天津中医焉大学 现代中菊分析实验讲义 (供中药专业使用) 天津中医药大学中药学院 分析化学教研室 2015年4月
1 天津中医药大学 现代中药分析实验讲义 （供中药专业使用） 天津中医药大学中药学院 分析化学教研室 2015 年 4 月
目录 实验项目一:加味香连丸的TLC鉴别 实验项目二:紫外分光光度法测定加味香连丸中黄连生物碱的含量 实验项目三:复方丹参滴丸中龙脑的含量测定 实验项目四:中药制剂中橙皮苷的含量测定 35689 实验项目五:HPLC综合实验一一清颗粒测定(1) 实验项目六:HPC综合实验一一清颗粒测定(2)
2 目 录 实验项目一：加味香连丸的 TLC 鉴别..........................................................................3 实验项目二：紫外分光光度法测定加味香连丸中黄连生物碱的含量 .....................5 实验项目三：复方丹参滴丸中龙脑的含量测定...........................................................6 实验项目四：中药制剂中橙皮苷的含量测定 ...............................................................8 实验项目五：HPLC 综合实验—一清颗粒测定(1).......................................................9 实验项目六：HPLC 综合实验—一清颗粒测定(2).....................................................12
天津中医药大学 《现代中药分析》实验讲义 所属课程 现代中药分析核心课程学时36 适用专业 中药学1004中药制药1005 课程英文名称 Analysis of Chinese Medicinal Preparation Experiment 一、实验课程简介 《中药制剂分析》是一门以中医药理论为指导,运用现代分析理论和方法研 究中药制剂质量的综合应用性学科,是中药专业的核心主干课程之 二、实验课程目标 通过实验,加深对中药制剂分析基本理论、基本知识的理解,正确、熟练地 掌握中药制剂分析常用的法定方法及规范化的操作技能。 《现代中药分析实验》是《化学分析》、《仪器分析》、《中药学》、《方剂学》 《中药炮制》、《中药鉴定学》、《中药化学》和《中药制剂学》等相结合的一门具 有很强实践性和综合性的应用科学。本课程实践教学既注重基本技能训练、又加 强创新能力的培养。在实践教学内容的安排上,既有验证性实验,让学生掌握药 物分析的一般方法与技术特点;又有综合性试验,使学生将理论知识和具体的药 物分析测定技术融会贯通,掌握解决实际药物分析技术问题的方法;还包括设计 性试验,培养学生的硏究创新能力。验证性、综合性和设计性试验分步骤逐步实 施,使学生的理论和实验技能得到不断的进步。 三、实验项目 (一)实验项目一:加味香连丸的TLC鉴别 1、实验项目学时:6学时 实验项目类型:验证性、综合性实验 3、实验项目内容:1.加味香连丸中黄连总碱的提取;黄连药味的薄层鉴别。 2.加味香连丸中挥发油的提取;药味的薄层鉴别 4、实验项目学习要求:(从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求) (1)运用知识:中药材及其复方制剂的TLC鉴别、中药有效部位的提取、 对照液、供试液制备。TLC基本操作技能练习
3 天津中医药大学 《现代中药分析》实验讲义 所属课程 现代中药分析 核心课程 学时 36 适用专业 中药学 1004 中药制药 1005 课程英文名称 Analysis of Chinese Medicinal Preparation Experiment 一、实验课程简介 《中药制剂分析》是一门以中医药理论为指导，运用现代分析理论和方法研 究中药制剂质量的综合应用性学科，是中药专业的核心主干课程之一。 二、实验课程目标 通过实验，加深对中药制剂分析基本理论、基本知识的理解，正确、熟练地 掌握中药制剂分析常用的法定方法及规范化的操作技能。 《现代中药分析实验》是《化学分析》、《仪器分析》、《中药学》、《方剂学》、 《中药炮制》、《中药鉴定学》、《中药化学》和《中药制剂学》等相结合的一门具 有很强实践性和综合性的应用科学。本课程实践教学既注重基本技能训练、又加 强创新能力的培养。