山西农业大学：《园艺植物病理学》课程教学资源（大纲教案）园艺植物病理学实验.doc_大学文库

《园艺植物病理学》实验实验一鞭毛菌亚门、子囊菌亚门病原真菌及其所致病害一、实验目的和要求熟悉并掌握病原真菌镜检方法和技术：通过实验要求了解鞭毛菌、子囊菌亚门真菌的主要形态特征，掌握与植物病害有关重要属的形态特征、分类依据及所致病害的症状特点，同时学习使用检索表来鉴定病菌，为分类鉴定打下初步基础二、实验材料显微镜、擦镜纸、小块纱布、装有浮载剂的滴瓶、挑针、刀片、小垫板、载玻片、盖玻片等。有关病害的标本、挂图、幻灯片。有关鞭毛菌、子囊菌所致病害标本、纯培养物及永久玻片标本。三、实验内容 1.鞭毛菌亚门卵菌纲霜霉目许多霜霉目真菌是重要的植物病原菌。 (1)腐霉属(Pythium)片瓜果腐霉(P.aphanidermatum)可以引起多种经济作物幼苗的猝倒病和果实的绵腐病。观察黄瓜病果上的白色菌丝体。将生长旺盛的小块菌丝体移至清水中20℃培养2448小时，菌丝项端即形成大量游动孢子囊，用针挑取在清水中培养过的菌丝，观察腐霉菌的游动孢子囊。注意区分菌丝、孢囊梗和孢子囊。观察泡囊及游动孢子的形态特征。 (2)疫霉属(Phytophthora):致病疫霉(P.infestans)引起晚疫病。观察受害马铃薯叶片的症状。当气候潮湿时，在病叶背面常出现灰白色霜状霉层，是病菌什么形态？挑取少许霉状物在显微镜下检查，观察孢子囊是什么形状？孢囊梗和菌丝的形态有何不同？ (3)霜霉属(Peronospora):十字花科植物霜霉菌(Peronospora parasitica)为害油菜和其它十字花科蔬菜，引起霜霉病。观察十字花科霜霉菌为害油菜叶片正面和背面及花序的症状。取白菜霜霉病叶片，用挑针挑取少量在叶背面的霜霉，制成临时玻片后镜检。注意观察孢囊梗的分枝和顶端形态。参照教科书和挂图，对照下列检索表，制片观察各种霜霉病菌的临时玻片或病原菌永久玻片，掌握霜霉科几个常见属的主要形态特征及所致病害症状。霜霉科主要属的检索表 1.孢囊梗粗壮，上部为重复2~3次的不规则二叉分枝 .指梗霉属(Sclerospora) 1.孢囊梗较细。 2

《园艺植物病理学》实验实验一鞭毛菌亚门、子囊菌亚门病原真菌及其所致病害一、实验目的和要求熟悉并掌握病原真菌镜检方法和技术；通过实验要求了解鞭毛菌、子囊菌亚门真菌的主要形态特征，掌握与植物病害有关重要属的形态特征、分类依据及所致病害的症状特点，同时学习使用检索表来鉴定病菌，为分类鉴定打下初步基础。二、实验材料显微镜、擦镜纸、小块纱布、装有浮载剂的滴瓶、挑针、刀片、小垫板、载玻片、盖玻片等。有关病害的标本、挂图、幻灯片。有关鞭毛菌、子囊菌所致病害标本、纯培养物及永久玻片标本。三、实验内容 1. 鞭毛菌亚门卵菌纲霜霉目许多霜霉目真菌是重要的植物病原菌。（1）腐霉属（Pythium）：瓜果腐霉（P．aphanidermatum）可以引起多种经济作物幼苗的猝倒病和果实的绵腐病。观察黄瓜病果上的白色菌丝体。将生长旺盛的小块菌丝体移至清水中 20℃培养 24-48 小时，菌丝顶端即形成大量游动孢子囊，用针挑取在清水中培养过的菌丝，观察腐霉菌的游动孢子囊。注意区分菌丝、孢囊梗和孢子囊。观察泡囊及游动孢子的形态特征。（2）疫霉属（Phytophthora）：致病疫霉（P.infestans）引起晚疫病。观察受害马铃薯叶片的症状。当气候潮湿时，在病叶背面常出现灰白色霜状霉层，是病菌什么形态？挑取少许霉状物在显微镜下检查，观察孢子囊是什么形状？孢囊梗和菌丝的形态有何不同？（3）霜霉属（Peronospora）：十字花科植物霜霉菌（Peronospora parasitica）为害油菜和其它十字花科蔬菜，引起霜霉病。观察十字花科霜霉菌为害油菜叶片正面和背面及花序的症状。取白菜霜霉病叶片，用挑针挑取少量在叶背面的霜霉，制成临时玻片后镜检。注意观察孢囊梗的分枝和顶端形态。参照教科书和挂图，对照下列检索表，制片观察各种霜霉病菌的临时玻片或病原菌永久玻片，掌握霜霉科几个常见属的主要形态特征及所致病害症状。霜霉科主要属的检索表 1．孢囊梗粗壮，上部为重复23 次的不规则二叉分枝…………………指梗霉属（Sclerospora） 1．孢囊梗较细……………………………………………………………………………………..2

