实验十一、食品中亚硫酸盐含量测定 标准依据： GB/T5009.34-2003食品中亚疏酸盐含量测定
实验十一、食品中亚硫酸盐含量测定 标准依据: GB/T 5009.34-2003食品中亚硫酸盐含量测定
一、 目的要求 学习盐酸副玫瑰苯胺显色比色法测定食品中亚 硫酸盐的实验原理，掌握实验的操作要点及测 定方法。 二、实验原理 亚硫酸盐与四氯汞钠反应，生成稳定的络合物， 再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络 合物，此络合物于波长550nm处有最大吸收峰， 且在一定范围内其颜色的深浅与亚硫酸盐的浓 度成正比，可以比色定量。结果以试样中二氧 化硫的含量表示
◼ 一、目的要求 ◼ 学习盐酸副玫瑰苯胺显色比色法测定食品中亚 硫酸盐的实验原理，掌握实验的操作要点及测 定方法。 ◼ 二、实验原理 ◼ 亚硫酸盐与四氯汞钠反应，生成稳定的络合物， 再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络 合物，此络合物于波长550nm处有最大吸收峰， 且在一定范围内其颜色的深浅与亚硫酸盐的浓 度成正比，可以比色定量。结果以试样中二氧 化硫的含量表示
三、仪器与试剂 ◆ (一)试剂 1、四氯汞钠吸收液；2、1.2%氨基磺酸铵溶液 (12g/L);3、甲醛溶液(2g/L);4、淀粉指示液： 5、亚铁氰化钾溶液；6、乙酸锌溶液；7、盐酸副玫瑰 苯胺溶液；8、碘溶液[c(1/212)=0.100molL]: ■9、硫代硫酸钠标准溶液[cNa2S2O3·5H2O)=0.100 molL]:10、二氧化硫标准溶液：11、二氧化硫使用 液：临用前将二氧化硫标准溶液以四氯汞钠吸收液稀 释成每毫升相当于2μg二氧化硫；12、氢氧化钠溶液 (20g/L);13、硫酸 (1+71)。 (二)、仪器：分光光度计
三、仪器与试剂 ◼ (一)试剂 ◼ 1、四氯汞钠吸收液；2、1.2 % 氨基磺酸铵溶液 (12g/L)；3、甲醛溶液（2g/L）；4、淀粉指示液； ◼ 5、亚铁氰化钾溶液；6、乙酸锌溶液；7、盐酸副玫瑰 苯胺溶液；8、碘溶液[c(1/2I2)=0.100 mol/L]； ◼ 9、硫代硫酸钠标准溶液[c(Na2S2O3·5H2O)=0.100 mol/L]；10、二氧化硫标准溶液；11、二氧化硫使用 液：临用前将二氧化硫标准溶液以四氯汞钠吸收液稀 释成每毫升相当于2μg二氧化硫；12、氢氧化钠溶液 （20g/L）；13、硫酸（1+71）。 ◼ （二）、仪器:分光光度计
四、 实验步骤 (一)、样品处理 1、水溶性固体试样如白砂糖等可称取约10.00g均匀 试样（试样量可视含量高低而定），以少量水溶解， 置手100mL容量瓶中，加入4mL氢氧化钠溶液 (20g/L),5min后加入4mL硫酸(1+71)，然后 加入20L四氯汞钠吸收液，以水稀释至刻度。 2、固体试样如饼干、粉丝等可称取5.0g~10.0g研 磨均匀的试样，以少量水湿润并移入100L容量瓶 中，然后加入20mL四氯汞钠吸收液，浸泡4h以上 若上层溶液不澄清可X亚铁氰化御溶液及乙酸锌 溶液各2.5mL,最后用水稀释至100mL刻度，过滤 后备用。 液体试样如葡萄酒等可直接吸取5.0~10.0mL试 样.手OoL容毫瓶中，以少量水稀释，20 四氯汞钠吸收液，摇匀，最后加水至刻度，混匀， 必要时过滤备用
四、实验步骤 ◼ （一）、样品处理 ◼ 1、水溶性固体试样如白砂糖等可称取约10.00g均匀 试样（试样量可视含量高低而定），以少量水溶解， 置于100 mL容量瓶中，加入4mL氢氧化钠溶液 （20g/L），5min后加入4mL硫酸（1+71），然后 加入20mL四氯汞钠吸收液，以水稀释至刻度。 ◼ 2、固体试样如饼干、粉丝等可称取5.0g～10.0g研 磨均匀的试样，以少量水湿润并移入100 mL容量瓶 中，然后加入20mL四氯汞钠吸收液，浸泡4 h以上， 若上层溶液不澄清可加入亚铁氰化钾溶液 及乙酸锌 溶液各2.5mL，最后用水稀释至100 mL刻度，过滤 后备用。 ◼ 3、液体试样如葡萄酒等可直接吸取5.0～10.0 mL试 样，置于100mL容量瓶中，以少量水稀释，加20 mL 四氯汞钠吸收液，摇匀，最后加水至刻度，混匀， 必要时过滤备用