在实践教学内容的安排上，既有验证性实验，让学生掌握药 物分析的一般方法与技术特点；又有综合性试验，使学生将理论知识和具体的药 物分析测定技术融会贯通，掌握解决实际药物分析技术问题的方法；还包括设计 性试验，培养学生的研究创新能力。验证性、综合性和设计性试验分步骤逐步实 施，使学生的理论和实验技能得到不断的进步。 三、实验项目 （一）实验项目一：加味香连丸的 TLC 鉴别 1、实验项目学时：6 学时 2、实验项目类型：验证性、综合性实验。 3、实验项目内容：1．加味香连丸中黄连总碱的提取；黄连药味的薄层鉴别。 2. 加味香连丸中挥发油的提取；药味的薄层鉴别。 4、实验项目学习要求：（从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求） （1）运用知识：中药材及其复方制剂的 TLC 鉴别、中药有效部位的提取、 对照液、供试液制备。TLC 基本操作技能练习
(2)提髙能力:掌握中药提取、净化操作;5种TLC溶液配制操作;TLC 规范操作;鉴别中药真伪操作技能。提髙TC法鉴别中药的能力及有效部位提 取能力。 5、主要仪器设备与材料: 千分之一天平、恒温水浴锅、层析缸、三用紫外分析仪、喷雾瓶、吹风机、 加味香连丸、盐酸小檗碱对照品、黄连及木香对照药材,95%乙醇(AR)。 6、与理论课程的关系:本实验是在第二章鉴别基础知识教学基础上的实验教 学。是中药鉴别主要方法的直接应用。是中国药典的最主要方法。 7、实验步骤 1)取本品60mg,研细,加乙醇5ml,置水浴中加热回流15分钟,滤过, 滤液补加乙醇使成5ml,作为供试品溶液。另取黄连对照药材50mg,同法制成 对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品,加乙醇制成每lm含0.04mg的溶液 照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各2微升,分别点于同一硅胶G薄层板 上,以乙酸乙酯:氯仿:甲醇:氨水:二乙胺(8:2:2:1:0.5)为展开剂 展开,取出,晾干,置紫外光灯(365m)下检视。供试品色谱中,在与对照药 材色谱相应的位置上,显相同的黄色荧光斑点;在与对照品色谱相应的位置上 显相同的一个黄色荧光斑点。 2)取本品0.5g,研细,加乙醚5ml,放置2小时,时时振摇,滤过,滤液 挥去乙醚,残渣加醋酸乙酯0.5n使溶解,作为供试品溶液。另取木香对照药材 02g,加乙醚5nl,同法制成对照药材溶液,照薄层色谱法试验,吸取上述两种 溶液各2微升,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷:丙酮(10:3)为展 开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃烘约5分钟。供 试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的紫红色至蓝紫色斑点 8、数据处理:给出鉴定结论 如实记录画出薄层板(黄连及木香) 9、思考题: 1)定性鉴别需配置哪几种溶液?为什么? 2)定性鉴别对量有哪些要求?
4 （2）提高能力：掌握中药提取、净化操作；5 种 TLC 溶液配制操作；TLC 规范操作；鉴别中药真伪操作技能。提高 TLC 法鉴别中药的能力及有效部位提 取能力。 5、主要仪器设备与材料： 千分之一天平、恒温水浴锅、层析缸、三用紫外分析仪、喷雾瓶、吹风机、 加味香连丸、盐酸小檗碱对照品、黄连及木香对照药材，95%乙醇（AR）。 6、与理论课程的关系：本实验是在第二章鉴别基础知识教学基础上的实验教 学。是中药鉴别主要方法的直接应用。是中国药典的最主要方法。 7、实验步骤 1）取本品 60mg，研细，加乙醇 5ml，置水浴中加热回流 15 分钟，滤过， 滤液补加乙醇使成 5ml，作为供试品溶液。另取黄连对照药材 50mg，同法制成 对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每 1ml 含 0.04mg 的溶液。 照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各 2 微升，分别点于同一硅胶 G 薄层板 上，以乙酸乙酯：氯仿：甲醇：氨水：二乙胺（8：2：2：1：0.5）为展开剂， 展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药 材色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的一个黄色荧光斑点。 