2．孢囊梗单轴分枝，小枝与主轴成直角，分枝末端平钝……………单轴霉属（Plasmopara） 2．孢囊梗成锐角二叉分枝……………………………………………………………………….3 3 ．分枝两侧不对称，顶端尖锐 …………………………………………… 假霜霉属（Pseudoperonospora） 3．分枝两侧对称………………………………………………………………………………….4 4．分枝顶端尖细…………… ……………………………………………..霜霉属（Peronospora） 4．分枝顶部膨大，具3 一4 个指状周生小梗…………………………….盘梗霉属（Bremia）（4）白锈菌属（Albugo）: 观察白锈病症状特征。制作临时玻片镜检苋菜白锈病菌（Albugo bliti）或白菜白锈病菌（Albugo candida）的孢子囊堆和孢子囊梗的形态特征，以及孢子囊的排列方式。 2. 子囊菌亚门 2.1 核菌纲（1）白粉菌目：观察白粉病发病初期和发病后期标本症状的特点，叶片上的白色或灰白色粉状物以及黑色点状物分别是病原菌的无性阶段和有性阶段。白粉菌分属的主要依据是子囊果内子囊数目及子囊果表面附属丝的形态。显微镜下观察玻片标本：剑叶旋花白粉病（白粉菌属）、凤仙花白粉病（单丝壳属）、槐树白粉病（叉丝壳属）、梨白粉病（球针壳属）。白粉菌主要属检索表 1．闭囊壳内多个子囊………………………………………………………………………3 1．闭囊壳内单个子囊………………………………………………………………………2 2．附属丝菌丝状………………………………………………单囊壳属（Sphaerotheca） 2.附属丝刚直、较粗，顶端二叉状重复分枝，分枝末端螺旋状卷曲………..叉丝单囊壳属（Podosphaera） 3．附属丝非菌丝状………………………………………………………………………..5 3. 附属丝菌丝状，发育不良…………………………………………………………….. 4 4．附属丝发育不良………………………………………布氏白粉菌属（Blumeria） 4．附属丝发育良好………………………………………………白粉菌属（Erysiphe） 5．附属丝刚直，基部膨大,顶端尖锐………………………………球针壳属（Phyllactinia） 5．附属丝基部不膨大……………………………………………………………………… 6 6．附属丝粗、刚直，顶端二叉状重复分枝，分枝末端卷曲…………………叉丝壳属（Microsphaera） 6．附属丝不分枝，顶端卷曲……………………………………………………钩丝壳属（Uncinula）

(2)球壳菌目：镜检苹果树腐烂病（黑腐皮壳属）永久玻片。注意子囊壳的形态和着生位置，子囊及子囊孢子的形态如何？如何排列？再观察苹果树腐烂病病害标本，有什么症状特点？注意病斑上所生黑色小点为病菌子座，子座内生分生孢子器，为该菌的无性阶段，将在半知菌亚门真菌的实验中进行观察。 2.2腔菌纲取葱叶枯菌(M$p.)切片，置显微镜下观察子囊腔、子囊、子囊孢子的形态特征 2.3盘菌纲镜检油菜菌核病（核盘菌属）永久玻片。观察油菜菌核病病害标本症状特征，注意菌核的形态、色泽及着生位置。四、作业 1.霜霉菌分属的主要依据是什么？ 2.子囊菌亚门分纲的主要依据是什么？ 3.白粉属和单丝壳属的主要区别是什么？ 4.绘制4个病原形态图。实验二担子菌亚门病原真菌及其所致病害 ·、实验目的和要求认识担子菌亚门中主要病原菌的形态特征及其所致病害的症状。