炎症反应综合征和血管紧张素途径 在家兔ARDS致病作用的初探 基础医学院 实验教学管理中心 ●●●●
炎症反应综合征和血管紧张素途径 在家兔ARDS致病作用的初探 基础医学院 实验教学管理中心
一、实验目的 1·掌握家兔油酸型急性呼吸窘迫综合症 (Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS)模型制备； 2.学习血气分析检测方法，判定肺组织换气功能的改变； 3.通过肉眼观察肺组织的变化，判断肺组织渗出和出血情况； 4.通过学会支气管肺泡灌洗技术和支气管肺泡灌洗液(BALF)白细 胞计数，判别肺组织炎症反应情况。 ●●●●
一 、实验目的 １．掌握家兔油酸型急性呼吸窘迫综合症 （Acute Respiratory Distress Syndrome, ARDS）模型制备； ２．学习血气分析检测方法，判定肺组织换气功能的改变； ３．通过肉眼观察肺组织的变化，判断肺组织渗出和出血情况； ４．通过学会支气管肺泡灌洗技术和支气管肺泡灌洗液（BALF）白细 胞计数，判别肺组织炎症反应情况
二、理论基础 (一)概述 急性呼吸窘迫综合征(ARDS)由于严重感染、休克、创伤等多种肺内外疾 病引起的以肺泡毛细血管损伤为主要表现的综合征。ARDS的临床特征为呼吸 频数和窘迫，进行性低氧血症，死亡率高达50%-70%。病理生理主要改变为弥 漫性肺损伤、肺毛细血管通透性增加和肺泡群萎缩。 ARDS致伤原因不清，多年来一直认为是全身炎症反应综合征为主要致伤 机制。近年来，研究者陆续报道了肾素-血管紧张素系统（RAS)参与肺动脉高 压、肺血栓栓塞症、肺纤维化特别是ARDS等肺部疾病的发病过程，RAS与 ARDS的关系密切，通过药物干预RAS可能是治疗ARDS的新途径。 ●●●●
二、理论基础 （一）概述 急性呼吸窘迫综合征（ARDS）由于严重感染、休克、创伤等多种肺内外疾 病引起的以肺泡毛细血管损伤为主要表现的综合征。 ARDS的临床特征为呼吸 频数和窘迫，进行性低氧血症，死亡率高达50％-70％。 病理生理主要改变为弥 漫性肺损伤、肺毛细血管通透性增加和肺泡群萎缩。 ARDS致伤原因不清，多年来一直认为是全身炎症反应综合征为主要致伤 机制。近年来, 研究者陆续报道了肾素-血管紧张素系统 （RAS）参与肺动脉高 压、肺血栓栓塞症、肺纤维化特别是ARDS等肺部疾病的发病过程，RAS与 ARDS的关系密切，通过药物干预RAS可能是治疗ARDS的新途径
二、 理论基础 (二)ARDS的诊断标准 1.在已知诱因后，或新出现或原有呼吸系统症状加重后1周内发病； 2.胸部影像学(X线CT)提示双肺浸润影，且不能完全用胸腔积液、肺不张 或结节解释 3.不能完全用心力衰竭或者是液体容量超负荷来解释的呼吸衰竭，若临床未 提示存在危险因素，则需要客观评估（如心脏超声检查)以排除心源性水 肿； 4.氧合指数(Pa0,Fi02)进行严重程度的分级：轻度200mmHg1000m,需进行氧合指 数的校正，校正后的氧合指数等于(PaO,JFiO2)*所在地大气压值760) ●●●●
二、理论基础 （二）ARDS的诊断标准 1. 在已知诱因后，或新出现或原有呼吸系统症状加重后１周内发病； 2. 胸部影像学（X线/CT）提示双肺浸润影，且不能完全用胸腔积液、肺不张 或结节解释 3. 不能完全用心力衰竭或者是液体容量超负荷来解释的呼吸衰竭，若临床未 提示存在危险因素，则需要客观评估（如心脏超声检查）以排除心源性水 肿； 4. 氧合指数（PaO2/FiO2）进行严重程度的分级：轻度200mmHg＜ PaO2/FiO2≤300mmHg，中度100mmHg＜PaO2/FiO2≤200mmHg，重度 PaO2/FiO2≤100mmHg（上述氧合指数中的PaO2的监测是在机械通气参数 PEEP/CPAP≥5cmH2O情况下测得；若所处海拔＞1000m，需进行氧合指 数的校正，校正后的氧合指数等于（PaO2/FiO2）*所在地大气压值/760）
二、理论基础 (三)ARDS的治疗 1.原发病的治疗 2.纠正缺氧高浓度给氧，使Pa02≥60mmHg或Sa02≥90% 3.机械通气 (1)呼气末正压通气(PEEP):促进氧合、防止呼气末肺泡萎陷、 抑制炎性介质释放。 (2)小潮气量：68mlkg,防止肺泡过度扩张。 4.液体管理以减轻肺水肿 5.营养支持与监护 其他治疗
