸，关闭霍夫曼夹。将药材放在烧杯中，加少量提取溶剂搅拌润湿
第十章 天然药物化学实验 6 Chromatography) (一)操作技术及程序 1. 准备仪器及试剂：色谱柱、铁架台、接收瓶、相关试剂等(仪器装置可参考 图 10-3)。 2. 活化树脂(以强酸型阳离子交换树脂为例)：按交换样品的性质选择树脂，根 据树脂的交换容量及样品的量，称取适量树脂。新树脂用无水乙醇浸泡 12 h 以上除 去杂质，再用蒸馏水浸泡 24 小时溶胀。将色谱柱固定在铁架台上，调节合适高度以 便接收。在色谱柱底部垫入适当脱脂棉，将树脂装入色谱柱中，水溶液面始终浸没 树脂，避免树脂中产生气泡空洞。先用 5 倍量的 2 mol/L 盐酸水溶液冲洗树脂使之 转为 H+ 型，再用蒸馏水冲洗为中性；然后用 5 倍量的 5% 氢氧化钠水溶液冲洗树脂 使之转为 Na+ 型，再用蒸馏水冲洗为中性；最后用 5 倍量的 5%盐酸水溶液冲洗树 脂使之转为 H+ 型，用蒸馏水冲洗为中性，备用。 3. 交换：将样品的水溶液从色谱柱上端加入，按流出液约 2~4 滴/秒的速度进 行交换。 4. 再交换(洗脱)：用合适的方法再将交换到树脂上的成分交换下来并接收。 5. 再生：将使用完后的树脂采用活化的方法可再生循环利用。 (二)注意事项 1. 离子交换树脂的交换容量一般在 1~10 mmol/g，选择树脂时要看说明书的技 术指标。但实际的交换容量受溶液的 pH 值及离子交换树脂生产批次等的影响，都 比理论值要小。 2. 始终保持液面高于树脂，以免发生树脂中溶液干涸，产生气泡空洞，影响交 换。 3. 在树脂柱上部加盛有待交换样品溶液的滴液漏斗，方便加液。 4. 随时检查交换情况。 五、渗漉提取技术(Percolation) (一)操作技术及程序 1. 准备仪器及试剂：渗漉筒、铁架台、霍夫曼夹、接收瓶、配制提取溶剂等。 2. 粉碎药材：将药材粉碎成 50 目左右，以利于提取溶剂进入药材内部。 3. 渗漉及接收：将渗漉筒固定在铁架台上，调节合适高度以方便接收，筒内下 端放置纱布或滤纸，关闭霍夫曼夹。将药材放在烧杯中，加少量提取溶剂搅拌润湿
第十章天然药物化学实验 后，放入渗清筒中，将药材适当压紧。从渗漉筒上部加入提取溶剂将药材浸没，保 持浸泡一定时间。打开霍夫曼夹，从下端接收提取溶液（渗漉液），渗漉速度一股为 36ml/min(图10-4). 4.即时检查：用合适的方法随时检查是否含有待提取的成分。 固定铁 铁架台 一接收瓶 一渗液 图104流装置示意图 (二)注意事项 。1●在渗流提取中应始终保持提取溶剂完全浸没药材。。●●●●。●● ●●●六、索氏提取技术(Soxhlet Continuous Reflux)●●。 (一)操作技术及程序 1.准备仪器及试剂：索氏提取器、铁架台、热源（如电热套或水浴）、有关试剂 等。 2。安装仪器：选取合适规格的索氏提取器，按照由下到上的顺序安装固定好索 氏提取器。整套仪器应保持垂直（图10-5）。 3.处理样品及加样：将待提取的固体样品用滤纸包好，不能有漏缝，然后放入 索氏提取器的中心部分。样品滤纸包要用玻璃制重物压住，以免样品在溶剂浸泡时 浮起。 4.加入提取溶剂：取适量提取溶剂放入溶剂瓶中，并加沸石。 5.加热回流提取：打开冷凝水，调节热源进行加热回流提取。提取结束后要首 先关闭热源，待提取液完全冷却后再按由上到下的顺序拆卸仪器，并将提取液转移 到合适的容器中
第十章 天然药物化学实验 7 后，放入渗漉筒中，将药材适当压紧。从渗漉筒上部加入提取溶剂将药材浸没，保 持浸泡一定时间。打开霍夫曼夹，从下端接收提取溶液(渗漉液)，渗漉速度一般为 3~6 ml/min(图 10-4)。 4. 即时检查：用合适的方法随时检查是否含有待提取的成分。 滴液漏斗 渗漉液 提取溶剂 渗漉筒 提取溶剂 药材 铁架台 接收瓶 固定铁圈 纱布 控制夹 图 10-4 渗漉装置示意图 (二)注意事项 1. 在渗漉提取中应始终保持提取溶剂完全浸没药材。 2. 当渗漉液中检查不出提取成分或低于要求时，即可认为提取结束。 六、索氏提取技术(Soxhlet Continuous Reflux) (一)操作技术及程序 1. 