2）取本品 0.5g，研细，加乙醚 5ml，放置 2 小时，时时振摇，滤过，滤液 挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯 0.5ml 使溶解，作为供试品溶液。另取木香对照药材 0.2g，加乙醚 5ml，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种 溶液各 2 微升，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以环己烷：丙酮（10：3）为展 开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%香草醛硫酸溶液，在 105℃烘约 5 分钟。供 试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的紫红色至蓝紫色斑点。 8、数据处理：给出鉴定结论 如实记录,画出薄层板(黄连及木香) 9、思考题： 1）定性鉴别需配置哪几种溶液？为什么？ 2）定性鉴别对量有哪些要求？
(二)实验项目二:紫外分光光度法测定加味香连丸中黄连生物碱的含量 l、实验项目学时:6学时 2、实验项目类型:验证性、综合性实验。 3、实验项目内容:1.利用氧化铝色谱柱净化加味香连丸中黄连生物碱 利用紫外紫外分光光度法测定黄连总生物碱含量 4、实验项目学习要求:(从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求) (1)运用知识:掌握用柱层析净化提取物的方法;掌握紫外分光光度法测 定复方中某一类物质的方法 (2)提髙能力:掌握中药提取、净浄化操作;UVⅥS规范操作;提高UVVS 法测定中药成分含量的能力。 主要仪器设备与材料 1.紫外-可见分光光度计 2.小层析柱:高13cm,内径8mm,2个 3.中性A2O3(150200目) 4.样品:加味香连丸 5.对照品:盐酸小檗碱 6、与理论课程的关系:本实验是在第四单元含量测定基础知识教学基础上的 实验教学。是UVⅥS法测定中药成分含量方法的直接应用。是中国药典的主要 方法。 7、实验步骤 1)含量测定: A、样品溶液配制: 取加味香连丸0.5g,研成细粉,精密称取0.1g实验中称取多少写多少, 置60n索氏提取器中加95%乙醇40ml连续回流提取生物碱至无色。将提取液 浓缩至20ml,定量转移到25m容量瓶中,用95%乙醇至刻度 精密吸取样品液1.0ml通过AlO3柱,用95%EtOH至洗脱完全,收集洗脱液于10m 容量瓶中,连续加95%乙醇至刻度,于λmax350nm处测定吸收度。 B、对照品溶液配制 用95%乙醇溶液,配制对照品溶液浓度为0.006mg/ml
5 （二）实验项目二：紫外分光光度法测定加味香连丸中黄连生物碱的含量 1、实验项目学时：6 学时 2、实验项目类型：验证性、综合性实验。 3、实验项目内容：1．利用氧化铝色谱柱净化加味香连丸中黄连生物碱 2．利用紫外紫外分光光度法测定黄连总生物碱含量 4、实验项目学习要求：（从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求） （1）运用知识：掌握用柱层析净化提取物的方法；掌握紫外分光光度法测 定复方中某一类物质的方法。 （2）提高能力：掌握中药提取、净化操作；UV-VIS 规范操作；提高 UV-VIS 法测定中药成分含量的能力。 5、主要仪器设备与材料： 1．紫外-可见分光光度计 2．小层析柱：高 13 cm，内径 8 mm，2 个 3．中性 Al2O3（150—200 目） 4．样品：加味香连丸 5．对照品：盐酸小檗碱 6、与理论课程的关系：本实验是在第四单元含量测定基础知识教学基础上的 实验教学。是 UV-VIS 法测定中药成分含量方法的直接应用。是中国药典的主要 方法。 7、实验步骤 1）含量测定： A、样品溶液配制： 取加味香连丸 0.5g，研成细粉，精密称取 0.1g(实验中称取多少写多少)， 置 60ml 索氏提取器中加 95%乙醇 40ml 连续回流提取生物碱至无色。将提取液 浓缩至 20ml，定量转移到 25ml 容量瓶中，用 95%乙醇至刻度. 精密吸取样品液1.0ml通过 Al2O3柱,用95%EtOH至洗脱完全，收集洗脱液于10ml 容量瓶中，连续加 95%乙醇至刻度，于 λmax350nm 处测定吸收度。 B、对照品溶液配制 用 95%乙醇溶液，配制对照品溶液浓度为 0.006mg/ml