掌握其分类依据，尤其是锈菌目、黑粉菌目各主要属的形态特征和典型生活史。了解担子菌亚门真菌子实体的复杂性。二、实验材料有关病害标本、病原菌永久玻片和各种类型的子实体标本。显微镜、擦镜纸、乳酚油、挑针、载玻片、盖玻片、小纱布。三、实验内容冬孢菌纲 1.锈菌目 (l)柄锈菌属(Puccinia):观察小麦条锈(Puccinia striformis)、叶锈(Puccinia recondita) 和杆锈病(Puccinia graminis f.sp..ritici)症状，注意病斑的颜色、形状和大小；受害部位是局部性的还是全株性的。制片镜检，注意观察冬孢子和夏孢子的形态特征，及它们在孢子堆中的着生情况。 (2)单胞锈菌属(Uromyces):观察豇豆锈菌(U.vignae)在豇豆的叶、茎、荚上的症状。制片镜检病原菌，注意冬孢子和夏孢子的形态以及颜色变化。 (3)胶锈菌属(Gymnosporangium):观察梨胶锈菌(G.haraeanum)所引起的木瓜或贴

（2）球壳菌目：镜检苹果树腐烂病（黑腐皮壳属）永久玻片。注意子囊壳的形态和着生位置,子囊及子囊孢子的形态如何？如何排列？再观察苹果树腐烂病病害标本，有什么症状特点？注意病斑上所生黑色小点为病菌子座，子座内生分生孢子器，为该菌的无性阶段，将在半知菌亚门真菌的实验中进行观察。 2.2 腔菌纲取葱叶枯菌（M. sp.）切片，置显微镜下观察子囊腔、子囊、子囊孢子的形态特征 2.3 盘菌纲镜检油菜菌核病（核盘菌属）永久玻片。观察油菜菌核病病害标本症状特征，注意菌核的形态、色泽及着生位置。四、作业 1. 霜霉菌分属的主要依据是什么？ 2. 子囊菌亚门分纲的主要依据是什么？ 3. 白粉属和单丝壳属的主要区别是什么？ 4. 绘制 4 个病原形态图。实验二担子菌亚门病原真菌及其所致病害一、实验目的和要求认识担子菌亚门中主要病原菌的形态特征及其所致病害的症状。掌握其分类依据，尤其是锈菌目、黑粉菌目各主要属的形态特征和典型生活史。了解担子菌亚门真菌子实体的复杂性。二、实验材料有关病害标本、病原菌永久玻片和各种类型的子实体标本。显微镜、擦镜纸、乳酚油、挑针、载玻片、盖玻片、小纱布。三、实验内容冬孢菌纲 1．锈菌目（1）柄锈菌属（Puccinia）：观察小麦条锈（Puccinia striiformis）、叶锈(Puccinia recondita) 和杆锈病(Puccinia graminis f.sp.tritici)症状，注意病斑的颜色、形状和大小；受害部位是局部性的还是全株性的。制片镜检，注意观察冬孢子和夏孢子的形态特征，及它们在孢子堆中的着生情况。（2）单胞锈菌属（Uromyces）：观察豇豆锈菌（U.vignae）在豇豆的叶、茎、荚上的症状。制片镜检病原菌，注意冬孢子和夏孢子的形态以及颜色变化。（3）胶锈菌属（Gymnosporangium）：观察梨胶锈菌（G.haraeanum）所引起的木瓜或贴

梗海棠锈病症状以及它们在转主寄主龙柏上的冬孢子角形态。徒手切片或取永久玻片镜检，观察性孢子器、性孢子、授精丝和锈孢子器、锈孢子的形态特征。挑取桧柏上吸水膨大了的冬孢子堆（角）镜检，观察冬孢子的萌芽、担子和担孢子的形态特征以及萌发孔的位置 (4)层锈菌属(Phakopsora):观察枣锈病菌永久玻片，观察冬孢子排列方式。 (5)多胞锈菌属(Phragmidium):观察蔷薇多胞锈菌(P.rosaemultiflorae)危害蔷薇及月季病害标本症状，并取蔷薇多胞锈菌的永久玻片镜检，观察冬孢子的形态特征。 (6)栅锈菌属(Melampsora):松柳栅锈菌(M.larici-epitea)危害柳树。取其永久玻片镜检，观察冬孢子的形态特点。 2.黑粉菌日 (1)黑粉菌属(Ustilago):观察小麦散黑穗病(U.muda)和玉米瘤黑粉(UJ.maydis) 病标本的症状特征。挑取病组织上的冬孢子堆制片观察冬孢子的形态特征。