第2章微生物的纯培养和显微镜技术 重点、难点剖析 1.无菌技术是最基本的微生物学实验操作技术，其核心是无菌概念的建立，以及正确 而严格地按实验教材和实验课的要求，掌握在各种情况下的具体应用原则和操作规范 2.分离获得某特定的微生物纯培养，是研究和利用微生物的基础。 获得纯培养的方法有固体培养基分离、液体培养基分离和单细胞挑取3大类（表2一），其中 的微生物菌落是 常用、最基本的方法。此外还有活细胞或活体分离 表2-1获得微生物纯培养的方法比较 方法 特点 应用 ，进行微 这3种方 用 稀释倒平板法 相对麻烦 热敏感陶有时 贪生物的纯养分因 体培养基分离 在 氧菌也可能被 61 操作相对 单，是较常使用的各种具有特 生 理特征的 布些有时会因布不 初。 天氧耀 涂布平板法 进行微生物计教时需对稀 得各种 释和涂 平板划线法 对己有纯培 养的确认和再次分 稀释捆管法 通形式， 间，观察和桃取都相对困难 进行分离和观察 稀释法 的物 不能或不易在固 养分离或数量统计 液体培养基分离 培 自然环境中 占少敏的 富集培养 对这种微生物进行有 培养出由科学家设计的 物纯培养的分离和检测 生物能在这种特定的环境 中生长 分离过程直视，可常，但对仪从样品中直接分离所盂的 器和操作技术要求较高名 研究或抱子 路细胞或子，获得 显微操作 经固 或液体培养基培养后才 能获得其纯培养物 3,保证所用菌种性状的稳定是微生物学工作最重要的基本要术。 否则生：或科研都无法 的是前 术归钠起来不外乎生活态或休眠态两种。下面所列 用的 些微生物保藏方
10第2章微生物的纯培养和显微镜技术 培养基传代：斜面、半固体柱、平板等 生活态 常用的保藏技术 寄主陆代 冷冻：低温冰箱、液氨 休眠态 干燥：沙土管、 冷冻真空干燥 值得指出的是，由于微生物的多样性，不同的微生物往往对不同的保藏方法有不同的过 应性，迄今为止尚没有一种方法能被证明对所有的微生物均适宜。因此，在具体选择保藏方 法时必须对被保藏菌株的特性、保藏物的使用特点及现有条件等进行综合考虑。对于一些比 较重要的微生物茵株，则要尽可能多的采用客种不同的手段进行保藏，以免因某种方法的失 败而导致莉种的丧失 显微镜是微生物学研究的重要工具，对各类显微镜原理及应用特点的全面、综合了 解是生物学的重点内容之一（表2各类显微镜特点的比较 显微镜类型 基人百理乃特占 光线透射照明，物像处丁各种情祝下染色样品或 明视野微镜 的量基本配置价格园 宜、宋易使用 视野显微镜下不 暗背中 染色或易被染色过 暗视野显微镜 破环的细的的 测：观察活细胞的云 光学显微镜 相差显微镜 胞及其内部结构的 观 的反阴暗关异 微生物前 婵品在紫 荧光显微镜 线照射下激发出各种被 病原微生物的直接检 使用特定的荧光抗体 数光作为光源每次照 分 其聚焦品微镜 后经计算机处理指烈 对病题成铝箱切片 焦成像，分率敏光学 处理后对细胞的内部结 透射电镜 构进行观 电子显微镜 操作技术有较高的要求 扫描电镜 成物像。分辨率远高了 用细小的深针在样品表 与电子壶微镜相比，这类 隧道扫描显微镜 尖和样品间避道效应电期常，可在生理状态下对
11第2章微生物的纯培养和显微镜技术 流的变化形成物像 生物大分子或细胞结构 探针扫描显微镜 利用细小的深针对样品 进行观察。同时仪器体积 表向进行恒定高度的扫 较小，价格也相对使宜 原子力显微镜 描，同时通过一个激光装 置米监测探针随样品表 前的升降变化米获取样 品表面形貌的信息 5.样品制备和显微观察也是微生物学的基本操作之一，应按实验教材和实验课的要求， 掌握在各种情况下微生物样品制备和显微观察的基本原理和操作规范，了解各微生物类群在 显微镜下的基本形态特征。 主要参考书目 l,Prescott L M,Harley JP,Klein DA著.微生物学.第5版.中文版.沈萍，彭珍荣主 译.北京：高等教育出版社，2003.17-151 2.Madigan MT,Martinko J M,Parker J.Brock Biology of Microorganisms.10th ed.London: Prentice Hall,2003 3.Talaro K P.Foundations h Microbiology.5th ed.New York:McGraw-Hill companies,2005 4.Nester,et al..Microbiology:A Human Perspective.4th ed.New York:McGraw-Hill companies,2004 (陈向东)