C、含量测定 应用外标一点法测定加味香连丸中总生物碱的含量。 8、数据处理 计算出100g加味香连丸中含有盐酸小檗碱多少克? 9、思考题 1)如何判断生物碱已被提取完全? 2)以测定小檗碱为例,除此方法外还有什么测定复方中黄连生物碱的方法? 3)本实验中测定样品紫外吸收度时,以什么作为空白对照液?为什么? (三)实验项目三:复方丹参滴丸中龙脑的含量测定 实验项目学时:6学时 2、实验项目类型:验证性、综合性实验 3、实验项目内容: 色谱条件的选择; 2.实验用溶液的配制,包括内标溶液、对照溶液及样品溶液的配制; 3.利用内标法测定复方丹参滴丸中龙脑的含量 4、实验项目学习要求:(从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求) (1)运用知识:掌握气相色谱法测定中药制剂中成分含量的方法和 原理;熟悉气相色谱仪进行含量测定的操作过程。熟悉气相色谱仪各种操 作条件的选择应用 (2)提髙能力:GC的基本操作、仪器条件确定;提高运用GC进 行药物含量测定的能力。 5、主要仪器设备与材料: 安捷伦-6820气相色谱仪(FID检测器)、微量进样器 2.SPB-5毛细管色谱柱(弱极性) 3.水杨酸甲酯(内标)、醋酸乙酯(AR) 4.龙脑对照品(中国药品生物制品检定所) 5.复方丹参滴丸(天士力有限公司生产)。 6、与理论课程的关系:本实验是在第四单元有关气相色谱法教学基础上的实
6 C、含量测定 应用外标一点法测定加味香连丸中总生物碱的含量。 8、数据处理 计算出 100g 加味香连丸中含有盐酸小檗碱多少克? 9、思考题 1）如何判断生物碱已被提取完全？ 2）以测定小檗碱为例，除此方法外还有什么测定复方中黄连生物碱的方法？ 3）本实验中测定样品紫外吸收度时，以什么作为空白对照液？为什么？ （三）实验项目三：复方丹参滴丸中龙脑的含量测定 1、实验项目学时：6 学时 2、实验项目类型：验证性、综合性实验。 3、实验项目内容： 1．色谱条件的选择； 2．实验用溶液的配制，包括内标溶液、对照溶液及样品溶液的配制； 3．利用内标法测定复方丹参滴丸中龙脑的含量。 4、实验项目学习要求：（从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求） （1）运用知识：掌握气相色谱法测定中药制剂中成分含量的方法和 原理；熟悉气相色谱仪进行含量测定的操作过程。熟悉气相色谱仪各种操 作条件的选择应用。 （2）提高能力：GC 的基本操作、仪器条件确定；提高运用 GC 进 行药物含量测定的能力。 5、主要仪器设备与材料： 1．安捷伦-6820 气相色谱仪（FID 检测器）、微量进样器； 2．SPB-5 毛细管色谱柱（弱极性） 3．水杨酸甲酯（内标）、醋酸乙酯（AR） 4．龙脑对照品（中国药品生物制品检定所） 5．复方丹参滴丸（天士力有限公司生产）。 6、与理论课程的关系：本实验是在第四单元有关气相色谱法教学基础上的实
验教学。是中药含量测定重要方法的直接应用。是中国药典的主要方法 7、操作步骤 1.色谱条件 采用SPB-5毛细管色谱柱(弱极性),柱长30m,内径0.32mm,液膜厚度 025μm,分流进样lμL(分流比1:20);柱温:初始温度100℃,保持lmin,以 8℃/min升至180℃,保持lmin;后进样口温度为220℃;前检测器温度为300℃; 载气为N2,柱前压100kPa左右;H250kPa:空气50kPa;FID检测器。理论塔 板数按龙脑峰计算不低于十万:Rs>15;对称性因子T=0.95 2.校正因子测定 内标溶液配制取水杨酸甲酯125mg,置25mL量瓶中,加醋酸乙酯至刻度, 制成每lmL含5mg的内标溶液 对照溶液配制取龙脑对照品5mg,精密称定,置10mL量瓶中,加内标溶 液至刻度,摇匀,作为龙脑对照溶液。 测定校正因子取龙脑对照液1μ注入气相色谱仪,测定至少5次,计算 校正因子。 测定法 取合成冰片5mg,精密称定,置10mL量瓶中,加入内标溶液使冰片溶解并稀释 至刻度,摇匀,吸取2μL,注入气相色谱仪,测定。按内标法计算含量 8、注意事项 实验前,必须对气相色谱仪整个气路系统进行检漏。如有漏气,及时 处理。 2.开机前先通气,实验结束,先降温、关机,后关气 3.由于样品中挥发性成分较多,样品干燥时,要注意方法和温度 、思考题 1.在建立一个中药制剂的测定方法时,如何进行方法学考察? 2.研究和设计中药制剂的分析方法时,应根据哪几方面内容?