准备仪器及试剂：索氏提取器、铁架台、热源(如电热套或水浴)、有关试剂 等。 2. 安装仪器：选取合适规格的索氏提取器，按照由下到上的顺序安装固定好索 氏提取器。整套仪器应保持垂直(图 10-5)。 3. 处理样品及加样：将待提取的固体样品用滤纸包好，不能有漏缝，然后放入 索氏提取器的中心部分。样品滤纸包要用玻璃制重物压住，以免样品在溶剂浸泡时 浮起。 4. 加入提取溶剂：取适量提取溶剂放入溶剂瓶中，并加沸石。 5. 加热回流提取：打开冷凝水，调节热源进行加热回流提取。提取结束后要首 先关闭热源，待提取液完全冷却后再按由上到下的顺序拆卸仪器，并将提取液转移 到合适的容器中
第十章天然药物化学实验 8 …冷凝管 一索氏提取器 玻璃制压物一〔 溶剂蒸发管…月 装有样品的滤纸简~ 虹吸管 一溶剂瓶 图105索氏提取装置示意图 (二)注意事项 1,如果用非水溶剂提取则整套索氏提取器应无水干燥。 2.待提取样品放置的高度不应超过虹吸管高度。 3.加热回流前要在溶剂瓶中放沸石，溶剂使用量不应超过溶剂瓶体积的2/3。 加热前应检查整套仪器磨口连接部分是否密闭。●。。。。●。。。。。● 版爪黯烧小蜀爱常腕不殊量物限罩药所窗 000●0●●000●●●0●0●●●0●0●●0●0■ 第三节天然药物化学实验各论 实验1大黄中蒽醌苷元的提取、分离和蒽醒类化合 物的检识 一、实验目的与要求 1.掌握从大黄中提取、分离慈醒类化合物的原理及方法。 2。掌握硅胶柱色谱分离技术原理及仪器的规范操作。学会干法装柱。 3.掌握硅胶薄层TLC板的制备方法。 4.掌握醒类化合物的化学检识方法
第十章 天然药物化学实验 8 冷凝管 虹吸管 溶剂瓶 提取溶剂 溶剂蒸发管 装有样品的滤纸筒 索氏提取器 玻璃制压物 沸石 图 10-5 索氏提取装置示意图 (二)注意事项 1. 如果用非水溶剂提取则整套索氏提取器应无水干燥。 2. 待提取样品放置的高度不应超过虹吸管高度。 3. 加热回流前要在溶剂瓶中放沸石，溶剂使用量不应超过溶剂瓶体积的 2/3。 加热前应检查整套仪器磨口连接部分是否密闭。 第三节 天然药物化学实验各论 实验 1 大黄中蒽醌苷元的提取、分离和蒽醌类化合 物的检识 一、实验目的与要求 1. 掌握从大黄中提取、分离蒽醌类化合物的原理及方法。 2. 掌握硅胶柱色谱分离技术原理及仪器的规范操作。学会干法装柱。 3. 掌握硅胶薄层 TLC 板的制备方法。 4. 掌握蒽醌类化合物的化学检识方法
第十章天然药物化学实验 9 二、实验原理 大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，具有泻热通肠、凉血解毒、逐淤通 经之功效，用于泄下、健胃、清热、解毒等。自古以来，大黄在植物性泻下药中具 有重要作用，是一味很早就被各国药典所收载的植物药。大黄的种类繁多，优质大 黄是蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatumL.大黄(R.officinale Bail)及唐古特大黄 (R.1 angutium Maxim.et Regll)的根茎及根。大黄中含有多种游离的羟基蒽程类化合物 以及它们与糖所形成的苷，已知其中所含慈醒苷元主要有下列五种（结构见图10-6）： OH O OH R 图10-6大黄中主要总苷元结构 表10-1大黄所含游离蒽醒苷元的性质 R 名 品形 博点（℃） -HCOOH 大黄酸(Rhein) 黄色针品 318-320 ●●CH:●0H●●●大黄素(Emodin)●●●●橙色针品●●●256~257●●● 色细针品 ●●●H●CC)●●大黄酚(Chrysophaol)●●金色片状结品●●196●●● 大黄中蒽醒苷元，其结构不同，因而极性强弱也不同，极性强弱顺序为大黄酸、 大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚。 为提高游离的蒽醒苷元的提取收率，实验中先采用酸水解使大黄粉中苷元含量 增加、水解物再用乙醚进行提取、提取后再依据苷元的不同结构及极性采用柱色谱 的技术进行分离。 三、仪器与试药 1.实验仪器 玻璃色谱柱(21mm×200mm)及配套分液漏斗，100ml三角瓶，蒸发皿，试管， 玻璃板(5×20cm),色谱缸，滤纸，玻璃漏斗，铁架台，脱脂棉，250ml园底烧瓶， 球形冷凝管，恒温水浴锅，抽滤瓶，布氏漏斗，紫外灯。 2.药品及试剂 大黄粉（外购），硅胶（柱色谱用200~300目），硅胶G,乙酰（分析纯），石油醚 (60-90℃)，乙酸乙酯（分析纯），20%HS04,1%NaOH,0.5%CMC溶液，1%茜草素 乙醇溶液，0.5%醋酸镁甲醇溶液