二、理论基础 （三） ARDS的治疗 1. 原发病的治疗 2. 纠正缺氧 高浓度给氧，使PaO2 ≥60mmHg或SaO2 ≥90% 3. 机械通气 （1）呼气末正压通气（PEEP）：促进氧合、防止呼气末肺泡萎陷、 抑制炎性介质释放。 （2）小潮气量： 6·8ml/kg，防止肺泡过度扩张。 4. 液体管理 以减轻肺水肿 5. 营养支持与监护 6. 其他治疗
三、实验设计方案 分组 1.空白对照组 2.阳性对照组 家兔 诱导 3.卡托普利干预组 伤害性刺激 → 4.地塞米松干预组 ARDS模型 干预 ↓ 1,炎症反应综 合征途径 观察指标 2.ARS途径 1.肺功能测定：呼吸频率，血气(Pa0降低)，氧合指数(Pa02/Fi02)等指标， 以评价病情严重程度； 2.血流动力学指标：动脉血压、中心静脉压变化； 3.肺脏形态学变化： 肉眼观察肺组织变化； 反映肺脏炎症改变：肺泡灌洗液白细胞计数。 ●●●●
三、实验设计方案 ARDS模型 1．肺功能测定： 呼吸频率，血气（PaO2降低），氧合指数(PaO2/FiO2)等指标， 以评价病情严重程度； 2．血流动力学指标：动脉血压、中心静脉压变化； 3．肺脏形态学变化： 肉眼观察肺组织变化； 4．反映肺脏炎症改变：肺泡灌洗液白细胞计数。 观察指标 家兔 干预 1. 炎症反应综 合征途径 2. ARS途径 诱导 伤害性刺激 分组 1.空白对照组 2.阳性对照组 3.卡托普利干预组 4.地塞米松干预组
四、实验步骤 家兔捉拿、称重、麻醉、固定、颈部备皮 实验分组与干预 ↓ ①空白对照组：1/4 气管插管、右颈静脉插管(CVP)、左颈动脉插管(ABP) 组，不注射油酸 ②阳性对照组 观察指标 (ARDS组)：1I4组， 造模-耳缘静脉注射油酸0.08ml/g ☆血气分析（共3个点） 注射油酸不干预 注：每种处理组选2个组做 ③卡托普利干预组： 造模-30min时 ☆记录呼吸频率、动脉 114组，注射卡托普 血压、中心静脉压 利2.5mg/kg ☆快速抽取动脉血1ml, 造模-60min时 ④地塞米松干预组： 新梁a做益气分析检 114组，注射地塞米 造模-90min时 松0.1mg/kg 10%kcl3ml静 ★观察肺组织外观 脉快速注射致死 ★肺支气管肺泡灌洗，收集灌洗液：白细胞计数 ●●●●
四、实验步骤 家兔捉拿、称重、麻醉、固定、颈部备皮 气管插管、右颈静脉插管（CVP）、左颈动脉插管（ABP） 造模-耳缘静脉注射油酸 0.08ml/kg 造模-30min时 造模-60min时 造模-90min时 观察指标 ☆血气分析（共3个点） 注：每种处理组选2个组做 ☆记录呼吸频率 、动脉 血压、中心静脉压 ☆快速抽取动脉血1ml， 并密闭，做血气分析检 测（标识） 10%kcl 3ml静 脉快速注射致死 ★观察肺组织外观 ★肺支气管肺泡灌洗，收集灌洗液：白细胞计数 实验分组与干预 ①空白对照组 ：1/4 组，不注射油酸 ②阳性对照组 （ARDS组）：1/4组， 注射油酸不干预 ③卡托普利干预组： 1/4组，注射卡托普 利2.5mg/kg ④地塞米松干预组： 1/4组，注射地塞米 松0.1mg/kg
四、相关实验技术 1、气管插管技术 ①游离甲状软骨下4cm气管 ②穿单线 ③甲状软骨下2cm横向剪开 112气管 ④向头端开倒“T字口 ⑤插入气管套管，结扎固定
四、相关实验技术 1、气管插管技术 ①游离甲状软骨下4cm气管 ②穿单线 ③甲状软骨下2cm横向剪开 1/2气管 ④向头端开倒“T”字口 ⑤插入气管套管，结扎固定
四、相关实验技术 2、支气管肺泡灌洗 ①游离气管与肺组织 ②用止血钳夹闭气管套管的一 端 ③用10ml生理盐水分三次灌 洗 ④收集灌洗液（切勿离心）， 记录收集的液体量(20ml注射 器粗略估计)
四、相关实验技术 2、支气管肺泡灌洗 ①游离气管与肺组织 ②用止血钳夹闭气管套管的一 端 ③用10ml生理盐水分三次灌 洗 ④收集灌洗液（切勿离心）， 记录收集的液体量（20ml 注射 器粗略估计）
四、相关实验技术 支气管肺泡灌洗液白细胞 计 Ependorf管中用移液器加入 380μ白细胞稀释液，再加入20川 支气管肺泡灌洗液，混匀后加到血 细胞计数板中，静置5-15min后计 数。 低倍镜下观察周边4大格中白 细胞数(=X×501mm3)。 注：上下左右压边细胞只选一边。 ●●●●
四、相关实验技术 4、支气管肺泡灌洗液白细胞 计数 Ependorf管中用移液器加入 380 μl白细胞稀释液，再加入20 μl 支气管肺泡灌洗液，混匀后加到血 细胞计数板中，静置5-15min后计 数。 低倍镜下观察周边4大格中白 细胞数（=X × 50/mm3）。 注：上下左右压边细胞只选一边