7 验教学。是中药含量测定重要方法的直接应用。是中国药典的主要方法。 7、操作步骤 1．色谱条件 采用 SPB-5 毛细管色谱柱（弱极性），柱长 30m，内径 0.32mm，液膜厚度 0.25μm，分流进样 1μL（分流比 1:20）；柱温：初始温度 100℃，保持 1min，以 8℃ / min 升至 180℃，保持 1min；后进样口温度为 220℃；前检测器温度为 300℃； 载气为 N2，柱前压 100kPa 左右；H2 50kPa；空气 50kPa；FID 检测器。理论塔 板数按龙脑峰计算不低于十万；RS＞1.5；对称性因子 T=0.95。 2．校正因子测定 内标溶液配制 取水杨酸甲酯125mg，置25mL量瓶中，加醋酸乙酯至刻度， 制成每 lmL 含 5mg 的内标溶液。 对照溶液配制 取龙脑对照品 5mg，精密称定，置 10mL 量瓶中，加内标溶 液至刻度，摇匀，作为龙脑对照溶液。 测定校正因子 取龙脑对照液 1μL 注入气相色谱仪，测定至少 5 次，计算 校正因子。 3．测定法 取合成冰片 5mg，精密称定，置 10mL 量瓶中，加入内标溶液使冰片溶解并稀释 至刻度，摇匀，吸取 2μL，注入气相色谱仪，测定。按内标法计算含量。 8、注意事项 1．实验前，必须对气相色谱仪整个气路系统进行检漏。如有漏气，及时 处理。 2．开机前先通气，实验结束，先降温、关机，后关气。 3．由于样品中挥发性成分较多，样品干燥时，要注意方法和温度。 9、思考题 1．在建立一个中药制剂的测定方法时，如何进行方法学考察？ 2．研究和设计中药制剂的分析方法时，应根据哪几方面内容？
(四)实验项目四:中药制剂中橙皮苷的含量测定 l、实验项目学时:6学时 2、实验项目类型:验证性、综合性实验。 3、实验项目内容:1.HPLC仪器使用及基本操作 2色谱条件的选择; 3.实验用溶液的配制,包括橙皮苷对照品溶液及供试品 溶液的制备; 4.利用外标一点法进行定量分析 4、实验项目学习要求:(从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求) (1)运用知识:HPC的具体应用。掌握高效液相色谱仪的的基本操作及定量 方法 (2)提髙能力:提髙HPIC的基础操作能力、仪器条件选择能力:提高运用HPLC 进行药物定量分析能力。 主要仪器设备与材料: 1.高效液相色谱仪(紫外检测器) 2.C18反相色谱柱( Hypersil Ods5μm×46mm×250mm); 3.微量进样器 4.一次性注射器 5.045μm微孔滤膜 6.容量瓶50、250m 7.移液管,洗耳球;具塞三角瓶(50m):超声波清洗器:;天平;滤纸 培养皿;炮弹管。 8.橙皮苷对照(中国药品生物制品检定所) 9.陈皮(天津市饮片厂) 6、与理论课程的关系::本实验是在第四单元有关高效液相色谱法教学基础上 的实验教学。是中药含量测定重要方法的直接应用。是中国药典的主要方法 7、操作步骤 1)色谱条件 色谱柱:C18250×46mm,5μm;流动相:43%甲醇;柱温:室温;流速: Iml/min
8 （四）实验项目四：中药制剂中橙皮苷的含量测定 1、实验项目学时：6 学时 2、实验项目类型：验证性、综合性实验。 3、实验项目内容：1．HPLC 仪器使用及基本操作； 2.色谱条件的选择； 3．实验用溶液的配制，包括橙皮苷对照品溶液及供试品 溶液的制备； 4．利用外标一点法进行定量分析。 4、实验项目学习要求：（从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求） （1）运用知识：HPLC 的具体应用。