影响尿生成的因素和 肾缺血再灌注损伤 基础医学院 实验教学管理中心 ●●●●
影响尿生成的因素和 肾缺血再灌注损伤 基础医学院 实验教学管理中心
一、实验目的 ·观察正常与肾缺血情况下对尿生成 的影响 ·掌握肾缺血再灌注损伤模型的复制 方法
一 、实验目的 • 观察正常与肾缺血情况下对尿生成 的影响 • 掌握肾缺血再灌注损伤模型的复制 方法
二、理论基础 (一)尿的生成过程 实验设计 (二)影响因素 1.肾小球的滤过作用 1.影响原尿形成的因素 形成原尿，125ml/min,180L/d (1)滤过膜的面积和通透性 (2)有效滤过压 2.肾小管与集合管的重吸 肾小球毛细血管压 iv-NS 收作用 血浆胶体渗透压」 肾小囊内压 形成终尿，原尿中99%的水被 2.影响终尿形成的因素 重吸收，约1.5-2.5L/d iv-20%葡萄糖 ,(1)小管液中溶质的浓度 ⊙a (2)影响肾小管上皮细胞重 速尿 吸收作用的体液因子和药物 垂体后叶素（加压素）：↑对水 的通透性，↑重吸收 醛固酮：↑钠离子的主动重吸收， ↑重吸收 ●
二、理 论 基 础 （一）尿的生成过程 实验设计 （二）影响因素 1.肾小球的滤过作用 形成原尿,125ml/min,180L/d 2.肾小管与集合管的重吸 收作用 形成终尿,原尿中99％的水被 重吸收 ,约1.5-2.5L/d 1. 影响原尿形成的因素 （1）滤过膜的面积和通透性 （2）有效滤过压 肾小球毛细血管压 血浆胶体渗透压 肾小囊内压 2. 影响终尿形成的因素 （1）小管液中溶质的浓度 （2）影响肾小管上皮细胞重 吸收作用的体液因子和药物 垂体后叶素(加压素）：↑对水 的通透性， ↑重吸收 醛固酮: ↑钠离子的主动重吸收， ↑重吸收 iv-NS iv-20%葡萄糖 速尿 ↓ ↑
二、理论基础 缺血 夹闭左肾A30min 再灌注 恢复血流30min 检测指标 中性粒细胞 尿量 Ca2+ 肾功能 氧自由基无复流 致炎因子↑钙超载 Cr BUN 细胞损伤 过氧化物 MDA 缺血一再灌注损伤的主要发病机制 ●●●●
中性粒细胞 细胞损伤 缺 血 二、理 论 基 础 再灌注 氧自由基↑ 无复流 致炎因子↑ 缺血一再灌注损伤的主要发病机制 钙超载 夹闭左肾A 30min 恢复血流30min O2 Ca2+ 检测指标 尿量 肾功能 Cr BUN 过氧化物 MDA
三、实验步骤 1. 麻醛： 家兔20%乌拉坦(5ml/kg.W) 2.插管： ①右颈V(用于补液，插管后iⅳ5%GS20m) ②左颈A(检测血压、采血) ③左输尿管（取尿） ●●●0
1. 麻醉： 家兔 20%乌拉坦（5ml/kg.W） 2. 插管: ①右颈V (用于补液，插管后 iv 5%GS 20ml) ②左颈A (检测血压、采血) ③左输尿管（取尿） 三、实 验 步 骤
三、实验步骤 3.尿生成实验：①记录尿量(m/5~15min)第一次取血测BUN ②(1~8实验台)ivNS30ml,记录尿量 (9~16实验台)iv20%GS10ml,记录尿量 4.肾缺血再灌注损伤实验：腹部正中切口（约5cm),游离左肾动静脉， 夹闭30分钟，第二次取血测BUN,记录尿量 松开动脉夹，立即按以下分组给药： (1~5实验台)ivNS30ml (6~10实验台)iv速尿1ml+NS29ml (11~16实验台)iv20%Gs10ml+NS20ml 观察30min,第三次取血测BUN,记录尿量，结束实验 ●●●●
3. 尿生成实验：① 记录尿量( ml/5~15min）第一次取血 测BUN ②（1~8 实验台）iv NS 30ml， 记录尿量 （9~16实验台）iv 20%GS 10ml，记录尿量 4. 肾缺血再灌注损伤实验：腹部正中切口（约5cm），游离左肾动静脉， 夹闭30分钟，第二次取血 测BUN，记录尿量 松开动脉夹，立即按以下分组给药： （1~5 实验台） iv NS 30ml （6~10实验台）iv 速尿1ml + NS 29ml （11~16实验台）iv 20%GS 10ml +NS 20ml 观察30min，第三次取血 测BUN，记录尿量，结束实验 三、实 验 步 骤