第十章 天然药物化学实验 9 二、实验原理 大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，具有泻热通肠、凉血解毒、逐淤通 经之功效，用于泄下、健胃、清热、解毒等。自古以来，大黄在植物性泻下药中具 有重要作用，是一味很早就被各国药典所收载的植物药。大黄的种类繁多，优质大 黄是蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatum L.)、大黄(R. officinale Baill)及唐古特大黄 (R. tangutium Maxim.et Regll)的根茎及根。大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物 以及它们与糖所形成的苷，已知其中所含蒽醌苷元主要有下列五种(结构见图 10-6)： O O OH R2 OH R1 图 10-6 大黄中主要蒽醌苷元结构 表 10-1 大黄所含游离蒽醌苷元的性质 R1 R2 名 称 晶 形 熔 点( ) ℃ -H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320 -CH3 -OH 大黄素(Emodin) 橙色针晶 256~257 -H -CH2OH 芦荟大黄素(Aloe-emodin) 橙色细针晶 206~208 -CH3 -OCH3 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207 -H -CH3 大黄酚(Chrysophanol) 金色片状结晶 196 大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而极性强弱也不同，极性强弱顺序为大黄酸、 大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄酚。 为提高游离的蒽醌苷元的提取收率，实验中先采用酸水解使大黄粉中苷元含量 增加、水解物再用乙醚进行提取、提取后再依据苷元的不同结构及极性采用柱色谱 的技术进行分离。 三、仪器与试药 1. 实验仪器 玻璃色谱柱(21 mm × 200 mm)及配套分液漏斗，100 ml 三角瓶，蒸发皿，试管， 玻璃板(5 × 20 cm)，色谱缸，滤纸，玻璃漏斗，铁架台，脱脂棉，250 ml 园底烧瓶， 球形冷凝管，恒温水浴锅，抽滤瓶，布氏漏斗，紫外灯。 2. 药品及试剂 大黄粉(外购)，硅胶(柱色谱用 200~300 目)，硅胶 G，乙醚(分析纯)，石油醚 (60~90 ) ℃ ，乙酸乙酯(分析纯)，20％H2SO4，1%NaOH，0.5%CMC 溶液，1%茜草素 乙醇溶液，0.5%醋酸镁甲醇溶液
第十章天然药物化学实验 10 四、实验步骤 1.大黄中蒽醌苷元的提取与分离 取大黄粉5g置于250ml的圆底烧瓶中，再加入20%HS0,水溶液60ml,在 水浴上回流2小时.冷却后抽滤，滤饼用水洗至近中性后抽干，然后自然干燥或70℃ 左右烘干。滤饼干燥后，加入乙醚25ml浸泡，放置室温浸泡2~3天。称取200-300 目硅胶30g采用干法装柱。过滤乙醚浸泡提取液并将滤液慢慢滴加到盛有约1g硅 胶的蒸发皿中，水浴使乙醚挥干，得到完全干燥的吸附有待分离样品的硅胶，然后 将其加入到柱色谱的顶端，再加入少量保护陆胶或脱脂棉以防洗脱时神乱顶部的拌 样硅胶)。用石油醚/乙酸乙酯(7：3)为洗脱剂进行洗脱（配制洗脱剂200ml),待最初的 有色段向下移动到距硅胶柱底端约1cm左右时开始收集洗脱液，约5~7ml为一份， 至主要成分洗脱完全为止。