掌握高效液相色谱仪的的基本操作及定量 方法； （2）提高能力：提高 HPLC 的基础操作能力、仪器条件选择能力；提高运用 HPLC 进行药物定量分析能力。 5、主要仪器设备与材料： 1．高效液相色谱仪（紫外检测器） 2．C18 反相色谱柱（Hypersil ODS 5 µm × 4.6 mm × 250 mm）； 3．微量进样器 4．一次性注射器 5．0.45 µm 微孔滤膜 6．容量瓶 50、250 ml 7．移液管，洗耳球；具塞三角瓶（50 ml）；超声波清洗器；天平；滤纸、 培养皿；炮弹管。 8．橙皮苷对照（中国药品生物制品检定所） 9．陈皮（天津市饮片厂） 6、与理论课程的关系：：本实验是在第四单元有关高效液相色谱法教学基础上 的实验教学。是中药含量测定重要方法的直接应用。是中国药典的主要方法。 7、操作步骤 1）色谱条件： 色谱柱：C18,250×4.6mm，5μm；流动相：43%甲醇；柱温：室温；流速：1ml/min；
检测:UVD,波长为27onm:进样量:10μL。理论塔板数n>3000。 2)橙皮苷对照品溶液的制备及测定: 取橙皮苷对照品16mg,加甲醇置10oml容量瓶中,制成00l6mgml的溶液, 作为对照品溶液。精密吸取1oμL按上述色谱条件进样,测定对照品峰面积 3)供试品溶液的制备: 取中药复方,精密称取0.3g置锥形瓶中,加入甲醇50ml,加塞称重,超声提取 15分钟后继续称重并用甲醇补足减少的重量。用0.45μum微孔滤膜过滤,取续滤 液,作为供试品溶液。 4)测定 精密吸取10μuL供试品溶液,注λ液相色谱仪,测定供试品中橙皮苷峰面积。 5)计算 外标一点法计算100克中药复方中含有橙皮苷的克数(%)。 (五)实验项目五:HPLC综合实验一一清颗粒测定 1、实验项目学时:6学时 2、实验项目类型:综合性实验 3、实验项目内容:1.实际运用HPLC仪器,解决实际问题 2.一清颗粒中黄芩苷的含量测定 4、实验项目学习要求:(从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求) (1)运用知识:现代中药分析的特点以及一般程序,掌握中药分析方法 学考察的基本内容。 (2)提高能力:提高运用HPLC进行药物定量分析能力 5、主要仪器设备与材料: 1.高效液相色谱仪(紫外检测器) 2.C18反相色谱柱( Hypersil Ods5μm×46mm×250mm) 3.微量进样器 4.一次性注射器 5.0.45μm微孔滤膜 6.容量瓶50、250ml
9 检测：UVD，波长为 270nm；进样量：10μL。理论塔板数 n＞3000。 2）橙皮苷对照品溶液的制备及测定： 取橙皮苷对照品 1.6mg，加甲醇置 100ml 容量瓶中，制成 0.016mg/ml 的溶液， 作为对照品溶液。精密吸取 10μL 按上述色谱条件进样，测定对照品峰面积。 3）供试品溶液的制备： 取中药复方，精密称取 0.3g 置锥形瓶中，加入甲醇 50ml，加塞称重，超声提取 15 分钟后继续称重并用甲醇补足减少的重量。用 0.45μm 微孔滤膜过滤，取续滤 液，作为供试品溶液。 4）测定 精密吸取 10μL 供试品溶液，注入液相色谱仪，测定供试品中橙皮苷峰面积。 5）计算 外标一点法计算 100 克中药复方中含有橙皮苷的克数（%）。 （五）实验项目五：HPLC 综合实验—一清颗粒测定 1、实验项目学时：6 学时 2、实验项目类型：综合性实验。 3、实验项目内容：1．实际运用 HPLC 仪器，解决实际问题 2. 一清颗粒中黄芩苷的含量测定 4、实验项目学习要求：（从运用知识、提高能力两个层次说明学习要求） （1）运用知识：现代中药分析的特点以及一般程序，掌握中药分析方法 学考察的基本内容。 （2）提高能力：提高运用 HPLC 进行药物定量分析能力。 5、主要仪器设备与材料： 1．高效液相色谱仪（紫外检测器） 2．C18 反相色谱柱（Hypersil ODS 5 µm × 4.6 mm × 250 mm）； 3．微量进样器 4．一次性注射器 5．0.45 µm 微孔滤膜 6．容量瓶 50、250 ml