分别取两种冬孢子萌发，镜检观察担子和担孢子形成情况。注意：小麦散黑粉病菌的冬孢子萌发后产生侵入丝，不产生担孢子。 (2)条黑粉菌属(Urocystis):观察小麦秆黑粉病(U.tritici)症状，挑取表皮下的冬孢子粉制片观察冬孢子的形态特征。四、作业 1,描述锈菌生活史的复杂性。 2.绘制4个病原形态图。实验三半知菌亚门病原真菌及其所致病害一、实验目的和要求通过对半知菌中各种类型代表菌的观察，了解半知菌的分类依据，掌握半知菌的主要属的形态特征及其所致病害的症状特点，进一步学习和训练徒手切片技能。二、实验材料有关病害标本、病原菌永久玻片和各种类型的子实体标本。显微镜、擦镜纸、乳酚油、挑针、载玻片、盖玻片、小纱布。三、实验内容 I丝孢纲(Hyphomnycetes) (1)粉孢属(Oidium):引起植物白粉病。观察禾草白粉病(Oidium monilioides)标本的症状。挑取少许粉状物制片镜检观察，注意分生孢子梗和分生孢子的形态及分生孢子的排列方式。 (2)青霉属(Penicillium):柑桔青霉菌(P.italicum)是柑桔贮藏和运输期中的重要病

梗海棠锈病症状以及它们在转主寄主龙柏上的冬孢子角形态。徒手切片或取永久玻片镜检，观察性孢子器、性孢子、授精丝和锈孢子器、锈孢子的形态特征。挑取桧柏上吸水膨大了的冬孢子堆（角）镜检，观察冬孢子的萌芽、担子和担孢子的形态特征以及萌发孔的位置。（4）层锈菌属（Phakopsora）：观察枣锈病菌永久玻片，观察冬孢子排列方式。（5）多胞锈菌属（Phragmidium）：观察蔷薇多胞锈菌（P.rosaemultiflorae）危害蔷薇及月季病害标本症状，并取蔷薇多胞锈菌的永久玻片镜检，观察冬孢子的形态特征。（6）栅锈菌属（Melampsora）：松柳栅锈菌（M．larici-epitea）危害柳树。取其永久玻片镜检，观察冬孢子的形态特点。 2．黑粉菌目（1）黑粉菌属（Ustilago）：观察小麦散黑穗病（U．nuda）和玉米瘤黑粉（U.maydis）病标本的症状特征。挑取病组织上的冬孢子堆制片观察冬孢子的形态特征。分别取两种冬孢子萌发，镜检观察担子和担孢子形成情况。注意：小麦散黑粉病菌的冬孢子萌发后产生侵入丝，不产生担孢子。（2）条黑粉菌属（Urocystis）：观察小麦秆黑粉病（U．tritici）症状，挑取表皮下的冬孢子粉制片观察冬孢子的形态特征。四、作业 1.描述锈菌生活史的复杂性。 2.绘制 4 个病原形态图。实验三半知菌亚门病原真菌及其所致病害一、实验目的和要求通过对半知菌中各种类型代表菌的观察，了解半知菌的分类依据，掌握半知菌的主要属的形态特征及其所致病害的症状特点，进一步学习和训练徒手切片技能。二、实验材料有关病害标本、病原菌永久玻片和各种类型的子实体标本。显微镜、擦镜纸、乳酚油、挑针、载玻片、盖玻片、小纱布。三、实验内容 1 丝孢纲（Hyphornycetes）（1）粉孢属（Oidium）：引起植物白粉病。观察禾草白粉病（Oidium monilioides ）标本的症状。挑取少许粉状物制片镜检观察，注意分生孢子梗和分生孢子的形态及分生孢子的排列方式。（2）青霉属（Penicillium）：柑桔青霉菌（P．italicum）是柑桔贮藏和运输期中的重要病

原菌。观察由青霉菌引起的柑橘、苹果、梨等果腐症状特点。挑取发生果腐病水果表面白色菌丝附近的青色霉层制片，观察青霉菌分生孢子梗及孢子，注意观察分生孢子梗的分枝和顶端产孢细胞的形态特征。 (3)尾孢属(Ce心ospora):仔细观察由尾孢属真菌引起的花生黑斑病(C.personata）的症状特点。取花生黑斑病叶片做徒手切片，或取花生黑斑病菌永久玻片镜检观察子座、分生孢子梗和分生孢子的形态特征。注意观察分生孢子梗着生的方式及其顶端的形态、分生孢子梗和分生孢子的颜色及分生孢子的形状及分隔情况。 (4)镰孢属(Fusarium):观察由棉花枯菱病菌(F.oxysporum f.sp.vasinfectum)、小麦赤霉病菌(E.graminearum)和水稻恶菌病菌(F.moniliforme)引起的植物病害症状特点。观察上述三种病原菌培养物的形态，注意培养物（基）的颜色变化。挑取培养物制片观察大型分生孢子（镰刀形，多细胞，基部有时有一显著的突起，称足胞）和小型分生孢子（单胞，无色，椭圆形)，观察有无分生孢子座。有的镰孢菌还产生一种厚壁孢子（厚垣孢子），是病菌在不良条件下形成的休眠孢子，抵抗不良环境的能力强。观察菌丝上或大型分生孢子上有无厚垣孢子。 (5)轮枝孢属(erticillium):大丽轮枝菌(V.dahliae)是引起棉花黄萎病的病原菌。观察人工培养的大丽轮枝菌菌落和微菌核形态特征，用刀片将菌丝块切成一薄片，侧放在载玻片上，置于低倍镜下镜检，调节微调可见到无色分生孢子梗，主轴分成几节，节处有2至多个分枝，每个分枝和主轴的项端着生有多个分生孢子，形成分生孢子球。分生孢子单细胞，无色，长椭圆形。观察棉花黄萎病标本症状，注意维管束变色，并与棉花枯萎病维管束变色对比观察。 (6)链格孢属(Alternaria):茄链格孢(A.solani)引起马铃薯和番茄早疫病，观察早疫病病叶上的褐色同心轮纹病斑，病斑上有黑色霉状物。选择有褐色同心轮纹病斑处，徒手切片制成临时玻片镜检。观察分生孢子梗和分生孢子的形态、颜色。注意分生孢子顶端有喙状细胞。 2腔孢纲(Coelomycetes) (1)炭疽菌属(Colletotrichum):观察棉花炭疽病(C.gossypii)、辣椒炭疽病(C.piperatum)、豆类炭疽病(C.truncatum)的病害标本症状特征。比较症状类型、病斑特点及病征。选取任一炭疽病材料做徒手切片，镜检。注意有无刚毛？刚毛的颜色如何？刚毛有无分隔？如何将刚毛与植物的表皮毛区分开？分生孢子盘的形状、分生孢子梗的形状和分布？分生孢子的颜色和形状？分生孢子有无分隔？ (2)叶点霉属(Phyllosticta):该属和茎点霉属在形态上相似，比较难以区分。传统上把寄生植物茎上的，产生分生孢子器，具有小型、无色单细胞分生孢子的真菌鉴定为茎点霉属

原菌。观察由青霉菌引起的柑橘、苹果、梨等果腐症状特点。挑取发生果腐病水果表面白色菌丝附近的青色霉层制片，观察青霉菌分生孢子梗及孢子，注意观察分生孢子梗的分枝和顶端产孢细胞的形态特征。（3）尾孢属（Cercospora）：仔细观察由尾孢属真菌引起的花生黑斑病（C. personata）的症状特点。取花生黑斑病叶片做徒手切片，或取花生黑斑病菌永久玻片镜检观察子座、分生孢子梗和分生孢子的形态特征。注意观察分生孢子梗着生的方式及其顶端的形态、分生孢子梗和分生孢子的颜色及分生孢子的形状及分隔情况。（4）镰孢属（Fusarium）：观察由棉花枯萎病菌（F．oxysporum f.sp.vasinfectum）、小麦赤霉病菌（F.graminearum）和水稻恶菌病菌（F．moniliforme）引起的植物病害症状特点。观察上述三种病原菌培养物的形态，注意培养物（基）的颜色变化。挑取培养物制片观察大型分生孢子（镰刀形，多细胞，基部有时有一显著的突起，称足胞）和小型分生孢子（单胞，无色，椭圆形），观察有无分生孢子座。有的镰孢菌还产生一种厚壁孢子（厚垣孢子），是病菌在不良条件下形成的休眠孢子，抵抗不良环境的能力强。观察菌丝上或大型分生孢子上有无厚垣孢子。（5）轮枝孢属(Verticillium)：大丽轮枝菌（V．dahliae）是引起棉花黄萎病的病原菌。观察人工培养的大丽轮枝菌菌落和微菌核形态特征，用刀片将菌丝块切成一薄片，侧放在载玻片上，置于低倍镜下镜检，调节微调可见到无色分生孢子梗，主轴分成几节，节处有 2 至多个分枝，每个分枝和主轴的顶端着生有多个分生孢子，形成分生孢子球。分生孢子单细胞，无色，长椭圆形。观察棉花黄萎病标本症状，注意维管束变色，并与棉花枯萎病维管束变色对比观察。