(二)、测定 ■吸取0.50ml~5.0mL上述试样处理液于25mL带塞比色 管中。 =另吸取0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.50、2.00mL二 氧化硫标准使用液（相当于0、0.4、0.8、1.2、1.6、 2.0、3.0、4.0μg二氧化硫)，分别置于25mL带塞比色 管中。 ■于试样及标准管中各加入四氯汞钠吸收液至10L,然 后再加入1mL氨基磺酸铵溶液(12g/L)、1mL甲醛溶 液(2g)及1mL盐酸副玫瑰苯胺溶液，摇匀，放置 20min。用1cm比色杯，以零管调节零点，于波长550 nm处测吸光度，绘制标准曲线比较
（二）、测定 ◼ 吸取0.50ml～5.0 mL上述试样处理液于25 mL带塞比色 管中。 ◼ 另吸取0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.50、2.00 mL二 氧化硫标准使用液（相当于0、0.4、0.8、1.2、1.6、 2.0、3.0、4.0μg二氧化硫），分别置于25mL带塞比色 管中。 ◼ 于试样及标准管中各加入四氯汞钠吸收液至10 mL，然 后再加入1 mL氨基磺酸铵溶液（12g/L）、1mL甲醛溶 液（2g/L）及1 mL盐酸副玫瑰苯胺溶液，摇匀，放置 20 min。用1cm比色杯，以零管调节零点，于波长550 nm处测吸光度，绘制标准曲线比较
五、结果计算 4×1000 X= 7 -×/×1000×1000 10 ■式中 X 测试样中二氧化硫的含量(g/kg): A一测定用样液中二氧化硫的质量（μg): m 试样质量(g); V一测定用样液的体积(mL) 计算结果表示到三位有效数字
五、结果计算 ◼ 式中 ： X——测试样中二氧化硫的含量（g/kg）； A——测定用样液中二氧化硫的质量（μg）； m——试样质量（g）； V——测定用样液的体积（mL）。 计算结果表示到三位有效数字。 1000 1000 100 1000 = V m A X
六、注意事项及说明 1、本实验法检出浓度为1mg/kg。 2、要求在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过 10%。 3、亚硫酸和食品中的醛、酮和糖相结合，以结合型的亚硫酸存在于 食品中。加碱是将食品中的二氧化硫释放出来，加硫酸是为了中和碱 这是因为总的显色反应是在微酸性条件下进行的。 ▣ 4、显色时间时显色有影响，所以在显色时要严格控制显色时间。 用 5、盐酸副玫瑰苯胺的精制方法如下：称取20g盐副玫瑰苯胺于400ml 水中，用50mL盐酸(1+5)酸化，徐徐搅拌，加4g一5g活性炭，加热 煮沸2mm。将混合物倒入大漏斗中，过滤（用保温漏斗趁热过滤）。 滤液放置过夜，出现结晶，然后再甩布氏漏斗抽滤，将结晶再悬浮于 1000mL乙醚-乙醇(10.1)的混合液中，振摇3min~5mn,以布氏漏 斗抽滤，再用乙醚反复洗涤至醚层不带色为止，于硫酸干燥器中干燥， 研细后贮于棕色瓶中保存。 6、如无盐酸副玫瑰苯胺可用盐酸品红代替。 7、氯化高汞试剂有毒，使用时应注意。 8、 氨基磺酸铵溶液不稳定，宜随配随用，隔绝空气保存，可稳定一 周
六、注意事项及说明 ◼ 1、本实验法检出浓度为1mg/kg。 ◼ 2、要求在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过 10%。 ◼ 3、亚硫酸和食品中的醛、酮和糖相结合，以结合型的亚硫酸存在于 食品中。加碱是将食品中的二氧化硫释放出来，加硫酸是为了中和碱， 这是因为总的显色反应是在微酸性条件下进行的。 ◼ 4、显色时间时显色有影响，所以在显色时要严格控制显色时间。 ◼ 5、盐酸副玫瑰苯胺的精制方法如下：称取20g盐副玫瑰苯胺于400mL 水中，用50mL盐酸（1+5）酸化，徐徐搅拌，加4g～5g活性炭，加热 煮沸2mm。将混合物倒入大漏斗中，过滤（用保温漏斗趁热过滤）。 滤液放置过夜，出现结晶，然后再用布氏漏斗抽滤，将结晶再悬浮于 1000mL乙醚-乙醇（10:1）的混合液中，振摇3min～5min，以布氏漏 斗抽滤，再用乙醚反复洗涤至醚层不带色为止，于硫酸干燥器中干燥， 研细后贮于棕色瓶中保存。 ◼ 6、如无盐酸副玫瑰苯胺可用盐酸品红代替。 ◼ 7、氯化高汞试剂有毒，使用时应注意。 ◼ 8、氨基磺酸铵溶液不稳定，宜随配随用，隔绝空气保存，可稳定一 周
七、思考题 ■1、二氧化硫标准溶液使用时为何要对其浓度 进行标定？ ■ 2、饼干、粉丝等样品处理时，加入亚铁氰化 钾溶液以及乙酸锌溶液的目的是什么？ ■做好本实验的操作要点是什么？
七、思考题 ◼ 1、二氧化硫标准溶液使用时为何要对其浓度 进行标定？ ◼ 2、饼干、粉丝等样品处理时，加入亚铁氰化 钾溶液以及乙酸锌溶液的目的是什么？ ◼ 做好本实验的操作要点是什么？