7.移液管,洗耳球;具塞三角瓶(50ml);超声波清洗器;天平;滤纸、 培养皿;炮弹管。 8.对照品(中国药品生物制品检定所) 9.一清颗粒(自制) 与理论课程的关系:本实验是在第四单元有关高效液相色谱法教学基础上 的实验教学。是中药含量测定重要方法的直接应用。是中国药典的主要方法 7、实验步骤 1)色谱条件与系统适用性试验 色谱柱: Hypersil ODs(46×250mm,5um) 流动相:甲醇-1%冰醋酸水溶液(52:48,ⅵv)或(54:46,w/v) 检测波长:280nm 流速:1ml/min 柱温:室温 进样量:5μl 按黄芩苷计算理论塔板数不低于3000 2)黄芩苷对照品溶液的制备 精密称取在105℃干燥至恒重的黄芩苷对照品适量,用75%乙醇配制成浓度 为20.5μg/ml的黄芩苷对照品溶液,于4°C保存,备用。 3)供试品溶液的制备 取装量差异项下的内容物,研细,取约0.1g,精密称定,置50ml量瓶中, 加70%乙醇10ml,超声处理20分钟,用70%乙醇稀释至刻度,摇匀,上清液 用045μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得 4)阴性溶液的制备 取不含黄芩的药材粉末照供试品溶液同法制备 5)测定法 分别吸取阴性溶液、对照品溶液与供试品溶液各5μ注入液相色谱仪,测 定,即得。 本品每袋(7.5g)含黄芩以黄芩苷(C2lH1sOn)计不得少于30.0mg。 8、黄芩苷含量测定的方法学考察
10 7．移液管，洗耳球；具塞三角瓶（50 ml）；超声波清洗器；天平；滤纸、 培养皿；炮弹管。 8．对照品（中国药品生物制品检定所） 9．一清颗粒（自制） 6、与理论课程的关系：本实验是在第四单元有关高效液相色谱法教学基础上 的实验教学。是中药含量测定重要方法的直接应用。是中国药典的主要方法。 7、实验步骤 1） 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Hypersil ODS（4.6 × 250 mm，5 µm） 流动相：甲醇-1%冰醋酸水溶液（52:48，v/v）或（54:46，v/v） 检测波长：280 nm 流速：1 ml/min 柱温：室温 进样量：5 μl 按黄芩苷计算理论塔板数不低于 3000 2） 黄芩苷对照品溶液的制备 精密称取在 105℃干燥至恒重的黄芩苷对照品适量，用 75%乙醇配制成浓度 为 20.5 µg/ml 的黄芩苷对照品溶液，于 4C 保存，备用。 3）供试品溶液的制备 取装量差异项下的内容物，研细，取约 0.1 g，精密称定，置 50 ml 量瓶中， 加 70%乙醇 10 ml，超声处理 20 分钟，用 70%乙醇稀释至刻度，摇匀，上清液 用 0.45 µm 微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。 4）阴性溶液的制备 取不含黄芩的药材粉末照供试品溶液同法制备。 5）测定法 分别吸取阴性溶液、对照品溶液与供试品溶液各 5 µL 注入液相色谱仪，测 定，即得。 本品每袋（7.5 g）含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计不得少于 30.0 mg。 8、黄芩苷含量测定的方法学考察