（6）链格孢属（Alternaria）：茄链格孢（A．solani）引起马铃薯和番茄早疫病，观察早疫病病叶上的褐色同心轮纹病斑，病斑上有黑色霉状物。选择有褐色同心轮纹病斑处，徒手切片制成临时玻片镜检。观察分生孢子梗和分生孢子的形态、颜色。注意分生孢子顶端有喙状细胞。 2 腔孢纲（Coelomycetes）（1）炭疽菌属（Colletotrichum）：观察棉花炭疽病（C.gossypii）、辣椒炭疽病（C. piperatum）、豆类炭疽病（C.truncatum）的病害标本症状特征。比较症状类型、病斑特点及病征。选取任一炭疽病材料做徒手切片，镜检。注意有无刚毛？刚毛的颜色如何？刚毛有无分隔？如何将刚毛与植物的表皮毛区分开？分生孢子盘的形状、分生孢子梗的形状和分布？分生孢子的颜色和形状？分生孢子有无分隔？（2）叶点霉属（Phyllosticta）：该属和茎点霉属在形态上相似，比较难以区分。传统上把寄生植物茎上的，产生分生孢子器，具有小型、无色单细胞分生孢子的真菌鉴定为茎点霉属

把寄生植物叶片的该类真菌鉴定为叶点霉属。取栀子花叶斑病叶片，观察症状特征，并做徒手切片，镜检，观察病菌的分生孢子器、分生孢子的形态特征。 (3)大茎点菌属(Macrophoma):观察大叶黄杨病叶材料，作徒手切片，镜检。观察分生孢子器、分生孢子梗和分生孢子的形态特征，并与茎点霉属和叶点霉属相比较，注意比较分生孢子的大小。大茎点菌属分生孢子大小一般超过15um。苹果轮纹病菌(M.kawatsukai.)主要为害苹果、梨的枝干及果实，取切片镜检病原菌的分生孢子器、分生孢子梗、分生孢子。观察标本症状。 (4)拟茎点霉属(Phomopsis):取茄褐纹拟茎点莓(P.vexans)永久玻片或取茄褐纹病材料徒手切片，镜检观察分生孢子器内产生的两种分生孢子分别是什么形状？注意只有观察到线形分生孢子才能确定为拟茎点霉属。观察茄子褐纹病、芦笋茎枯病症状特点。四、作业 1.如何区分分生孢子器和子囊壳？ 2.绘制4个病原形态图。实验四植物病原细菌及其所致病害一、实验目的和要求掌握植物细菌病害的分类鉴定需要特有的实验技术，熟悉植物细菌病害症状类型和病原细菌的基本形态，学习植物细菌病害简易诊断方法及病原细菌初步鉴定的程序和技术，为以后植物细菌病害的正确诊断和病原细菌的分类鉴定打下良好的基础。二、实验材料有关病害标本、照片或新鲜材料。病原菌永久玻片和各种类型的子实体标本。显微镜、擦镜纸、乳酚油、挑针、载玻片、盖玻片、小纱布。三、实验内容 1.植物病原原核生物引起病害的症状类型 ()坏死、斑点、叶枯、穿孔和溃疡：详细观察并记录黄瓜角斑病、水稻条斑病、水稻白叶枯病、马铃薯疮痂、桃细菌性穿孔病和桑疫病的病状与病征。 (2)腐烂：观察大白菜软腐或马铃薯软腐病的症状特征，辨识特殊的臭味。 (③)萎蔫：观察番茄青枯病和马铃薯环腐病症状标本。注意观察纵剖番茄茎秆和横切马铃薯薯块的维管束变色情况。 (4)瘤肿或畸形：观察冠瘿病菌(A.tumefaciens)危害桃树或法国梧桐根冠部引起的冠瘿病。观察发根病菌(A.hizogenes)侵染苹果树木根部所引起的发根病标本。观察泡桐丛枝病，腋芽大量萌发，侧枝丛生：观察枣疯病，芽大量萌发呈丛枝状，花器退化，萼片、花瓣变成叶片状

把寄生植物叶片的该类真菌鉴定为叶点霉属。取栀子花叶斑病叶片，观察症状特征，并做徒手切片，镜检，观察病菌的分生孢子器、分生孢子的形态特征。（3）大茎点菌属（Macrophoma）：观察大叶黄杨病叶材料，作徒手切片,镜检。观察分生孢子器、分生孢子梗和分生孢子的形态特征，并与茎点霉属和叶点霉属相比较，注意比较分生孢子的大小。大茎点菌属分生孢子大小一般超过 15m。苹果轮纹病菌（M.kawatsukai）主要为害苹果、梨的枝干及果实，取切片镜检病原菌的分生孢子器、分生孢子梗、分生孢子。观察标本症状。