使用硅胶TLC检查总提取物（乙醚浸泡液）和各份洗脱收 集液，展开剂为石油醚/乙酸乙酯(7：3)。根据TLC检查结果，将相同成分洗脱液合 并并水浴回收溶剂，即可得单体化合物。（注：提前制备TLC用硅胶G板4块） 2.蒽酯类化合物的检识反应 (I)碱液试验(Borntrager's反应)：取样品洗脱接收液及I%茜草素乙醇溶液各 经清2 干燥，喷05%乙酸铁甲醇溶液，于80℃加热5min,观案斑点颜色。销图 五、"思考颗。·····00000·000000000 1,大黄中总蔥程苷元的提取、分离原理各是什么？ 2.写出本实验中慈醒苷元的提取分离流程图。 3.以石油醚/乙酸乙酯(7：3)为展开剂对大黄中5个蒽醒苷元进行硅胶TLC检 识，其R值如何顺序？为什么？ Experiment 1 Extraction,Isolation and Detection of Anthraquinones from Rheum palmatum L. 1.Objective 1.To master extraction,isolation principles and methods of anthraquinones from Rheum palmatumL. 2.To master the separation principle and method of silica gel column chromatography,and to learn dry column-packing method
第十章 天然药物化学实验 10 四、实验步骤 1. 大黄中蒽醌苷元的提取与分离 取大黄粉 5 g 置于 250 ml 的圆底烧瓶中，再加入 20%H2SO4 水溶液 60 ml，在 水浴上回流 2 小时。冷却后抽滤，滤饼用水洗至近中性后抽干，然后自然干燥或 70℃ 左右烘干。滤饼干燥后，加入乙醚 25 ml 浸泡，放置室温浸泡 2~3 天。称取 200~300 目硅胶 30 g 采用干法装柱。过滤乙醚浸泡提取液并将滤液慢慢滴加到盛有约 1 g 硅 胶的蒸发皿中，水浴使乙醚挥干，得到完全干燥的吸附有待分离样品的硅胶，然后 将其加入到柱色谱的顶端，再加入少量保护硅胶或脱脂棉(以防洗脱时冲乱顶部的拌 样硅胶)。用石油醚/乙酸乙酯(7:3)为洗脱剂进行洗脱(配制洗脱剂 200 ml)，待最初的 有色段向下移动到距硅胶柱底端约 1 cm 左右时开始收集洗脱液，约 5~7 ml 为一份， 至主要成分洗脱完全为止。使用硅胶 TLC 检查总提取物(乙醚浸泡液)和各份洗脱收 集液，展开剂为石油醚/乙酸乙酯(7:3)。根据 TLC 检查结果，将相同成分洗脱液合 并并水浴回收溶剂，即可得单体化合物。(注：提前制备 TLC 用硅胶 G 板 4 块) 2. 蒽酯类化合物的检识反应 (1) 碱液试验(Bornträger’s 反应)：取样品洗脱接收液及 1% 茜草素乙醇溶液各 2 ml，分别加入 1%NaOH 水溶液 2 ml，振摇放置分层后，观察颜色变化。 (2) 乙酸镁试验：在一小张滤纸上滴加样品溶液及 1%茜草素乙醇溶液各 1 滴， 干燥，喷 0.5%乙酸镁甲醇溶液，于 80℃加热 5 min，观察斑点颜色。 五、思考题 1. 大黄中总蒽醌苷元的提取、分离原理各是什么？ 2. 写出本实验中蒽醌苷元的提取分离流程图。 3. 以石油醚/乙酸乙酯(7:3)为展开剂对大黄中 5 个蒽醌苷元进行硅胶 TLC 检 识，其 Rf 值如何顺序？为什么？ Experiment 1 Extraction, Isolation and Detection of Anthraquinones from Rheum palmatum L. 1. Objective 1. To master extraction, isolation principles and methods of anthraquinones from Rheum palmatum L. 2. To master the separation principle and method of silica gel column chromatography, and to learn dry column-packing method