尿生成与肾衰实验结果记录 血流动力学指标(mmHg】 心塞 尿量 操作项目与步骤 (次/分) 血浆BUN 收缩压 脉压差 (mL/min mmol/L /舒张压 正常（完成所有插管后） a.iwNs30ml(1-8台) 不检测 b.iw20%Gs10ml(9-16台) 夹闭肾A+V后30min a.ivNS30ml+复灌 30min后(1~5台) b.ivNS29ml+速尿1ml+复灌 30min后(6-10台) c.ivNs20ml+20%GS10ml+复灌 30min后(11~16台)
尿生成与肾衰实验结果记录 操作项目与步骤 血流动力学指标(mmHg) 心 率 （次/分） 尿量 （mL/min） 血浆BUN （mmol/L） 收缩压 / 舒张压 脉压差 正常（完成所有插管后） a. iv NS 30ml （1-8台） b. iv 20%GS 10ml（9-16台） 不检测 夹闭肾A+V后 30min a. iv NS 30ml +复灌 30min后 （1~5 台） b. iv NS 29ml+速尿1ml +复灌 30min后 （6~10台） c. iv NS 20ml+20%GS 10ml +复灌 30min后 （11~16台）
三、实验步骤 5.血浆BUN吸光度(OD值)测定： 血浆样品：将装有1ml全血的肝素化EP管离心，5000 r/min,3min, 取上清20山；加入装有试剂一和二各1m的玻璃试管中，混匀，沸水 浴15min,自来水中冷却，520nm处，以蒸馏水调零，测0D值。 标准管、空白管的数据：由老师提供 6.计算公式 尿素氮含量 测定OD值空白OD值、 标准浓度样本测试前 (mmol/L) 标准OD值-空白OD值(10mmol/L)稀释倍数 标准品0D:0.404;空白管0D:0.018;稀释倍数：1
三、实 验 步 骤 5. 血浆BUN吸光度（OD值）测定： 血浆样品：将装有1ml全血的肝素化EP管离心，5000r/min，3min， 取上清20μl；加入装有试剂一和二各1ml的玻璃试管中，混匀，沸水 浴15min，自来水中冷却，520nm处，以蒸馏水调零，测OD值。 标准管、空白管的数据：由老师提供 6. 计算公式 标准品OD : 0.404 ; 空白管OD: 0.018；稀释倍数：1
四、注意事项 1.采血：先用装了0.2%肝素（边台）的5ml注射器抽出动脉导管 中的肝素（采完血推回，防止导管堵塞），再用已肝素化的EP管 (讲台)，取纯血1ml 调零 调零、通插管、静脉给液、空 检测 气处死、动脉采血均由此三通 此通路保持关闭，不要动 2.输尿管插管：距离肾脏>2cm,插管时勿牵拉触碰肾脏，随时 注意插管是否通畅，勿扭曲，内侧管口勿触壁 ●●●
1. 采血：先用装了0.2%肝素（边台）的5ml注射器抽出动脉导管 中的肝素（采完血推回，防止导管堵塞），再用已肝素化的EP管 （讲台），取纯血1ml 2. 输尿管插管：距离肾脏＞2cm，插管时勿牵拉触碰肾脏，随时 注意插管是否通畅，勿扭曲，内侧管口勿触壁 1. 采血：先用装了0.2%肝素（边台）的5ml注射器抽出动脉导管 中的肝素（采完血推回，防止导管堵塞），再用已肝素化的EP管 （讲台），取纯血1ml 2. 输尿管插管：距离肾脏＞2cm，插管时勿牵拉触碰肾脏，随时 注意插管是否通畅，勿扭曲，内侧管口勿触壁 四、注 意 事 项 调零 检测 此通路保持关闭，不要动 调零、疏通插管、静脉给液、空 气处死、动脉采血均由此三通
四、注意事项 Aorta 3.游离左肾动静脉：肾脏切口与输尿 Heart 管插管切口切勿连续；分离肾动静脉 Inferior 并夹闭，脏器回纳腹腔，盖上湿纱布 vena cava 9SrSnting Right kidney Left kidney ADAM. 肠 输卵管 尿殖实 家殖孔 肛门
四、注 意 事 项 3. 游离左肾动静脉：肾脏切口与输尿 管插管切口切勿连续；分离肾动静脉 并夹闭，脏器回纳腹腔，盖上湿纱布