（4）拟茎点霉属（Phomopsis）：取茄褐纹拟茎点霉（P.vexans）永久玻片或取茄褐纹病材料徒手切片，镜检观察分生孢子器内产生的两种分生孢子分别是什么形状？注意只有观察到线形分生孢子才能确定为拟茎点霉属。观察茄子褐纹病、芦笋茎枯病症状特点。四、作业 1. 如何区分分生孢子器和子囊壳？ 2. 绘制 4 个病原形态图。实验四植物病原细菌及其所致病害一、实验目的和要求掌握植物细菌病害的分类鉴定需要特有的实验技术，熟悉植物细菌病害症状类型和病原细菌的基本形态，学习植物细菌病害简易诊断方法及病原细菌初步鉴定的程序和技术，为以后植物细菌病害的正确诊断和病原细菌的分类鉴定打下良好的基础。二、实验材料有关病害标本、照片或新鲜材料。病原菌永久玻片和各种类型的子实体标本。显微镜、擦镜纸、乳酚油、挑针、载玻片、盖玻片、小纱布。三、实验内容 1. 植物病原原核生物引起病害的症状类型（1）坏死、斑点、叶枯、穿孔和溃疡：详细观察并记录黄瓜角斑病、水稻条斑病、水稻白叶枯病、马铃薯疮痂、桃细菌性穿孔病和桑疫病的病状与病征。（2）腐烂：观察大白菜软腐或马铃薯软腐病的症状特征，辨识特殊的臭味。 (3) 萎蔫：观察番茄青枯病和马铃薯环腐病症状标本。注意观察纵剖番茄茎秆和横切马铃薯薯块的维管束变色情况。（4）瘤肿或畸形：观察冠瘿病菌（A．tumefaciens）危害桃树或法国梧桐根冠部引起的冠瘿病。观察发根病菌（A．rhizogenes）侵染苹果树木根部所引起的发根病标本。观察泡桐丛枝病，腋芽大量萌发，侧枝丛生；观察枣疯病，芽大量萌发呈丛枝状，花器退化，萼片、花瓣变成叶片状

2. 植物病原细菌形态观察和种类鉴定 2.1 植物病原细菌培养形状观察取培养皿中培养的黄瓜角斑病菌、马铃薯环腐病菌，茄青枯病菌和白菜软腐病菌等，注意观察菌落颜色、大小、质地，是否产生荧光色素等，和植物病原真菌培养菌落有什么根本性的不同? 2.2 革兰氏染色法（1）在干净的载玻片上用移菌环移菌少许涂片，每人在同一张玻片的两端分别涂上 BS 和 XO 或 CS 和 RS 两个菌株，做好标记。晾干后在火焰上通过两次，固定涂片。（2）结晶紫染色一分钟。（3）水洗数秒钟，甩去余下的水，并轻轻吸干（或用碘液冲去余下的水）。（4）碘液处理一分钟。（5）水洗数秒钟，用吸水纸吸干，但不能损害菌苔涂片。（6）用 95％酒精褪色。将载玻片斜放在白纸上，从上端滴下酒精，使其顺着整个载玻片均匀地向下流，直到洗下的酒精无色为止。褪色时间为 10－20 秒，不能超过 30 秒，否则阳性菌也可能被褪色。（7）水洗数秒钟，吸干。（8）滴加复染剂复染 10 秒钟。（9）水洗，吸干，镜检，革兰氏阳性菌呈紫色或蓝黑色；阴性菌呈红色。四、作业 1. 记录革兰氏染色实验结果，描述观察到的细菌的形态。 2. 夏季菜园瓜、果出现萎蔫，怎样区分这是真菌病害还是细菌病害？实验五植物病原线虫的分离和观察一、实验目的和要求熟练掌握病原线虫的基本形态特征及其所致病害的症状特点。学习分离和鉴定主要植物病原线虫的方法。二、实验材料显微镜、载玻片、盖玻片、筛子、竹挑针、单面刀片、蒸馏水、乳酚油及棉兰乳酚油或计数皿、酒精灯、火柴、擦镜纸、吸水纸、漏斗、铁夹、橡皮管、铁架台、铝锅、网筛（180 目）、烧杯、滤纸、小铁铲、玻璃棒。三、实验内容 1 线虫形态的观察

(1)粒线虫属(Anguina）观察由小麦粒线虫危害小麦引起的症状，注意小麦受害部位，受害的茎叶有无扭曲或畸形？虫瘘的外形与麦粒有什么区别？取虫瘿一个，用刀片切开或挑针挑破，挑取虫瘿内部的白色棉絮状物于载玻片上的水滴中盖上盖玻片，置于低倍镜下镜检，可见到成虫、卵和幼虫。雌虫、雄虫均为线形，雌虫体形较雄虫粗大，往往卷曲，体内的卵巢顶端弯曲。雄虫昆部有交合刺，交合伞几乎包到尾尖。 (2)茎线虫属(Ditylenchus) 观察甘薯茎线虫(D.destructor)危害甘薯的症状，剖开病薯可见到条点状褐色或白粉干腐症状，挑取少量组织于载玻片的水滴中，加盖玻片镜检，可见到卵、幼虫、成虫等各个虫态。甘薯茎线虫雌雄同型，都是线形，雌虫稍粗大，尾端尖细。注意口针、食道球形态，肠和卵巢平行，单卵巢，卵单行排列。雄虫较细小，尾部可见交合刺、交合伞，交合伞后端距虫体末端有一定间隔。因虫体很小，观察内部器官需用高倍镜。观察示范镜下的雄虫尾部形态。 (3)胞囊线虫属(Heterodera) 观察大豆胞囊线虫(H.glycines)的危害症状。挑取病根上的雌虫，肉眼可见到线虫头部已钻入寄主组织，虫体外露，多为柠檬形，黄褐色。制片镜检，大豆胞囊线虫的卵大多不排出体外，整个雌虫体后期变成颜色深褐的卵囊，特称为胞囊（少数可排部分卵于体尾的胶质囊内）。 (4)根结线虫属(Meloidogyne) 观察蔬菜根结线虫(M.sp.)或花生、茄科植物根结线虫危害症状，镜检观察雌虫虫体形态。根结线虫属分种的主要依据是：会阴花纹的形态特征，胞囊线虫分种是根据阴门椎周围的形态特征加以区别的。 2.线虫分离技术：采用改良后的布氏漏斗法。 (1)在大豆根部取大约500克土样 (2)将土样在铝锅中用自来水溶解，待其澄清。 (3)将上清液在180目网筛上过滤，下层泥沙继续加水溶解，再过筛，如此重复4次。 (4)将网筛上方的物质用水冲洗到小烧杯中 (⑤)漏斗下方连一个10cm左右的橡皮管，将小烧杯中的冲洗液倒入漏斗中 (6)24h后，打开铁夹，流出少量水，收集于管内。 (7)镜检。 3线虫的杀死、固定线虫活体的形态特征是线虫工作者初步区分线虫种类的一个重要指标，但是要进一步区分和鉴别它们，必须经过杀死、固定以后才能作仔细的分辨，有的还要经过局部加工处理

（1）粒线虫属（Anguina）观察由小麦粒线虫危害小麦引起的症状，注意小麦受害部位，受害的茎叶有无扭曲或畸形？虫瘿的外形与麦粒有什么区别？取虫瘿一个，用刀片切开或挑针挑破，挑取虫瘿内部的白色棉絮状物于载玻片上的水滴中盖上盖玻片，置于低倍镜下镜检，可见到成虫、卵和幼虫。雌虫、雄虫均为线形，雌虫体形较雄虫粗大，往往卷曲，体内的卵巢顶端弯曲。雄虫昆部有交合刺，交合伞几乎包到尾尖。（2）茎线虫属（Ditylenchus）观察甘薯茎线虫（D．destructor）危害甘薯的症状，剖开病薯可见到条点状褐色或白粉干腐症状，挑取少量组织于载玻片的水滴中，加盖玻片镜检，可见到卵、幼虫、成虫等各个虫态。甘薯茎线虫雌雄同型，都是线形，雌虫稍粗大，尾端尖细。注意口针、食道球形态，肠和卵巢平行，单卵巢，卵单行排列。雄虫较细小，尾部可见交合刺、交合伞，交合伞后端距虫体末端有一定间隔。因虫体很小，观察内部器官需用高倍镜。观察示范镜下的雄虫尾部形态。（3）胞囊线虫属（Heterodera）观察大豆胞囊线虫（H．glycines）的危害症状。挑取病根上的雌虫，肉眼可见到线虫头部已钻入寄主组织，虫体外露，多为柠檬形，黄褐色。制片镜检，大豆胞囊线虫的卵大多不排出体外，整个雌虫体后期变成颜色深褐的卵囊，特称为胞囊（少数可排部分卵于体尾的胶质囊内）。（4）根结线虫属（Meloidogyne）观察蔬菜根结线虫（M．spp．）或花生、茄科植物根结线虫危害症状，镜检观察雌虫虫体形态。根结线虫属分种的主要依据是：会阴花纹的形态特征，胞囊线虫分种是根据阴门椎周围的形态特征加以区别的。 2. 线虫分离技术：采用改良后的布氏漏斗法。 (1) 在大豆根部取大约 500 克土样 (2) 将土样在铝锅中用自来水溶解，待其澄清。 (3) 将上清液在 180 目网筛上过滤，下层泥沙继续加水溶解，再过筛，如此重复 4 次。 (4) 将网筛上方的物质用水冲洗到小烧杯中 (5) 漏斗下方连一个 10cm 左右的橡皮管，将小烧杯中的冲洗液倒入漏斗中 (6) 24h 后，打开铁夹，流出少量水，收集于管内。 (7) 镜检。 3 线虫的杀死、固定线虫活体的形态特征是线虫工作者初步区分线虫种类的一个重要指标，但是要进一步区分和鉴别它们，必须经过杀死、固定以后才能作仔细的分辨，有的还要经过局部加工处理